Что такое фолликулы в яичниках у женщин: Фолликулогенез. Ультразвуковое обследование в АМЦ – Барнаул

Содержание

Ученые дают надежду женщинам с преждевременной менопаузой

Підпис до фото,

Доктор Казухиро Кавамура из Медицинской школы Университета им. Святой Марианны с малышом, родившимся благодаря технологии «пробуждения» яичников

Группа врачей из США и Японии помогли забеременеть женщине, у которой началась преждевременная менопауза, использовав технологию «пробуждения» яичников. Недавно эта женщина родила здорового малыша.

Технология, использованная врачами, заключается в том, что женщине удаляют яичники, активируют их в лабораторных условиях, а затем пересаживают пациентке фрагменты ткани яичников.

С помощью этого метода уже родился один ребенок, а вскоре на свет должен появиться еще один.

Ученые говорят, что выводы об эффективности их технологии делать рано, но потенциально их метод может стать революционным.

К своему эксперименту ученые привлекли 27 молодых женщин в возрасте около 30 лет, которые не могли забеременеть из-за так называемого синдрома истощения яичников. Сегодня этот синдром наблюдается у каждой 100-й женщины. Он проявляется в том, что у женщины преждевременно заканчиваются жизнеспособные яйцеклетки, в результате чего наступает ранняя менопауза.

От рождения у женщины есть определенное количество яйцеклеток. Но в случае синдрома истощения яичников, яйцеклетки либо быстро заканчиваются, либо их количество невелико с самого рождения.

Разбудить яичники

Яйцеклетки в яичнике находятся в полусформированном виде — в форме фолликулов. Каждый месяц у женщины созревает одна или несколько яйцеклеток.

Команда ученых из Стэнфордского университета (США) и Медицинской школы Университета им. Святой Марианны (Япония) попытались активизировать яйцеклетки, которые еще оставались в яичниках женщин, переживающих менопаузу.

Ученые удалили женщинам яичники, а потом попытались «разбудить» спящие яйцеклетки. Сначала ученые разделили яичники на несколько фрагментов, а потом обработали их специальным реагентом с активизирующим свойством. После этого фрагменты яичника подсаживали женщинам, которые с того времени должны были пройти курс гормонотерапии.

После завершения курса терапии ученые провели обследование и увидели, что восемь из испытуемых женщин демонстрируют признаки развития яичных фолликулов. Образующиеся таким образом яйцеклетки ученые в дальнейшем использовали для искусственного оплодотворения. На сегодня с помощью этого метода уже появился на свет один малыш, а рождения еще одного ждут счастливые родители.

Профессор Аарон Хсуе из Стэнфордского университета рассказал, что разработанный его командой метод требует совершенствования и по предварительным подсчетам, может помочь 25-30 % женщин.

«Думаем, этот метод может использоваться еще в двух случаях: для женщин, которые преодолели рак и прошли курс химио — или радиотерапии. Если у них остались фолликулы яйцеклеток, есть шанс, что этот метод может помочь. Вторая категория — женщины в возрасте 40-45 лет с нерегулярным менструальным циклом», — говорит Хсуе.

Большой интерес

Последствия применения этого метода для женщин с преждевременной менопаузой пока неизвестны, поскольку эта технология требует дальнейшего тестирования и совершенствования, прежде чем ее можно будет применять в больницах.

«Это очень умное изобретение, но сработает ли оно для всех? Этого мы не знаем. Потенциально, эта технология является чрезвычайно интересной, но нужно провести больше исследований, чтобы можно было с уверенностью сказать, что это не очередной повод для ложной надежды», — высказывает свое мнение профессор Чарльз Кингсланд из ливерпульской женской больницы и Королевского колледжа акушеров и гинекологов.

Профессор Ник Маклон из Саутгемптонского университета также с оптимизмом воспринимает новую технологию. «Найти новый способ производить яйцеклетки путем пробуждения спящих фолликулов — звучит очень обнадеживающе. Это может стать настоящим прорывом. Это очень важный и захватывающий научный эксперимент, но пока этот метод недостаточно исследован для использования в больницах», — говорит Маклон.

По мнению господина Маклона, применить этот метод за пределами лаборатории будет невозможно, но все же лучшее понимание механизмов развития яйцеклетки может помочь в поиске новых путей лечения бесплодия.

По материалам статьи Джеймса Галлахера, корреспондента по вопросам науки и здоровья, BBC News

Японские медики успешно вылечили женщин от бесплодия: для этого они взяли яичники, активировали их и вставили обратно

Чтобы исцелить женщину от бесплодия, нужно побудить к развитию ее дремлющую яйцеклетку. Для этого потребовалось извлечь яичники, активировать их и вставить обратно.

Некоторые ученые уподобляют человеческий организм механизму, в котором негодные части можно просто заменять, а еще лучше — чинить: вынул, поправил и вставил на место. Таким странным на первый взгляд методом специалисты медицинского факультета Университета Cв. Марианны (Кавасаки, Япония) и еще нескольких японских университетов и клиник, а также Стэнфордского университета (США) предлагают стимулировать образование яйцеклеток женщин репродуктивного возраста, страдающих первичной недостаточностью яичников. В работе, опубликованной в журнале Proceedings of the National Academy of Sciences, исследователи сообщают, что одна из их пациенток ждет ребенка, а другая родила здорового мальчика.

Яичники новорожденной девочки содержат около 800 тыс. зародышевых фолликулов, в каждом из которых заключена незрелая яйцеклетка. Когда приходит срок, яичники вырабатывают эстрогены, под действием которых фолликулы начинают один за другим расти. Раз в месяц яйцеклетка, готовая к оплодотворению, покидает созревший фолликул и движется по фаллопиевой трубе. Остальные фолликулы в это время дремлют, и многие из них останутся в таком состоянии десятки лет. У женщин, больных первичной недостаточностью яичников, выработка эстрогенов по непонятным причинам прекращается очень рано, и они входят в менопаузу еще до сорока лет. Для них единственный шанс родить ребенка — донорская яйцеклетка.

Но исследователи предположили, что в яичниках этих женщин сохранились собственные недозрелые яйцеклетки и надо лишь активизировать их.

Работая с мышами, ученые выяснили, что рост фолликула в яичнике контролирует сигнальный белок PTEN. Если заблокировать его действие, спящий фолликул начинает расти, и в нем созревает яйцеклетка. Так родился новый метод для получения зрелых яйцеклеток — активация in vitro — in vitro activation (IVA). В нем блокировку действия PTEN для большей эффективности сочетают с другим методом, известным с 1930-х годов: если механически повредить неактивный яичник, разрезав его или проделав дырочку, в нем иногда начинают созревать яйцеклетки. Этот метод использовали для лечения женщин с поликистозным синдромом яичников, также вызывающим бесплодие.

Оказалось, что механическое повреждение яичника вызывает полимеризацию клеточного белка актина, что, в свою очередь, влияет на сигнальный путь, называемый Hippo, который регулирует рост и размер многих органов.

В яичниках он следит за тем, чтобы одновременно росли и развивались лишь несколько фолликулов, а не все разом. В мышиных яичниках, сначала поврежденных механически, а затем обработанных препаратом, который блокирует активность PTEN, созревает больше фолликулов, чем под действием каждого из факторов.

Испытав метод на мышах, исследователи решились опробовать его на людях. Для тестирования отобрали 27 японок от 28 до 43 лет с ранней менопаузой (она началась от четырех до восьми лет назад). Обследование показало, что лишь у 13 пациенток в яичниках есть незрелые фолликулы.

Этим женщинам удалили оба яичника, разрезали их на кусочки и обработали лекарством, блокирующим активность PTEN. Затем кусочки через прокол вернули в женский организм, поместив рядом с фаллопиевыми трубами.

С помощью ультразвукового обследования и определения уровня гормонов ученые обнаружили рост фолликула у восьми женщин. Им назначили гормонотерапию, обычную для экстракорпорального оплодотворения, чтобы стимулировать овуляцию. Яйцеклетки созрели у пяти пациенток, их собрали, оплодотворили спермой партнеров, и образовавшиеся эмбрионы на стадии четырех клеток ввели в матку.

Одна из дам не смогла забеременеть, вторая ждет ребенка, а третья благополучно родила здорового мальчика — правда, при помощи кесарева сечения.

Еще две женщины готовятся к пересадке эмбриона.

Метод получился сложным, многоэтапным, с потерями на каждом этапе. Однако начало положено. Исследователи собираются искать лекарства, влияющие на сигнальные пути Hippo и PTEN, которые позволили бы не удалять яичники. Кроме того, они планируют проверить, годится ли новый метод для помощи женщинам, страдающим другими формами бесплодия, в том числе вызванными химиотерапией или облучением. Авторы надеются, что со временем он станет столь же рутинной процедурой, как экстракорпоральное оплодотворение, но для этого понадобится еще несколько лет.

ЭКО при снижении овариального резерва, оценка овариального резерва в Ярославле

Представление о фолликулярном запасе (резерве) позволяет оценить истинный репродуктивный возраст женщины, который может отличаться от ее фактического возраста. Негативное воздействие на фолликулярный запас имеют следующие факторы: возраст старше 37-39 лет, оперативное лечение матки и придатков, включая внематочные беременности и миомы, кисты яичников; химио-лучевая терапия онкологических заболеваний, врожденно невысокий овариальный (фолликулярный ) резерв.

Определение фолликулярного резерва — возможность прогнозировать реальную возможность женщины стать мамой, как самостоятельно, так и с помощью вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Показатели фолликулярного запаса дают врачу-репродуктологу возможность подбора оптимального протокола стимуляции овуляции, необходимого для получения яйцеклеток, пригодных для оплодотворения: безопасного — при высоком и очень высоком фолликулярном резерве и максимально эффективного — при сниженном.

Оценка овариального резерва

Существуют многочисленные исследования, посвященные изучению различных показателей для оценки фолликулярного резерва и прогнозирования ответа яичников на стимуляцию: возраст, количество антральных фолликулов, объем яичников, показатели фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), АМГ, ингибина В, тестостерона.

В практической гинекологии и репродуктологии фолликулярный резерв оценивается, прежде всего, по эхографическим данным: количеству антральных фолликулов в яичниках, и биохимическому показателю — уровню антимюллерова гормона (АМГ) в периферической крови.

Показатель уровня АМГ сопряжен — в первую очередь — с количеством фолликулов в яичниках. Соответственно, дает доктору возможность проводить оптимальную стимуляцию овуляции для получения яйцеклеток в рамках программы ЭКО, что достоверно повышает вероятность наступления беременности в результате лечения.

Безусловно, врач учитывает все факторы, которые могут оказывать влияние на успех лечения. При этом АМГ — неотъемлемая составляющая обследования женщины при бесплодии.

ВАЖНО: тест на АМГ дает каждой женщине возможность для долгосрочного планирования беременности. Современная медицина сегодня успешно сохраняет яйцеклетки для отсроченного проведения ЭКО. Заморозить яйцеклетки можно в раннем репродуктивном возрасте, чтобы подарить себе уверенность в том, что у вас обязательно будут родные здоровые дети. Тогда, когда вы сами будете к этому готовы.

Пройти исследование АМГ можно в любой из клиник ГК «Мать и Дитя». Для этого нужно сдать анализ крови в любой день менструального цикла.

🧬 ВелЭКОлепный ответ

Первому человеку, который рожден благодаря методу ЭКО, сейчас уже 38 лет. Жительница Великобритании Луиза Браун была «зачата в пробирке», и ее жизнь ничем не отличается от нашей с вами. А это значит, что многие бесплодные пары, доверившись врачам-репродуктологам, могут стать счастливыми родителями абсолютно здоровых малышей, отмечает кандидат медицинских наук, медицинский директор GMS ЭКО, акушер-гинеколог, репродуктолог, эндокринолог Анна Морозова.

Кто обращается к репродуктологам?

Среднестатистический портрет пациентки любых клиник — это женщина в возрасте 35-42 лет, которой в силу тех или иных причин не удалось зачать ребенка естественным путем.

Индивидуальный подход к каждой будущей маме — то, что в первую очередь обеспечивает успех экстракорпорального оплодотворения. Именно он повышает положительную результативность.

Современные методы ЭКО включают в первую очередь предимплантационную диагностику, в ходе которой у эмбрионов выявляется патология. Таким образом, мы, во-первых, не переносим патологические эмбрионы в полость матки, и, во-вторых, уменьшаем количество «пустых» переносов — когда беременность точно не наступит.

К нам обращаются пары, у которых изначально есть патология хромосом. И они хотят, чтобы у них родились здоровые дети. Диагностика позволяет работать с их клетками, определять хромосомный набор будущих малышей и отбраковывать некачественный материал. И тем самым мы даем возможность родителям иметь здоровое поколение.

Из каких этапов состоит ЭКО?

Стоит разделить подготовку к экстракорпоральному оплодотворению и непосредственно проведение процедуры, которая осуществляется в амбулаторных условиях и длится не более 15 минут. Подготовка к ЭКО делится на три стадии:

  • инвазивное исследование, которое обычно занимает одну неделю;
  • стимуляция работы яичников;
  • пункция.

В норме у женщины растет один фолликул в яичнике. Достигая доминантного размера, он лопается, яйцеклетка выходит из яичника, попадает в маточную трубу, где и встречается со сперматозоидом. Ура, все прошло хорошо — наступает беременность, эмбрион формируется и опускается в полость матки.

У многих женщин в цикле растет один фолликул. Наша задача — получить в ходе подготовки к ЭКО не один, а хотя бы 7-10 фолликулов. Для этого необходимо работу яичников «подстегнуть» с помощью медикаментов. У пациентки вырастают те самые 7-10 фолликулов, и задача медиков — не допустить, чтобы они самостоятельно лопались. И здесь наступает третий этап — пункция, в ходе которой у женщины и забираются фолликулы для дальнейшего оплодотворения.

Не каждый фолликул содержит яйцеклетку, и не каждая яйцеклетка, которую мы получаем, бывает качественной, и не все эмбрионы дорастают до нужной нам стадии, и не всегда беременность наступает с первого раза. Именно ввиду этих «не» врачи и стимулируют выработку женским организмом дополнительных фолликулов и выращивают несколько эмбрионов, с которыми повторяют протокол — а именно так называется последовательность процедур, начиная с момента медикаментозной терапии и заканчивая переносом эмбриона в полость матки.

Если пара приходит на прием и мы понимаем, что, как я обычно говорю, случилась любовь между врачом и пациентом, то сдавать анализы можно буквально на следующий день. С их результатами все в порядке? В таком случае в ближайший первый день менструального цикла мы можем начинать работать с нашей пациенткой. В течение 14 дней происходит стимуляция и пункция, в следующие 2 недели осуществляется оплодотворение яйцеклетки и перенос эмбриона. И через две недели мы уже получаем ответ: случилась беременность или нет. Это происходит за один менструальный цикл, 28-30 дней.

Какие есть противопоказания и мифы, связанные с искусственным оплодотворением?

На сегодняшний день единственным противопоказанием для проведения процедуры ЭКО, как говорится в приказе Минздрава N 107-н, остаются онкологические заболевания. Тем не менее, и здесь есть исключения. Если онколог считает, что стимуляция работы яичников и в целом процедура ЭКО конкретной пациентке не противопоказана, репродуктологи могут спокойно работать с этой, надеемся, будущей мамой.

Как известно, в результате химиотерапии убиваются различные клетки, и клетки яичников также не минуют печальной участи. Поэтому очень часто онкобольные женщины сначала приходят к нам на консультацию, мы, с разрешения онколога, работаем с их яичниками, стимулируем, пунктируем, получаем эмбрионы, замораживаем их, отпускаем людей на лечение ракового заболевания и возвращаемся к ЭКО после выздоровления. Что важно отметить: Всемирная организация здравоохранения доказала, что дети, которые рождаются после ЭКО, абсолютно не отличаются от малышей, которых зачали естественным способом, и процедура ЭКО не провоцирует развитие онкологических заболеваний.

По сути единственными противопоказаниями к проведению ЭКО остаются психическое заболевание и поздний репродуктивный возраст женщины. Да, существует такая проблема, как раннее истощение фолликулярного запаса. Но следует понимать: даже если я на приеме говорю женщине, что у нее не осталось собственных яйцеклеток, это еще не значит, что мы поставили крест на ее беременности. Активно развивается такое направление, как использование донорских клеток. Мы можем использовать яйцеклетки другой женщины с тем, чтобы оплодотворить их спермой супруга. Затем эмбрион подсаживается нашей пациентке. Она вынашивает малыша, и осознание того, что генетически это не ее малыш, быстро стирается. Ребенок становится действительно родным.

И еще один, пожалуй, важнейший момент. По статистике, каждая пятая пара страдает бесплодием. И порой причина не в женских яйцеклетках.

Проблема мужского бесплодия может заключаться в неподвижности сперматозоидов. Им бывает достаточно тяжело «добежать» до яйцеклетки даже в колбе. Поэтому, если такие особенности выявляются именно у мужчины, эмбриолог дополняет ЭКО процедурой ИКСИ: после надреза цитоплазмы сперматозоид подсаживают непосредственно в яйцеклетку. Что также увеличивает шансы на успех.

Какова статистика положительных результатов?

Чем моложе женщина, тем больше процент вероятной беременности. Как показывает практика, у пациенток в возрасте 25-30 лет успешными становятся более половины попыток. У женщин в возрасте 30-35 лет беременность наступает в 30-40% случаев (речь об одной попытке ЭКО). После 37 лет шансы резко падают с 30% до 10%. И, наконец, процент наступления беременности у женщин после 40 лет — это 1-2%. Конечно, следует всегда быть морально готовой к тому, что с первого раза может «не получиться». Есть примеры, когда женщины беременели с 10 или 11‑й попытки. В целом же мировая статистика говорит о том, что стать мамой у пациентки получается с пятого раза.

Яичники / Женская анатомия — Александр Никитин. Тел: +7(926)278-67-02

Яичник — это орган, который одновременно является железой, которая выделяет в кровь гормоны и «заводом» по производству яйцеклеток. Яичники располагаются по бокам от матки и имеют форму, напоминающую мяч для регби. К стенке таза яичники прикреплены связкой, подвешивающей яичник. В ней проходят яичниковые артерия и вена — главные источники его кровоснабжения. Другой стороной яичники прикреплены к матке с помощью связки, которая называется собственной связкой яичника.

В первой фазе менструального цикла в яичнике образуется так называемый доминантный фолликул, в котором созревает яйцеклетка. Доминантный фолликул — это финальный этап развития фолликула. Еще до рождения в яичнике будущей женщины заложено 1-2 миллиона так называемых примордиальных фолликулов. Большая часть из них погибает, другая часть, пройдя несколько стадий развития, становятся доминантными и дают рождение новой яйцеклетке. В репродуктивном периоде женщины, то есть от начала менструаций до климакса запрограммировано 300 — 400 овуляций. То есть столько менструальных циклов должно пройти. Различные заболевания яичников, оперативные вмешательства на них снижают овуляторный резерв. Овуляторный резерв — это запас фолликулов, которые должны стать доминантными. То есть количество будущих овуляций и, соответственно, менструальных циклов.

Одновременно фолликул является железой, которая вырабатывает эстрогены — женские половые гормоны. В середине цикла (примерно 14 день) фолликул лопается и выпускает яйцеклетку. Это называется овуляцией. На месте фолликула после овуляции образуется желтое тело.

Желтое тело

Желтое тело — это структура шаровидной формы, формирующаяся на месте фолликула после овуляции. Если фолликул — это полостное образование, содержащее жидкость, то желтое тело — это формирование, целиком состоящее из клеток. На разрезе его ткань имеет желтый цвет. Отсюда и название. Желтое тело — это железа, которая вырабатывает прогестерон — гомон беременности. То есть оно нужно для гормональной поддержки беременности в период до формирования плаценты. Затем плацента сама вырабатывает необходимые гормоны.

Преждевременное истощение функции яичников | Клиническая больница №122 имени Л.Г.Соколова Федерального Медико-Биологического Агентства

Яичник — уникальный орган женщины, функционирование которого прекращается задолго до конца ее жизни. Физиологическая менопауза наступает в тот период, когда количество фолликулов в яичнике достигает определенной критической  величины (от 100 до 1000) и прекращается их созревание. Средний возраст женщин, когда они достигают менопаузы, в норме около 50 лет, почти у 1% женщин — к 60-ти годам и у 1–2% — до 40 лет. Симптомокомплексы, формирующиеся у женщин моложе 40 лет  и проявляющиеся вторичной аменореей, признаками врожденной гипоэстрогении и бесплодием на фоне повышенного уровня гонадотропинов — ФСГ (фолликулостимулирующий гормон) и ЛГ (лютеонизирующий гормон) — принято называть «преждевременным истощением функции яичников» или «преждевременной овуляторной недостаточностью» (ПОН).

Существует множество теорий, объясняющих преждевременное истощение фолликулярного аппарата яичников. Одной из причин его являются хромосомные аномалии, в частности наличие трех Х-хромосом. Также установлено, что различные неблагоприятные факторы, как в антенатальном, так и в постнатальном периоде (радиация, химические вещества, лекарственные препараты, вирусы гриппа, краснухи, паротита), могут привести к повреждению гонад и замещению их соединительной тканью и апоптозу гормонально-активных клеток. Синдром истощения яичников может развиваться и после различных хирургических вмешательств, особенно после резекции по поводу кист или апоплексии.

Клинические проявления

  • Отсутствие менструации более 6 месяцев у женщин репродуктивного возраста, имевших в прошлом нормальную менструальную и генеративную функции;
  • Бесплодие;
  • Приливы и другие вегетативно-сосудистые нарушения.
Лечение
Лечение направлено на профилактику и терапию эстрогендефицитных состояний: вегетативно-сосудистых нарушений, урогенитальных расстройств, и сердечно-сосудистых заболеваний и выражается в индивидуальном подборе заместительной гормональной терапии. Восстановление генеративной функции возможно путем экстракорпорального оплодотворения с донорской яйцеклеткой.
Центр здоровья

Овариальный резерв у женщин

Возраст женщины является одним из важных факторов, влияющих на эффективность методов ВРТ, поскольку этот параметр напрямую связан с качеством яйцеклеток, находящихся в яичниках. Этот параметр не является абсолютным, поскольку у 45-летней женщины могут быть яйцеклетки хорошего качества и она к данному моменту будет все еще фертильна – хотя именно эта ситуация больше нестандартная, чем обычная.

С другой стороны, в некоторых случаях встречаются женщины, у которых и в 25 лет отмечается наличие «некачественных» яйцеклеток, нуждающиеся даже в донорских яйцеклетках.

Эти крайние примеры, однако, вполне существующие, привели к необходимости того, что стало нужным каким-то образом оценивать количество и качество яйцеклеток у женщин различных возрастных групп. Именно с этой целью и было введено понятие «овариальный резерв», поскольку возникла необходимость оценивать репродуктивный возраст женщины, не как абсолютное число лет со дня ее рождения, а как ее реальную существующую способность к беременности.

Овариальный резерв – это количество яйцеклеток у женщин в данный момент времени, которые могут быть использованы для оплодотворения.

Но как их посчитать, они же находятся в яичниках? С это целью предложен ряд функциональных тестов, о которых Вы немного сможете узнать в этом разделе.

Подсчет количества антральных фолликулов

Антральные фолликулы – это фолликулы небольшого размера (2-8 мм в диаметре), которые мы можем увидеть, измерить и посчитать при ультразвуковом исследовании. Трансвагинальное ультразвуковое исследование является оптимальным методом для подсчета этих небольших структур.

Дело в том, что количество антральных фолликулов имеет прямое соотношение с количеством примордиальных фолликулов, видимых только при микроскопическом исследовании, находящихся в яичниках. Каждый примордиальный фолликул содержит предшественник яйцеклетки, который в будущем может ею стать.

Таким образом, подсчет антральных фолликулов, видимых при ультразвуковом исследовании, заменяет микроскопическое исследование яичников для точной оценки количества предшественников яйцеклеток.

Подсчет антральных фолликулов при ультразвуковом исследовании — простой и доступный метод для оценки овариального резерва.

На рисунке 1 слева изображен яичник (обведен синим), в котором произведен подсчет антральных фолликулов в начале менструального цикла (отмечены красным). В данной проекции яичника видно 16 таких фолликулов.

Какие же количество антральных фолликулов является «хорошим»?

По ряду исследований зарубежных авторов выявлена следующая закономерность:

Количество антральных фолликулов

Ожидаемый ответ на стимуляцию овуляции и эффективность методик ВРТ

Менее 4

Очень низкое количество. Бедный или отсутствие ответа на стимуляцию. Серьезно следует рассмотреть вопрос о включении в программу ЭКО. Очень низкая вероятность наступления беременности.

4-7

Низкое количество. Возможен незначительный ответ на стимуляцию. Преимущественно использование очень высоких доз ФСГ для стимуляции. Неудачные попытки.

8-10

Несколько сниженное количество. Большое количество неудачных попыток.

11-14

Нормальное (но среднее) количество. Ответ на стимуляцию сниженный, но, как правило, достаточный. Группа с благоприятным прогнозом для наступления беременности.

15-26

Нормальное хорошее количество. Отличная реакция на стимуляцию овуляции. Предпочтительно использование невысоких доз ФСГ. Наилучшая эффективность.

Более 26

Высокое количество, характерное для синдрома поликистозных яичников. Необходимо использование низких доз, в связи с риском синдрома гиперстимуляции. В некоторых случаях яйцеклетки низкого качества, что снижает вероятность беременности.

Содержание фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) на 2-3 день менструального цикла.

Этот показатель также является важным маркером состояния овариального резерва.

По отечественным данным выделяют следующие границы концентраций:

  • 3-8 МЕ/л – норма, предполагается хороший ответ на стимуляцию;
  • 8-10 МЕ/л – ответ может колебаться от нормального до умеренно сниженного;
  • 10-12 МЕ/л – низкий овариальный резерв, сниженный ответ на стимуляцию;
  • 12-17 МЕ/л – плохой ответ на стимуляцию и низкая частота наступления беременности;
  • Больше 17 МЕ/л – очень плохой ответ на стимуляцию.

Вычисление объема яичника

Формула для расчета объема яичника следующая:

Объем яичника = 0,532 х длина х ширина х толщина.

Что могут сказать данные об объеме яичника? Если у женщины объем яичника менее 8 см?, то предполагается низкий овариальный резерв, если более 12 см? — высокий овариальный резерв.

Содержание антимюллерова гормона (АМГ) и ингибина В.

Наиболее информативным является тест, который позволяет определять содержание антимюллерова гормона. У женщин выработка этого гормона осуществляется в гранулезных клетках и достигает максимума в преантральных и антральныхх фолликулах 4 мм в диаметре.

В фолликулах большего размера, а также в фолликулах более 8 мм в диаметре, секреция этого вещества отсутствует.

На рисунке 2 схематично представлены действия АМГ в яичнике:

Схематично изображен рост фолликулов. Показано, что антимюллеров гормон продуцируется первичными и преантральными фолликулами и имеет преимущественно 2 типа воздействия на яичник: 1 – подавляет первичные стадии роста фолликулов, 2- подавляет ФСГ-зависимый рост и селекцию преантральных и небольших антральных фолликулов.

На основании ряда исследований установлено, что содержание АМГ в сыворотке крови напрямую связано с содержанием антральных фолликулов, то есть на основании данных анализа можно проводить оценку состояния овариального резерва. Показано также, что, чем ниже содержание этого гормона в крови, тем хуже ответ яичников на проводимую стимуляцию овуляции.

Интересен тот факт, что антимюллеров гормон может быть использован не только для оценки состоянии овариального резерва, но также и для оценки патофизиологического состояния яичников, например, для подтверждения наличия поликистоза яичников, поскольку при этом заболевании увеличен пул именно антральных фолликулов небольшого размера. Этот показатель может не только являться маркером наличия заболевания, но также и критерием, который позволит оценивать тяжесть нарушений при поликистозе яичников.

Исследование содержания антимюллерова гормона можно проводить в любой день цикла, поскольку его содержание в течение цикла практически не изменяется. По данным других ученых, исследование содержания антимюллерова гормона лучше проводить на 3-5 день цикла. Эти данные могут быть использованы при подготовке к проведению ВРТ с целью объективной оценки состояния яичников, а также выбора правильного протокола стимуляции.

На основании оценки ряда вышеперечисленных показателей можно сделать заключение о состоянии овариального резерва женщины:

Низкий овариальный резерв предполагается, если:

  • возраст пациентки превышает 35 лет;
  • уровень ФСГ на 2-3 д.м.ц. более 10МЕ/л;
  • число антральных фолликулов менее 10 мм в диаметре на 2-3 д.м.ц. менее 5 в каждом яичнике;
  • объем яичника менее 8 см³;
  • низкое содержание антимюллерова гормона.

Высокий овариальный резерв предполагается, если:

  • возраст пациентки менее 35 лет;
  • уровень ФСГ на 2-3 д.м.ц. менее 8МЕ/л;
  • число антральных фолликулов менее 10 мм. в диаметре на 2-3 д.м.ц. более 10 в каждом яичнике;
  • объем яичника более 12 см³;
  • высокое содержание антимюллерова гормона.

Далее:
» Лапароскопия и ЭКО

См. также:

Услуги по лечению бесплодия в клинике «Я здорова!»

  • Консультация д.м.н., профессора акушера-гинеколога
  • Консультация к.м.н. репродуктолога
  • Оценка фертильности супружеской пары и диагностика факторов бесплодия
  • Консультация д.м.н. урологом-андрологом
  • Обследование супруга и составление «паспорта фертильности» в соответствии с международными стандартами
  • Экспертное УЗИ органов малого таза с допплерометрией
  • Проверка проходимости маточных труб (ультрасоногистерография, гистеросальпингография)
  • Вспомогательные репродуктивные технологии (искусственная инсеминация, ЭКО, ИКСИ, ПИКСИ)

Пошаговые действия по диагностике бесплодия

Пошаговые действия по программе ЭКО

Эмбриология, развитие фолликулов яичников — StatPearls

Введение

Яичник выполняет две основные функции. Во-первых, яичник вырабатывает гормоны, которые стимулируют женскую репродуктивную систему. Во-вторых, яичник контролирует развитие, отбор и выпуск зрелого ооцита для оплодотворения. Этот процесс, известный как фолликулогенез яичников, начинается, когда самка находится в утробе матери. После полового созревания примордиальные фолликулы могут посредством многоступенчатого процесса трансформироваться в зрелые преовуляторные фолликулы.[1]

Развитие

Развитие фолликулов яичников начинается во время внутриутробного развития плода женского пола. На пятой неделе беременности яичник женского плода содержит от 500 до 1300 первичных половых клеток. Первичные половые клетки подвергаются митозу, и к двадцатой неделе беременности плод женского пола имеет примерно от 6 до 7 миллионов половых клеток. После завершения митоза половые клетки вступают в мейоз и останавливаются в профазе I мейоза, образуя цисты половых клеток. В послеродовой период каждая киста зародышевых клеток регрессирует с образованием примордиального фолликула, содержащего ооцит и единственный слой питательных клеток гранулезы.Во время этого процесса теряется много половых клеток, и у женщины рождается от одного до двух миллионов первичных фолликулов. К тому времени, когда она достигает половой зрелости, остается от 400 000 до 500 000 примордиальных фолликулов. После менархе ежемесячно теряется около 1000 фолликулов. После 35 лет скорость потери фолликулов увеличивается. [2] [3] [4] [5] [6]

Существует две различные фазы развития фолликула яичника: гонадотропин-независимый рост и гонадотропин-зависимый рост. Эти фазы также известны как преантральный рост и антральный рост соответственно.Гонадотропины — это фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ). ФСГ и ЛГ производятся и высвобождаются из передней доли гипофиза после стимуляции гонадотропин-рилизинг-гормоном (ГнРГ) из гипоталамуса. ФСГ контролирует рост фолликулов через пролиферацию гранулезных клеток, а ЛГ контролирует овуляцию. [5] [7] [8]

Развитие фолликулов яичников происходит в периферической коре яичников. Для созревания примордиального фолликула до овуляции требуется примерно 1 год.Большую часть этого времени проходит в гонадотропин-независимой (преантральной) фазе. Гонадотропин-независимый рост зависит от местных факторов роста, начиная с созревания примордиального фолликула и заканчивая тем, что в фолликуле разовьется заполненное жидкостью пространство. Первичные фолликулы переходят в первичные фолликулы за счет увеличения ооцитов и пролиферации слоя гранулезных клеток, которые затем начинают экспрессировать рецепторы ФСГ. Когда первичные фолликулы становятся вторичными фолликулами, простой кубовидный эпителий первичного фолликула трансформируется в многослойный столбчатый эпителий.Строма первичного фолликула обеспечивает кровоснабжение и дифференцируется на внутреннюю и внешнюю теки. Внутренняя тека вырабатывает рецепторы ЛГ. Рецепторы ФСГ и ЛГ позволяют фолликулу реагировать на соответствующие гонадотропины. [5] [6] [7]

Дальнейшее созревание вторичных фолликулов и выбор доминантного фолликула для овуляции зависит от гонадотропинов. ФСГ связывается с рецепторами ФСГ в слое клеток гранулезы вторичного фолликула. В ответ на стимуляцию ФСГ фолликулы продолжают расти и образовывать пространство, заполненное жидкостью.Это пространство называется антральным отделом и содержит секреторный материал из растущих ооцитов и клеток гранулезы. ЛГ связывается с рецепторами ЛГ внутренней теки, что приводит к выработке андрогенов. Эти андрогены способствуют не только росту фолликулов, но также способствуют их потере через апоптоз. По мере созревания фолликулов яичников более крупные фолликулы могут использовать фермент ароматазу для преобразования упомянутых выше андрогенов в эстроген. [2] [5] [6] [7] [8]

Повышение уровня эстрогена посылает сигнал отрицательной обратной связи по оси гипоталамус-гипофиз-надпочечники (HPA), снижая уровни циркулирующего ФСГ.Большие фолликулы остаются чувствительными к снижению уровня ФСГ. В качестве доминирующего фолликула выбирается крупный фолликул, который продолжает созревать благодаря быстрой пролиферации клеток гранулезы и теки. Антральный отдел также быстро увеличивается. Фолликулы меньшего размера, которые развивались, но не были выбраны в качестве доминирующих фолликулов во время этого цикла, дегенерируют, потому что их небольшой размер снижает их чувствительность к ФСГ. Клетки гранулезы доминантного преовуляторного фолликула вырабатывают высокие концентрации рецепторов ЛГ и становятся чувствительными к выбросу ЛГ.Всплеск ЛГ вызван дальнейшим увеличением циркулирующего эстрогена, вырабатываемым преовуляторным фолликулом, и приводит к овуляции. Во время овуляции фолликул выпускает зрелый ооцит для оплодотворения. [5] [6] [7]

После овуляции пустой фолликул развивается в желтое тело, поскольку клетки гранулезы и тека становятся лютеиновыми клетками гранулезы и клетками лютеина тека соответственно. Желтое тело выделяет прогестерон и эстроген для поддержки имплантации и ранней беременности. Если имплантация не происходит, желтое тело перерождается в структуру соединительной ткани, известную как белое тело.[7]

Клиническая значимость

Аномальное развитие фолликулов является отличительной чертой синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), заболевания, характеризующегося увеличением поликистозных яичников, ненормальным менструальным кровотечением и повышением выработки андрогенов. По сравнению с женщинами без СПКЯ в яичниках пациентов с СПКЯ как минимум в два раза больше растущих преантральных и антральных фолликулов. Кроме того, эти фолликулы не развиваются должным образом. Многие фолликулы не проходят антральную стадию, накапливают лишнюю жидкость, теряют границу гранулезных клеток и перерождаются в кистозные структуры.Пациенты с СПКЯ также имеют повышенные уровни ЛГ, андрогенов и инсулина и пониженные уровни ФСГ. Точный механизм, приводящий к кистозным изменениям, связанным с СПКЯ, остается неизвестным. Кистозные изменения могут вызвать ановуляторное бесплодие. [9]

Преждевременная недостаточность яичников встречается редко и чаще всего проявляется как потеря яичникового резерва, определяемая как уменьшение количества примордиальных фолликулов до 40 лет. Пациенты обращаются с отсутствием менструации и нарушением развития фолликулов яичников, что приводит к симптомам менопаузы и бесплодия.Преждевременная недостаточность яичников также может проявляться у пациентов, которые никогда не достигают менархе из-за дисгенезии яичников [10].

Правильное понимание развития фолликулов яичников важно при консультировании пациентки относительно ее фертильности. Медицинские работники должны понимать и объяснять оценку фолликулярного резерва яичников и потенциальную пользу вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), включая экстракорпоральное оплодотворение и контролируемую гиперстимуляцию яичников . Как обсуждалось ранее, женщины в возрасте до 35 лет теряют около 1000 примордиальных фолликулов в месяц, и этот показатель увеличивается после 35 лет.Если пациентка нуждается или желает АРТ, важно оценить резерв яичников пациента, чтобы обеспечить безопасность пациента и определить ожидания. Статус яичникового резерва связан с образованием антральных фолликулов, которые можно измерить с помощью трансвагинального ультразвукового исследования. Уменьшение количества антральных фолликулов коррелирует со снижением резерва яичников и снижением фертильности. Пациенты с меньшим овариальным резервом с меньшей вероятностью ответят на стимуляцию яичников, а женщины с большим овариальным резервом имеют повышенный риск серьезных побочных эффектов.Знание индивидуального овариального резерва пациента позволит медицинским работникам определить репродуктивную способность пациента до и во время АРТ и установить соответствующий режим АРТ. [7] [11] [12]

Женская репродуктивная система: Руководство по гистологии

Формирование яйцеклетки

Развитие фолликулов

Первичные половые клетки размножаются во время внутриутробного развития. При рождении, яичник содержит около 400 000 примордиальных фолликулов, которые содержат первичные ооциты.Эти первичные ооциты не подвергаются дальнейшему митотическое деление, и они остаются арестованными на стадии профазы деления мейоза I , до половой зрелости (см. Мейоз, в ячейке темы). Сравните это с мужчиной гаметогенез.

При половом созревании два гормона, вырабатываемые гипофизом. железа: фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютенизирующий гормон (ЛГ) причина эти примордиальные фолликулы развиваются. В каждом яичниковом цикле около 20 примордиальных фолликулов активируются, чтобы начать созревание.тем не мение, обычно полностью созревает только один фолликул, а остальные способствуют эндокринная функция яичника.

При активации первый мейотик деление завершено. Когда это происходит, первичный фолликул имеет созрел в вторичных фолликул . Затем начинается второй дивизион, и графианец образуется фолликул. Он содержит вторичный ооцит. Эта вторая деление не завершено, если яйцеклетка не оплодотворена.

Мейоз

На этой диаграмме показано, как первичные ооциты в примордиальных фолликулах диплоид , и начинают свои первыми деление мейоза .Пары гомологичных хромосом (одна материнская, одна отцовская) пара на веретене, и генетические материал можно поменять местами. Даже X- и Y-хромосомы (если настоящее время) образуют пары и образуют частичный бивалент.

При завершении первого деления мейоза : один хромосомных пар отделяется от каждой дочери клетки. Например, если есть пара XY, то одна ячейка будет получают X и одну пару хромосом Y. Таким образом, когда это деление завершено, полученный вторичный ооцит имеет «диплоидную» ДНК, но хромосомные копии являются производными только от одной из исходных хромосом в родительской клетке .(т.е. по материнской или отцовской линии). Эти клетки получили название « гаплоид ». Одна из дочерних клеток дегенерирует и образует полярный кузов ‘. Они маленькие и быстро вырождаются.

По завершении второго мейотического деления : это деление происходит без репликации ДНК до к разделу . Каждая дочерняя клетка получает одну хроматиду от исходной пары хромосом, чтобы сформировать гамету, производящую клетки, у которых есть только одна копия каждой хромосомы.Снова один из дочерних клеток образует полярное тело .

Таким образом, из одного первичного ооцита образуется только одна гамета (сравните это к мужскому гаметогенезу).

Для получения дополнительной информации сравните нормальный митотическое деление с мейотическим делением.

Гормональные изменения во время менструального цикла

Развитие фолликулов стимулируется производством фолликула стимулирующий гормон (ФСГ) гипофизом. Созревание фолликулов приводит к увеличению уровня эстрогена , , поскольку эстроген секретируется фолликулярными клетками.Это повышение уровня эстрогена возвращается к гипофизу и подавляет дальнейшее высвобождение FSH (отрицательный Обратная связь). Фолликулы также выделяют второй гормон, называемый , ингибин , что также препятствует дальнейшему производству FHS . Повышение уровня эстрогена вызывает резкий скачок в середине цикла. второй гормон гипофиза под названием Лютенизирующий гормон (LH), который вызывает разрыв фолликула (овуляция , ).ЛГ также вызывает лютенизацию разорванных фолликулов, образуя временное эндокринный орган, называемый желтым телом . Это выглядит желтый из-за пигментированных лютеиновых клеток (luteus по-латыни означает желтый). Лютеин тела выделяет прогестерон и эстроген. Прогестерон уровни возвращаются к гипофизу и подавляют дальнейшее высвобождение LH. Если оплодотворение не происходит, желтое тело дегенерирует. в небольшой белый фиброзный рубец под названием corpus albicans. г. в результате снижение прогестерона (и в некоторой степени эстроген) ускоряют менструацию. г. снижение уровня эстрогена, возвращается в гипофиз и там — соответствующее увеличение ФСГ повторному циклу.

Развитие яичников и фолликулов

Введение

Гистологический вид органов, составляющих женскую репродуктивную систему, претерпевает циклические структурные изменения, не являющиеся патологическими.Эти органы включают яичник и матку, и гистологические изменения в этих органах в значительной степени обусловлены четырьмя гормонами: фолликулостимулирующим гормоном (ФСГ), лейтенизирующим гормоном (ЛГ), эстрогенами и прогестероном. На этой странице будут описаны гистологические изменения яичников на протяжении менструального цикла.

Яичник

Яичник человека состоит из внутреннего мозгового вещества и внешней коры с нечеткими границами. В мозговом веществе находятся кровеносные сосуды и нервы, а кора головного мозга занята развивающимися фолликулами.Поперечный разрез яичника покажет фолликулы на разных стадиях развития. В следующих разделах будут описаны гистологические особенности каждой стадии развития фолликулов и основные функциональные изменения в клетках, составляющих фолликулы.

Первородный фолликул

Фолликул яичника проходит несколько различных фаз, прежде чем он выпустит свою яйцеклетку. В течение первых пяти месяцев развития в яичнике плода формируется конечное количество примордиальных фолликулов.Эти фолликулы состоят из ооцитов, окруженных одним слоем плоских фолликулярных клеток. Эти примордиальные фолликулы остаются в процессе первого мейотического деления. В период полового созревания они начинают развиваться дальше и становятся первичными фолликулами.

Ранний первичный фолликул

В начале каждого менструального цикла запускается ограниченное количество примордиальных фолликулов. Первая очевидная гистологическая стадия — это ранний первичный фолликул, который состоит из центрального ооцита, окруженного одним слоем фолликулярных клеток, которые стали кубовидными.Пеллюцидная зона — это тонкая полоса гликопротеинов, разделяющая ооцит и фолликулярные клетки. Белки на поверхности сперматозоидов связываются со специфическими гликопротеинами блестящей оболочки.

Поздний первичный фолликул

Поздняя стадия первичного фолликула достигается, когда фолликулярные клетки пролиферируют в многослойный эпителий, известный как гранулезная зона. Пеллюцидная зона увеличивается, и на этом изображении ее можно увидеть еще более отчетливо.

Вторичный фолликул

Характерной чертой, которая отличает вторичные фолликулы от первичных, является появление антрального отдела фолликула внутри слоя гранулезы.Антральный отдел содержит жидкость, богатую гиалуронаном и протеогликанами. Обратите внимание на увеличение клеточных слоев зоны гранулезы, более толстой зоны пеллюцида и более крупного ооцита. На этом этапе становится очевидным слой клеток за пределами фолликула. Эти клетки составляют внутреннюю теку и способствуют выработке эстрогенов.

Напомним, что для производства эстрогена необходимы как клетки внутренней теки, так и клетки гранулезы. Эстрогены, как и все стероидные гормоны, производятся из холестерина в ходе многоступенчатого процесса, для которого требуется несколько различных ферментов.Ни клетки внутренней теки, ни клетки гранулезы не содержат всех ферментов, необходимых для преобразования холестерина в эстрогены. Клетки Theca содержат ферменты, которые катализируют начальное превращение холестерина в андрогены, но не имеют ароматазы, которая выполняет заключительные этапы превращения андрогенов в эстрогены. Следовательно, андрогены, продуцируемые клетками теки, диффундируют в клетки гранулезы, которые содержат ароматазу, но не имеют ферментов для начальных этапов синтеза эстрогена. Тека-клетки находятся в лучшем положении, чтобы катализировать начальные этапы синтеза эстрогена, потому что они находятся ближе к кровеносным сосудам и могут поглощать ЛПНП для получения холестерина.

Графиан фолликул

Граафовый фолликул — это стадия после завершения первого деления мейоза, но до овуляции. Ооцит теперь является гаплоидом 2N. Фолликул характеризуется большим антральным отделом фолликула, который составляет большую часть фолликула. Вторичный ооцит, претерпевший первое мейотическое деление, расположен эксцентрично. Он окружен прозрачной оболочкой и слоем из нескольких клеток, известных как лучистая корона. При выходе из фолликула Граафа в яйцевод яйцеклетка будет состоять из трех структур: ооцита, блестящей оболочки и лучевой коронки.

Желтое тело

После выхода яйцеклетки оставшиеся клетки гранулезной и внутренней теки образуют желтое тело. В центре находятся остатки тромба, образовавшегося после овуляции. Вокруг сгустка находятся лютеиновые клетки гланулозы и снаружи лютеиновые клетки тека. Эти клетки производят прогестерон и, в меньшей степени, холестерин.

Клетки лютеина гранулезы имеют вид, характерный для стероид-продуцирующих клеток, с бледной цитоплазмой, указывающей на присутствие липидных капель.Клетки лютеина тека меньше по размеру и более глубоко окрашены. Кровеносные сосуды проникают в область лютеиновых клеток гранулезы, позволяя им поглощать холестерин, который используется для синтеза прогестерона.

Активность клеток желтого тела поддерживается лейтенизирующим гормоном. Если яйцеклетка оплодотворяется и имплантируется в стенку матки, хорионический гонадотропин человека заменяет лейтенизирующий гормон для поддержания активности клеток желтого тела.

Corpus Albicans

Если оплодотворение не происходит, клетки желтого тела остаются активными в течение примерно 14 дней, пока уровень ЛГ не упадет и желтое тело не развернется с образованием альбиканского тела.Секреторные клетки желтого тела дегенерируют, фагоцитируются макрофагами и замещаются фиброзным материалом.

Атретический фолликул

В каждом менструальном цикле несколько примордиальных фолликулов стимулируются для продолжения развития, но только один фолликул завершает развитие, чтобы высвободить яйцеклетку. Другие фолликулы дегенерируют в результате процесса, называемого атрезией, который может произойти на любой стадии развития. Во время атрезии клетки гранулезы подвергаются апоптозу и замещаются волокнистым материалом.Ооцит дегенерирует, и основание, отделяющее ооцит от клеток гранулезы, утолщается, превращаясь в стекловидную мембрану.

Кисты яичников являются общими, редко злокачественными

Если вы разработаете кисты яичников, вы не одиноки. Они распространены как в репродуктивном возрасте, так и после него.

Киста яичника — это заполненный жидкостью мешок, который формируется внутри или на яичниках. Хотя они могут быть размером с горошину, они могут вырасти и больше, чем апельсин.

Почему они образуются?

Во время каждого менструального цикла один или оба яичника производят фолликулы. Гормоны в этих фолликулах производят яйцеклетку. Когда фолликул раскрывается, яйцеклетка высвобождается, и этот процесс называется овуляцией. Однако в течение нескольких месяцев фолликул не раскрывается, поэтому яйцеклетка и жидкость остается внутри фолликула, образуя кисту.

Кисты часто встречаются в период между половым созреванием и менопаузой и становятся менее распространенными. после менопаузы.

Большинство кист яичников называют функциональными кистами.Они безвредны, не вызывают злокачественных новообразований и проходят сами по себе. К другим кистам, не связанным с нормальной функцией менструального цикла, относятся дермоидные кисты и кисты, образующиеся в результате эндометриоза.

Как я узнаю, есть ли он у меня?

Кисты яичников часто протекают бессимптомно. Вы можете даже не знать, что он у вас есть. Но они могут стать болезненными, если они:

  • Искривились
  • Кровотечение
  • Разорвалось
  • Получили толчок во время полового акта
  • Растут во время полового акта
  • Вырастут большими
  • Нарушают кровоснабжение яичников

Другие симптомы могут включать кисты яичников :

  • Вздутие живота
  • Вздутие живота
  • Постоянная тупая, ноющая боль в области таза
  • Болезненные испражнения
  • Тазовая боль непосредственно перед или после начала менструального цикла
  • Сильная, внезапная тазовая боль, сопровождающаяся тошнотой рвота

Ваш лечащий врач может обнаружить кисту во время осмотра органов малого таза или в результате ультразвукового исследования, которое вы сделали по другой причине.

Если у вас есть симптомы, ваш врач может порекомендовать ультразвуковое исследование, компьютерную томографию, допплеровское исследование потока или МРТ для диагностики кисты.

Обычно кисты яичников не требуют лечения. Они уйдут сами по себе через восемь-двенадцать недель.

Если у вас часто возникают кисты, противозачаточные таблетки могут помочь предотвратить образование новых кист, но они не уменьшат размер уже существующих кист.

Операция может потребоваться при кистах яичников, если у вас есть:

  • Сложные кисты, которые не проходят при климаксе может быть рекомендовано хирургическое вмешательство по удалению кисты яичника.

    Источники: Национальные институты здравоохранения; Управление женского здоровья Министерства здравоохранения и социальных служб США; Американский конгресс акушеров и гинекологов

    С каким количеством яиц рождаются женщины? — Блог

    Узнайте о: Понимание женской репродуктивной системы | Почему менструальный цикл не начинается при рождении? | Яичниковый резерв и ваши гены: со сколькими яйцеклетками рождаются женщины? | Скорость набора фолликулов яичников | Как ваш запас яиц влияет на фертильность? | Как вы можете проверить свою фертильность?


    Задумывались ли вы когда-нибудь: «Сколько яиц у женщины?» Если да, то вы не одиноки.Каждая женщина рождается с определенным количеством яйцеклеток (которые составляют ее яичниковый резерв) и фолликулов яичников. Учитывая это, может возникнуть естественный вопрос: от чего зависит, сколько яиц у самки?

    В этом блоге мы расскажем, что вам нужно знать о женской репродуктивной системе. Получите ответы на все ваши животрепещущие вопросы о своих биологических часах — хотите ли вы узнать больше о фертильности женщины или просто хотите узнать: «Сколько яиц мы рождаемся?»

    Понимание женской репродуктивной системы

    Прежде чем обсуждать запас яйцеклеток женщины, важно понять основы женской репродуктивной системы.Эта система обрабатывает все, от овуляции до беременности, и является важной частью анатомии женщины. Он также производит женские половые гормоны, которые позволяют репродуктивной системе функционировать должным образом.

    Яичники — это два небольших органа, которые находятся по обе стороны от матки. Эти органы играют решающую роль в женской репродуктивной системе не только потому, что они производят яйцеклетки, но и хранят их до тех пор, пока они не будут готовы к высвобождению. После выхода яйца проходят через маточные трубы, где затем могут быть оплодотворены спермой.После завершения процесса оплодотворения яйцеклетка переместится в матку, где ее можно будет имплантировать на утолщенную слизистую оболочку матки. Если яйцеклетка не была имплантирована должным образом или если она не была оплодотворена спермой, слизистая оболочка матки потеряет сама себя, что вы и наблюдаете во время менструального цикла.

    Почему менструальный цикл не начинается при рождении?

    Если мы рождаемся со всеми яйцеклетками, которые у нас будут всю жизнь, то почему менструальный цикл не начинается с рождения? Это потому, что наши тела ждут, пока репродуктивная система не разовьется достаточно, чтобы действительно рожать детей.Половое созревание начинается, когда организм начинает вырабатывать большое количество гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ) в гипоталамусе. Этот гормон в головном мозге посылает сигнал в гипофиз о производстве ФСГ (фолликулостимулирующего гормона), что приводит к повышению уровня эстрогена и наступлению половой зрелости. (При проверке фертильности врачи смотрят на уровень ФСГ в организме, а также на другие гормоны, чтобы определить, находится ли он в пределах нормы для возраста человека.)

    Яичниковый резерв и ваши гены: со сколькими яйцеклетками рождаются женщины?

    Нет однозначного ответа на вопрос о количестве яйцеклеток у женщины при рождении.Почему? Потому что все сводится к индивидуальной генетике. Вот почему количество яйцеклеток, с которым рождается женщина, сильно различается. Фактически, по оценкам, на момент рождения у женщины может быть от 35 000 до 2,5 миллионов фолликулов яичников (так что у одной женщины может быть в 50 раз больше яйцеклеток, чем у другой!).

    Один из ключевых факторов, влияющих на ваш овариальный резерв сегодня, — это то, сколько яйцеклеток у вас изначально было при рождении, которое вы не можете контролировать или изменить, потому что это генетически обусловлено.

    Скорость набора фолликулов яичников

    Есть еще один важный фактор, когда дело касается резерва яичников. Во время каждого менструального цикла определенная часть фолликулов яичников «задействуется», чтобы начать процесс созревания. Но вообще говоря, только один фолликул яичника действительно выпускает свою яйцеклетку — остальные созревающие фолликулы (и их яйца) разрушаются и больше не могут использоваться. Есть убедительные доказательства того, что количество фолликулов, которые «набираются» каждый месяц, варьируется в зависимости от человека.(Исследователи также обнаружили, что большее количество фолликулов рекрутируется у более молодых женщин.)

    Например, у одной женщины 100 фолликулов могут пройти процесс созревания, тогда как у другой женщины более 5000 фолликулов могут начать созревать в течение ее цикла. Конечно, если эта так называемая «скорость набора» особенно высока, то резерв яичников сократится более существенно.

    Что движет скоростью набора фолликулов яичника? Ответ здесь опять же — генетика — замечательное проявление силы, которую генетика может оказывать на ваше здоровье и благополучие на протяжении всей вашей жизни.

    Как ваш запас яиц влияет на фертильность?

    Так что же происходит, когда женщина не может забеременеть? С возрастом у женщин количество яйцеклеток уменьшается, что ведет к потере репродуктивного потенциала. Когда происходит уменьшение количества яйцеклеток, у женщины может наблюдаться уменьшение резерва яичников (DOR). У большинства женщин уменьшение резерва яичников происходит примерно во время менопаузы; однако это может варьироваться от человека к человеку. В некоторых случаях женщины в возрасте от 30 лет испытывают трудности с беременностью из-за качества и количества яйцеклеток.(Другие факторы, такие как болезнь Хашимото, также могут повлиять на репродуктивное здоровье.) Когда женщина не может забеременеть, могут помочь варианты лечения бесплодия, такие как экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО), замораживание яйцеклеток и лекарства от бесплодия.

    Как можно проверить свою фертильность?

    Многие женщины обеспокоены тем, что их биологические часы тикают, снижая шансы на беременность. Итак, как вы можете проверить репродуктивное здоровье и фертильность своего тела? Специалист по фертильности может провести тесты на гормоны, ультразвук и другие тесты, чтобы оценить качество и количество яиц.Но вы также можете проверить несколько ключевых аспектов своей фертильности, не выходя из дома, с помощью теста Эверливелла.

    • Женский тест на фертильность измеряет 5 различных гормонов, чтобы вы могли увидеть, сбалансирован ли ваш уровень гормонов для поддержания нормальной функции яичников.
    • Тестирование резерва яичников в домашних условиях позволяет вам проверить уровень ФСГ, что дает вам косвенную оценку резерва яичников (количество яйцеклеток, которые у вас есть).

    Если вас беспокоит бесплодие или вы просто хотите знать, что у вас есть яйцеклетки, наши домашние тесты помогут вам быстро и удобно получить ответы о своем репродуктивном здоровье.


    Ссылки

    1. Узнайте, соответствует ли количество яиц вашему возрасту. Everlywell.com. URL. По состоянию на 12 марта 2020 г.

    2. Глейхер Н., Вегхофер А., Барад Д.Х. Определение резерва яичников для лучшего понимания старения яичников. Репрод Биол Эндокринол. 2011; 9:23.

    3. Что на самом деле означает овариальный резерв? Everlywell.com. URL. Опубликовано 2018 г. Проверено 12 марта 2020 г.

    4. Как эта женщина обрела больше «покоя и позитива» после тестирования ее яичникового резерва.Everlywell.com. URL. По состоянию на 12 марта 2020 г.

    Первичная недостаточность яичников (преждевременная недостаточность яичников)

    Первичная недостаточность яичников раньше называлась преждевременной недостаточностью яичников. Это заболевание поражает женщин задолго до наступления менопаузы.

    Яичники здоровой женщины вырабатывают эстроген. Этот гормон контролирует менструальный цикл и делает вас способным к зачатию (возможность забеременеть). С возрастом ваши яичники перестают вырабатывать эстроген.

    Иногда яичники перестают работать задолго до того, как ожидается менопауза.(Средний возраст наступления менопаузы — 51 год.) Если вам меньше 40 лет, и в ваших яичниках больше не производятся яйцеклетки и у вас прекратились менструации, это может быть первичная недостаточность яичников.

    Причины

    Внутри яичников находятся небольшие мешочки, называемые фолликулами. Они держат яйца по мере роста и созревания. Девочки обычно рождаются с примерно 2 миллионами «семян», которые превращаются в эти фолликулы, которые сохраняются во время менопаузы.

    Если у вас первичная недостаточность яичников, ваши фолликулы либо заканчиваются (ваш врач может назвать это истощением), либо не работают должным образом (также это называется дисфункцией).Врачи не знают, почему это происходит.

    Это состояние может быть более вероятным, если оно было у вашей матери или сестры. Другие факторы, которые могут сделать это более вероятным, включают:

    Симптомы

    Вы можете не знать, что ваши яичники не работают нормально. У некоторых женщин с преждевременной недостаточностью яичников все еще бывают месячные и они могут даже забеременеть. Но многим, страдающим этим заболеванием, сложно забеременеть. Обычно это побуждает к визиту к врачу.

    Наиболее частыми симптомами преждевременной недостаточности яичников являются пропущенные или нечастые периоды.Периоды могут начинаться и прекращаться снова на многие годы. Другие симптомы могут походить на симптомы менопаузы и могут включать:

    Диагноз

    Если у вас прекратились месячные или они нечасты, ваш врач проведет анализы крови, чтобы проверить уровень гормонов и исключить беременность, заболевание щитовидной железы и другие состояния здоровья.

    Первые анализы крови, которые вы, вероятно, сделаете, определят ваш уровень в крови:

    • ФСГ (фолликулостимулирующий гормон). Ваш гипофиз вырабатывает этот гормон, который сообщает яичникам производить яйцеклетку каждый месяц.
    • Эстрадиол. Это тип эстрогена, вырабатываемого яичниками.

    Результаты этих тестов помогут вашему врачу понять, что может происходить с вашими яичниками.

    Ваш врач может диагностировать у вас первичную недостаточность яичников, если вы моложе 40 лет и имеете любое из следующего:

    • Высокий уровень ФСГ (в диапазоне менопаузы) по двум различным тестам, проведенным с интервалом не менее 1 месяца
    • Низкий уровень эстрадиола Это означает, что ваши яичники не вырабатывают достаточно эстрогена.
    • Отсутствие менструаций или нерегулярные периоды (реже, чем каждые 35 дней) в течение 3 месяцев подряд

    Врач также может порекомендовать вам пройти трансвагинальное УЗИ.Этот визуальный тест показывает ваши яичники. Женщины с первичной недостаточностью яичников обычно имеют яичники меньшего размера с небольшим количеством фолликулов.

    Если у вас есть это состояние, вы можете пройти дополнительные тесты, чтобы определить причину.

    Влияние на здоровье

    Низкий уровень эстрогена может повлиять не только на вашу способность забеременеть. Среди прочего, эстроген необходим для здоровья сердца и костей. Если ваши яичники не вырабатывают достаточного количества этого гормона, у вас может быть больше шансов иметь другие заболевания, например:

    Поговорите со своим врачом о способах снижения риска.Здоровый образ жизни и лекарства могут помочь предотвратить некоторые из этих состояний.

    Лечение

    Хотя лечения нет, существуют методы лечения, которые могут облегчить симптомы и возможные осложнения, связанные с низким уровнем эстрогена.

    Заместительная гормональная терапия (ЗГТ) является наиболее распространенной. Это лечение обычно сочетает в себе эстроген и прогестин, хотя ваш врач может назначить другие формы. Вы можете взять его внутрь, нанести на кожу или поместить во влагалище. Убедитесь, что вы и ваш врач обсудите возможные побочные эффекты и риски, если вы рассматриваете этот вид лечения.

    Врачи обычно назначают добавки с кальцием и витамином D, чтобы предотвратить потерю костной массы, которая может произойти при падении уровня эстрогена. Если вы не занимаетесь спортом, вам нужно сделать фитнес привычкой, поскольку упражнения с весовой нагрузкой могут помочь сохранить ваши кости крепкими и ваше сердце здоровым.

    Если вы надеялись забеременеть, но обнаружили, что у вас первичная недостаточность яичников, вы можете поговорить с консультантом, а также поработать со своим врачом, чтобы понять, какие у вас есть варианты для создания или расширения семьи.

    Микроворсинки, полученные из ооцитов, контролируют фертильность самок путем оптимизации отбора фолликулов яичников у мышей.

    Мыши

    Мыши C57BL / 6 были получены из Центра лабораторных животных Института генетики (Пекин, Китай). Мыши Gdf9-Cre , Foxl2-CreER T2 и mTmG были получены, как сообщалось ранее 23,24,25 . Foxl2-CreER T2 мышей были подарком доктора Лю Куи.Мыши Rdx loxP / loxP и Gdf9 — / — были созданы с использованием CRISPR / Cas9-опосредованной геномной инженерии Центром исследований модельных животных Нанкинского университета (MARC), Нанкинский институт биомедицины. Нанкинского университета, Нанкин, Китай. Как правило, экзоны 4 и 5 гена Rdx были выбраны в качестве целевой области для удаления у мышей Rdx loxP / loxP , а экзон 2 гена Gdf9 был удален в Gdf9 — / — мышей.Все мутантные линии мышей находились на фоне C57BL / 6.

    У самок Foxl2-CreER T2 ; mTmG при однократной инъекции тамоксифена (75648, Sigma-Aldrich) в дозе 5 мкг / кг массы тела (BW) на PD8, CreER T2 рекомбинация, опосредованная рекомбиназой, для мечения одного GC через 1 неделю 50 . С тамоксифеном в высокой дозировке 20 мкг / кг массы тела для трех инъекций при PD8 / 10/12 почти все GC были помечены после 1 недели лечения 25,50 .

    Всех мышей содержали в помещениях для мышей при 16/8 часовых циклах свет / темнота при 26 ° C и влажности 40–70% с доступом к корму и воде без ограничений. Эксперименты на животных соответствовали руководящим принципам и нормативным стандартам Институционального комитета по уходу и использованию животных Китайского сельскохозяйственного университета, № AW8012020-2-3.

    Окрашивание гистологических срезов и подсчет фолликулов

    Для морфологического анализа и флуоресцентного обнаружения на уровне ткани образцы яичников фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA, Santa Cruz, 30525-89-4) в течение 8 часов, заливали парафином и нарезаны серийно по 5 мкм.Для подсчета количества фолликулов срезы тканей окрашивали гематоксилином (Santa Cruz, sc-24973A). Первичные фолликулы подсчитывали в каждом пятом срезе и умножали на пять, чтобы вычислить количество всех примордиальных фолликулов в каждом яичнике. Растущие фолликулы подсчитывали путем сканирования всех срезов, и подсчитывали только фолликулы с чистыми ядрами ооцитов, чтобы исключить влияние остаточных структур после абляции ооцитов в яичниках. Количество примордиальных фолликулов и растущих фолликулов суммировали с общим количеством фолликулов.Для флуоресцентного обнаружения после депарафинизации срезы окрашивали различными антителами, и Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, 14533) использовали в качестве контр-красителя для проверки ядра клетки. Срезы закрывали покровным стеклом, защищающим от выцветания флуоресцентной среды (Applygen, C1210).

    Визуализация изолированных ооцитов с высоким разрешением для обнаружения субклеточной структуры или локализации белка / фактора

    Все изображения изолированных ооцитов с высоким разрешением были получены с помощью конфокального микроскопа Andor Dragonfly с вращающимся диском, оснащенного × 63 или × 100, 1.44 NA масляный объектив, научная дополнительная металлооксидная полупроводниковая (sCMOS) камера (Andor Zyla 4.2) и 405 нм (Hoe), 488 нм (mG, Alexa Fluor 488-фаллоидин и LCA-FITC) и 568 -нм (mT, ER-трекер и родамин) системы Andor Integrated Laser Engine (ILE) с конфокальной сканирующей головкой с вращающимся диском (Andor Dragonfly 500). Изображения были получены с помощью программного обеспечения Fusion 2.1 (https://andor.oxinst.com/products/dragonfly#fusion).

    Для обнаружения Oo-Mvi в ооцитах, обнаженные ооциты на стадиях GV (средний диаметр около 65 мкм) поздних вторичных или преантральных фолликулов собирали путем разрыва яичников иглой шприца у самок дикого типа или Oo- Rdx — / — ; mTmG самки и контроль.Ооциты переносили с помощью ротовой пипетки в ~ 20 мкл минимальной среды MEMα-FBS-ITS: основная среда α (MEMα; Gibco, 32-571-036) с 10% FBS (Gibco, 10-099-141) и 1% инсулина. -трансферрин-селен (ITS; Sigma-Aldrich, 13146), покрытый минеральным маслом (Sigma-Aldrich, M8410) и сфотографированный на рабочей станции с живыми клетками (Okolab) при 37 ° C, 5% CO 2 . Изображения обычно получали через надлежащий временной интервал (10 мин) при толщине оптического среза 0,5 мкм и покрывали ~ 40 мкм ооцитов.

    Для наблюдения за актином коры ооцитов или GC-TZP, оголенные ооциты на стадии GV (средний диаметр около 65 мкм) были собраны из свежих яичников или культивированных GDF9 кусочков яичников Oo- Rdx + / + и Oo- Rdx — / — самок. Затем ооциты фиксировали 4% PFA в PBS в течение 15 мин. После промывки PBS фиксированные ооциты инкубировали с 488-фаллоидином Alexa Fluor (1: 100 растворенным в среде MEMα-FBS-ITS, ThermoFisher Scientific, A12379) с (для обнаружения коры ооцита) или без (для обнаружения GC-TZP). ) 0.1% Triton X-100 в течение 30 минут для визуализации GC-TZP путем окрашивания F-актином, как сообщалось ранее 10,51 .

    Для наблюдения за кортикальными гранулами ооцитов, Oo- Rdx + / + и Oo- Rdx — / — ооцитов на стадии GV (средний диаметр около 65 мкм) были зафиксированы в 4% PFA в PBS в течение 15 минут и проницаемость в 0,5% Triton X-100 в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем ооциты блокировали 1% BSA (Sigma-Aldrich, V3) в PBS в течение 1 часа и инкубировали с LCA-FITC 2 часа (1: 100, растворенный в PBS, ThermoFisher Scientific, L32475, подарок от Dr.Бо Сюн из Нанкинского сельскохозяйственного университета, Китай) при комнатной температуре 30 . После промывки PBS окрашенные ооциты визуализировали с помощью конфокального микроскопа с вращающимся диском Andor Dragonfly, как описано ранее.

    После получения, фильмы или изображения с одной временной точкой были обработаны ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) для проецирования всех z-стеков и объединенных цветовых каналов. Чтобы четко выделить структуры Oo-Mvi, канал mG (488 нм) был инвертирован в черный и белый с помощью программного обеспечения ImageJ на рис.1. Чтобы показать Oo-Mvi, R-GDF9 или ER ооцита, вращающиеся дополнительные трехмерные видеоролики были обработаны программным обеспечением Imaris (https://imaris.oxinst.com/) (Дополнительные видеоролики 1, 4, 5 и 6). Чтобы показать клеточное поведение Oo-Mvi на ооцитах, дополнительные видеоролики с замедленной съемкой были обработаны программным обеспечением ImageJ (Дополнительные видеоролики 2 и 3).

    Подробный протокол также доступен в протоколе обмена 52 .

    Визуализация ER в ооцитах с высоким разрешением

    Для наблюдения за распределением ER ооцитов, обнаженные живые ооциты на стадии GV (средний диаметр около 65 мкм) из свежих яичников дикого типа инкубировали с ER-трекером Red (1 : 1000, Beyotime, C1041) в течение 30 минут при 37 ° C, 5% CO 2 32,33 .После промывки PBS окрашенные ооциты визуализировали с помощью конфокального микроскопа с вращающимся диском Andor Dragonfly, как описано ранее. Для определения интенсивности флуоресценции ER цитоплазмы и пузырьков ооцита с помощью программного обеспечения ImageJ измеряли единичный Z средней интенсивности флуоресценции ER цитоплазмы и пузырьков ооцита.

    Иммунофлуоресцентное окрашивание и наблюдение

    Срезы яичников депарафинизировали, регидратировали и подвергали высокотемпературному (95–98 ° C) поиску антигена в течение 16 мин с 0.01% натрий-цитратный буфер (pH 6,0). Затем срезы блокировали 10% нормальной ослиной сывороткой (Jackson ImmunoResearch, 017-000-121) в течение 60 минут при комнатной температуре и инкубировали с первичными антителами в течение ночи при 4 ° C. Затем срезы инкубировали со вторичными антителами осла, конъюгированными с флуорофором (1: 200, Life Technologies), в течение 2 ч при 37 ° C. Гомологичный IgG (козий, нормальный контроль, A7007, Beyotime) с первичными антителами использовали в качестве отрицательного контроля, чтобы гарантировать специфичность окрашивания.

    Для обнаружения семейства ERM или экспрессии белка GDF9 в яичнике мы инкубировали срезы со следующими первичными антителами: антитело против RDX (кролик, 1: 100, ab52495, Abcam), антитело против p-ERM (кролик, 1 : 100, mAb # 3726, Cell Signaling Technologies), антитело против EZRIN (кролик, 1: 100, ab4069, Abcam), антитело против MOESIN (кролик, 1: 100, ab52490, Abcam) и антитело против GDF9 ( коза, 1:50, AF739, НИОКР). Клеточную пролиферацию GC оценивали путем окрашивания антителом против ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) (мышь, 1: 100, Santa Cruz, sc-25280).Процент PCNA-положительных GC определялся количественно как количество GC с PCNA-положительными сигналами, деленное на общее количество GC в первичных и вторичных фолликулах. Апоптоз клеток выявляли окрашиванием TUNEL (набор для обнаружения гибели клеток in situ, Fluorescein, Roche, 11684795910). Процент TUNEL-положительных фолликулов количественно определяли как количество фолликулов с TUNEL-положительным сигналом, деленное на общее количество фолликулов на первичной и вторичной стадиях.

    Все общие морфологии были исследованы и сфотографированы с помощью цифрового флуоресцентного микроскопа Nikon Eclipse Ti.

    Для обнаружения GDF9 с высоким разрешением совместная локализация GDF9 с везикулами Oo-Mvi была получена как модель стека z с толщиной оптического среза 0,3 мкм после совместного окрашивания GDF9 и RDX ( для маркировки Oo-Mvi), а конфокальные срезы покрывали ткань толщиной ~ 8 мкм. И IgG, и срезы яичников самок G df9 — / — использовали в качестве отрицательного контроля, чтобы гарантировать специфичность окрашивания. Изображения были получены с помощью конфокального микроскопа Andor Dragonfly с вращающимся диском, оснащенного × 100, 1.44 NA масляный объектив (Leica HC PL APO), научная дополнительная металлооксидная полупроводниковая (sCMOS) камера (Andor Zyla 4.2) и 488 нм (анти-RDX, Oo-Mvi) и 568 нм (анти-GDF9). и IgG) системы Andor Integrated Laser Engine (ILE) с конфокальной сканирующей головкой с вращающимся диском (Andor Dragonfly 500). В деталях, изображения были получены с помощью лазера с длиной волны 488 нм и лазера с длиной волны 568 нм, около 10–15%, время экспозиции 100–200 мс. Изображения были получены с помощью программного обеспечения Fusion 2.1 (https://andor.oxinst.com/products/dragonfly#fusion).После получения изображения были обработаны ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) для проецирования всех стеков z и объединенных цветовых каналов.

    Сбор ZP и анализ MS

    Для сбора пустых ZP из ооцитов, мышей C57BL / 6 на PD23 с 5 МЕ гонадотропина сыворотки беременных кобыл (PMSG; Sansheng Biological Technology) в течение 46 часов и яичники пунктировали для получения кумулюс-ооцитов. комплексы. Клетки кумулюса переваривали 0,3% гиалуронидазной средой (Merck, MR-051-F) для получения обнаженных ооцитов, которые затем инкубировали с 10% высокоосмотическим раствором глюкозы для разделения ZP и ооцита.Под системой микроинъекции ZP разрывали, чтобы высвободить ооцит, а затем собирали пустой ZP. Белок (~ 5 мкг) из ~ 3000 кусочков ZP экстрагировали буфером для экстракции RIPA для одного анализа белка MS, который повторяли три раза.

    Расщепление белков проводили с использованием метода подготовки проб с фильтрацией (FASP) с модификациями, как описано ранее 53,54 . Электрораспыление с наноспреем (ESI) -MS выполняли на масс-спектрометре высокого разрешения Thermo Q-Exactive (Thermo Scientific) с разрешением сканирования 70 000 мс, разрешением сканирования 17 500 мс / мс и выбором из топ-10 МС / МС.Необработанные данные масс-спектрометра были предварительно обработаны с помощью Mascot Distiller 2.4 для выделения пиков. Полученные списки пиков были найдены в базе данных Uniport Mouse с помощью поисковой машины Mascot 2.5. Scaffold PTM использовали для оценки сайтов фосфорилирования результатов поиска Mascot с использованием алгоритма Ascore.

    Анализ фертильности и овуляции мышей

    Для определения фертильности мышей 5-недельных самок Oo- Rdx — / — мышей и контрольных мышей непрерывно спаривали с 8-недельными фертильными самцами C57BL / 6 на 40 недель.Регистрировали количество щенков и пометов, по которым определяли показатели фертильности.

    Для суперовуляции Oo- Rdx — / — и контрольным мышам (PD23) внутрибрюшинно вводили 5 МЕ PMSG (Sansheng Biological Technology, Нинбо, Китай), а затем 5 МЕ хронического гонадотропина человека (ХГЧ). , Sansheng Biological Technology, Нинбо, Китай) 46 часов спустя. Еще через 16 ч ооциты собирали из яйцеводов и подсчитывали количество ооцитов для каждого животного после переваривания с помощью 0.3% гиалуронидаза (Merck, MR-051-F).

    Культура in vitro кусочков коры яичника

    Прикрепленная культура кусочков яичника in vitro была модифицирована по сравнению с методом, описанным в предыдущем исследовании 55 . В деталях, кусочки коры яичника из Oo- Rdx + / + ; mTmG и Oo- Rdx — / — ; mTmG диаметр яичников отслеживался на PD4 (эксперимент по измерению диаметра яичника разрезать примерно на 2 × 1 × 0,5 мм 3 кусочков и культивировать в MEMα (Gibco, 32-571-036) с добавлением 10% FBS (Gibco, 10-099-141).После 4 дней прилипания культуры без смены среды кортикальные кусочки прочно прикрепляли ко дну чашек для экспериментов, а затем культуральную среду меняли наполовину каждый день для поддержания развития тканей.

    В эксперименте по отслеживанию диаметра ооцитов динамику развития ооцитов измеряли по увеличению диаметра, который был обозначен mG в Oo- Rdx + / + ; mTmG и Oo- Rdx — / — ; яичники mTmG .Изменения диаметра регистрировали с помощью цифрового флуоресцентного микроскопа Nikon Eclipse Ti через день в течение 7 дней подряд. Чтобы убедиться, что обнаруженные ооциты находились в периоде быстрого роста, в этом эксперименте были отслежены ооциты с начальным диаметром около 16–35 мкм. Чтобы сравнить динамику развития ооцитов с разным начальным диаметром, мы нормировали фактические диаметры на коэффициент роста, чтобы показать динамику изменения роста ооцитов в разных группах. Всего 151 ооцит из 27 кусочков коры в Oo- Rdx + / + ; mTmG и 250 ооцитов из 21 кусочка коры в Oo- Rdx — / — ; mTmG ; mTmG прослеживается.В эксперименте с GDF9 яичники Oo- Rdx + / + и Oo- Rdx — / — яичников на PD21 (эксперимент с GDF9) были сокращены примерно до 2 × 1 × 0,5. мм 3 кусочков и культивировали в MEMα с добавлением 10% FBS, с GDF9 или без него (500 нг / мл, R&D, 739-G9-010 / CF) в течение 24 часов, и ооциты (средний диаметр около 65 мкм при GV стадии) собирали путем разрыва яичников иглой шприца и переваривали 0.Среда с 3% гиалуронидазой, используемая для определения плотности GC-TZP.

    Культивирование фолликулов яичников in vitro

    Фолликулы разделяли путем разрыва яичников PD21 и механической изоляции с помощью иглы шприца. Фолликулы диаметром около 130 мкм (средний диаметр: 134,72 ± 13,73 мкм в Oo- Rdx + / + , n = 64 и 129,73 ± 20,21 мкм в Oo- Rdx — / — , n = 77).Чтобы контролировать рост фолликулов, изолированные фолликулы культивировали в культуральной системе Matrigel (BD, 354234) для поддержки трехмерного развития фолликулов, которая была модифицирована из ранее описанных 56,57,58 . Обычно матригель разбавляли 3: 1 предварительно охлаждающей средой MEMα-FBS-ITS плюс фолликулостимулирующий гормон (овечий ФСГ, 10 нг / мл, NHPP) на льду. Добавьте 20 мкл матригеля / микрокапли в 6-луночный культуральный планшет и по 6 микрокапель в каждую лунку на льду, сохраняя гель в жидкости. Поместите 6-луночный культуральный планшет при 37 ° C на 20 мин, чтобы преобразовать матригель из жидкой фазы в твердую.Затем изолированные фолликулы осторожно высевали в гель с помощью мышиной пипетки соответственно. Добавляют 2 мкл жидкого матригеля для закрытия лунки и помещают планшет в инкубатор при 37 ° C на 10 мин, чтобы гель запечатался. После этого этапа культивированные фолликулы были полностью окружены гелем. Плотность посева была около 1,6 на см 2 , чтобы гарантировать достаточно места для роста. В чашку для культивирования добавили 1 мл среды MEMα-FBS-ITS с фолликулостимулирующим гормоном (овечий ФСГ, 10 нг / мл, NHPP).Во время культивирования среду меняли наполовину каждый день, и диаметр фолликулов регистрировали каждые 24 часа в течение 8 дней подряд с помощью цифрового флуоресцентного микроскопа Nikon Eclipse Ti в канале яркого поля.

    Подробный протокол также доступен в протоколе обмена 59 .

    Родамин-конъюгированный GDF9 и инъекция живых ооцитов

    Рекомбинантный белок GDF9 (50 мкг / мл, R&D, 739-G9-010 / CF) или BSA (50 мкг / мл, Sigma-Aldrich, V3) в качестве контроля были помечены с родамином с использованием набора для маркировки антител Pierce NHS-родамина (53031, ThermoFisher) в соответствии с протоколом производителя 60 .Для сбора ооцитов КОК выделяли путем пункции антральных фолликулов мышей C57BL / 6 на PD23 после 46 ч обработки PMSG (5 МЕ, внутрибрюшинная инъекция). После обработки 0,3% гиалуронидазой (Merck, MR-051-F) в среде, оголенные ооциты были выполнены микроинъекцией, и приблизительно 10 мкл меченого белка или раствора родамина вводили в один ооцит с помощью электрического микроинжектора FemtoJet 4x (Eppendorf). Через 15 или 30 минут инъекций ооцит визуализировали под конфокальным микроскопом с вращающимся диском Andor Dragonfly с ранее описанными индексами.

    Анализ экспрессии генов

    Для обнаружения экспрессии генов в материалах мышей мРНК из различных тканей или отделов яичников экстрагировали реагентом ТРИЗОЛ (Thermo-Ambion, 15596018) в соответствии с протоколом производителя. Количество и качество общей РНК определяли с помощью Nanodrop (Thermo Scientific). Обратную транскрипцию (TAKARA, RR047Q) проводили с использованием 1 мкг общей РНК на образец. Реакции QRT-PCR проводили в 96-луночных планшетах (Applied Biosystems, 4316813) в реакционных объемах 15 мкл и анализировали с помощью системы для ПЦР в реальном времени Applied Biosystems 7500 (Applied Biosystems, 4472908) со следующими параметрами: 10 мин при 95 ° C, затем 40 циклов по 15 с при 95 ° C и 1 мин при 60 ° C.Данные были нормализованы по β-актину. Список праймеров представлен в дополнительной таблице 1.

    Вестерн-блот

    Для обнаружения экспрессии белка в материалах мышей общий белок экстрагировали с использованием раствора для лизиса тканей и клеток WIP (BioChip, 110000) в соответствии с протоколом производителя. Электрофорез выполняли с 50 мкг общих белков, разделенных 10% SDS-PAGE и перенесенных на мембраны из поливинилиденфторида (Millipore, ISEQ00005). Мембраны инкубировали в течение ночи при 4 ° C с соответствующими первичными антителами, перечисленными ниже: анти-RDX (78 кДа, 1: 500, ab52495, Abcam), анти-p-ERM (78 кДа, 1: 500, mAb # 3726, Сотовые сигнальные технологии).Соответствующее вторичное антитело (ZB-2301, ZB-2305 от ZSGB-BIO) разводили 1: 5000 в TBST (TBS плюс 0,5% Твин 20). Тубулин (1: 5000, Beyotime, AF5012) использовали в качестве внутреннего контроля. Мембраны визуализировали с помощью хемилюминесцентной системы обнаружения SuperSignal (Thermo Scientific, 32109). Исходные кляксы можно найти в файле исходных данных.

    Статистический анализ

    Все эксперименты повторяли не менее трех раз на разных мышах. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD) каждого эксперимента.Данные были проанализированы с помощью теста Стьюдента t и считались статистически значимыми при P <0,05.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *