Инфлювак нидерланды эбботт биолоджикалз отзывы: Инфлювак – голландская вакцина против Гриппа

Содержание

Вакцинация в диагностическом центре «МедиСкан» в Домодедово

Перечень услуг Стоимость услуг, руб
Превенар
Вакцинопрофилактика заболеваний, вызываемых бактерией Streptococus pneumoniae (13 серотипов) таких заболеваний как: сепсис, острый отит, менингит, пневмония или бактериемия) Pfizer, Великобритания
У детей с 2 месяцев
3 400
Пентаксим
Вакцинопрофилактика коклюша (бесклеточная), дифтерии, столбняка, полиомиелита (инактивированная) и гемофильной палочки тип b Sanofi Pasteur, Франция
У детей от 3-х месяцев до 3 лет 11 месяцев 29 дней
3 400
M-M-P ll
Вакцинопрофилактика кори, краснухи, эпидемического паротита (живая ослабленная вакцина) «Merck Sharp & Dohme», США
У детей с 1 года и старше
1500 1200
Варилрикс
Вакцина против ветряной оспы живая аттенуированная GlaxoSmithKline Biologicals S.A.,Бельгия
4 400
Имовакс полио
Вакцинопрофилактика полиомиелита (инактивированная вакцина) Sanofi Pasteur, Франция
1 050
Комбитекс
Вакцинопрофилактика гепатита В НПК «Комбиотех», Россия
У детей с рождения
500
Инфлювак
Эбботт Биолоджикалз Б. В. Нидерланды
У детей с 6 месяцев;
600
Ваксигрип
Вакцинопрофилактика гриппа, Sanofi Pasteur, Франция
600
Диаскинтест
Туберкулин диагностика
700
Инфанрикс
Вакцинопрофилактика коклюша (бесклеточная), дифтерии, столбняка GlaxoSmithKline, Бельгия
У детей от 3-х месяцев до 3 лет
1 800
Инфанрикс гекса
Вакцинопрофилактика коклюша (бесклеточная), дифтерии, столбняка, гепатита B, полиомиелита (инактивированная) и гемофильной палочки тип b GlaxoSmithKline, Бельгия
У детей от 3-х месяцев до 4 лет 11 месяцев 29 дней
3 800
Адасель
Вакцинопрофилактика дифтерии (с уменьшенным содержанием антигена), стобняка и коклюша (бесклеточная), комбинированная, адсорбированная) Sanofi Pasteur Limited, Канада.
3 600
Менактра
Вакцина менингококковая полисахаридная (серогрупп A, C, Y и W-135), конъюгированная с дифтерийным анатоксином Санофи Пастер Инк., США
6 000
Полимилекс
Вакцина для профилактики полиомелита инактивированная
Производитель: Билтховен Биолоджикалз Б.В., Нидерланды
У детей с 3 месяцев
1 500

Гармония здоровья — медицинский центр

ВАКЦИНАЦИЯ

 

В нашем Медицинском Центре проводится вакцинация в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок и Календарем профилактических прививок по эпидемическим показаниям, на основании Приказа Министерства Здравоохранения РФ от 21 марта 2014 года N 125н «Об утверждении национального календаря профилактических прививок и календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям».

Календарь прививок – это минимальная обязательная схема, предусмотренная для граждан РФ.

 

Перед прививкой каждый обратившийся пройдет медицинский осмотр. Квалифицированные врачи-терапевты и педиатры определят отсутствие противопоказаний для проведения вакцинации, измерят температуру и артериальное давление.(«МУ 3.3.1.1095-02. 3.3.1. Вакцинопрофилактика. Медицинские противопоказания к проведению профилактических прививок препаратами национального календаря прививок. Методические указания»(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 09.01.2002 г.).

 

Перед некоторыми прививками врач может назначить анализы. Чаще всего это общий анализ крови и общий анализ мочи, реже другие обследования. Как правило, анализы назначаются детям первого года жизни (но не всегда), пациентам с хроническими болезнями, часто болеющим лицам. Иногда требуется консультация определенных специалистов перед прививкой (например, невролога).

 

Прививая своих детей, не стоит забывать про себя. Не все знают, что каждый взрослый должен раз в 10 лет делать прививку от дифтерии и столбняка; ежегодно — от гриппа. Противогриппозная вакцинация особенно показана пожилым людям, т.к. снижает заболеваемость и смертность от инфаркта, инсульта, ишемической болезни сердца, предупреждает обострение различных хронических заболеваний и т.д.

 

Молодые женщины, не болевшие краснухой и ветряной оспой и не привитые ранее, для рождения здорового ребенка должны заблаговременно (как минимум за 3 месяца до наступления желаемой беременности) сделать прививку от этих заболеваний. Ведь перенесенная ветряная оспа или краснуха в течение всего периода ожидания малыша может вызывать серьезные осложнения с развитием врожденных аномалий. Молодые люди, не болевшие эпидемическим паротитом (свинкой) и не привитые от этой инфекции в детстве, также должны получить прививку против этой инфекции, которая может привести к мужскому бесплодию. Кроме того, учитывая высокую распространенность, носительство и наличие скрытых форм гепатитов А и В, целесообразно прививаться от этих инфекций всем людям, независимо от пола и возраста.

 

При обращении в медицинский центр с целью вакцинации при себе необходимо иметь паспорт. На основании Федерального закона №157-ФЗ «Об иммунопрофилактике инфекционных болезней» перед проведением прививки необходимо оформить обязательное «Информированное согласие на прививку».

 

 

Вакцины, используемые в медицинском центре «Гармония здоровья»

 

Вакцина «Приорикс» — для профилактики краснухи, кори и паротита. Производитель: «Фидия Фармацеутици С.п.а.», Италия.

 

Вакцина «Энджерикс В» — против гепатита В. Производитель «ГлаксоСмитКляйн Байолоджикал с.а.», Бельгия.

 

Вакцина «Пентаксим» – для профилактики дифтерии, столбняка коклюша, полиомиелита, гемофильной инфекции. Производитель: Санофи Пастер С.А., Франция.

 

Вакцина «Превенар» (США) — для профилактики пневмококковой инфекции. Производитель: Вайет Фармасьютикалз Дивижн, США.

 

Вакцина «Пневмовакс 23» — для профилактики пневмококковой инфекции. Производитель: Мерк Шарп и Доум, США.

 

Вакцина «Инфлювак» – для профилактики гриппа. Производитель Эббот Биолоджикалз Б.В., Нидерланды.

 

Вакцина «Менактра» – для профилактики менингококковой инфекции. Производитель Санофи Пастер Инк., США.

 

У нас в клинике вам не придется ждать в очереди, так как запись на прививку осуществляется по телефону на удобное для вас время. Вам и вашему малышу гарантировано доброжелательное отношение со стороны медицинского персонала и качественные препараты зарубежного производства, что безопасно и сводит к минимуму возможность возникновения побочных реакций. Педиатр ответит на все ваши вопросы относительно подготовки к вакцинации и поствакцинального периода, составит индивидуальный график иммунизации для вашего ребенка.

 

Вакцинация детей, сделать прививку детям в Ростове-на-Дону

Нас рекомендуют друзьям

Назначим необходимые анализы и предоставим результаты с точными расшифровками

Наши специалисты — опытные врачи диагносты, которые используют быстрые и точные методы

В нашей клинике только современное оборудование и передовые технологии в медицине

Минимум посещений, осмотров, анализов и обследований. Максимум пользы

Чтобы определиться, делать ли своему малышу прививки или нет, стоит взвесить все «за» и «против» вакцинации детей. Некоторые родители считают, что ребенку полезнее перенести некоторые болезни (паротит, краснуха) в раннем возрасте.

Но из-за отказа ряда родителей от прививок все чаще возникают вспышки инфекций, способных привести к инвалидности или летальному исходу.

Паротит, известный в народе, как «свинка», иногда приводит к бесплодию у мальчиков, а перенесенная в детстве краснуха может стать причиной артрита. Специфический иммунитет ребенка, гарантирующий успешную борьбу с инфекциями, к моменту рождения уже сформирован. Прививка становится активатором его работы и не препятствует укреплению неспецифических защитных сил организма, отвечающих за борьбу с условно-патогенными бактериями и подверженности детей простудными заболеваниями. Поэтому, столкнувшись с опасной инфекций, ребенок уже будет к ней подготовлен.

Те, кто выступает против вакцинации, утверждают, что прививка содержит опасные вещества – бактерии, вирусы, консерванты. Да, эти компоненты присутствуют в составе вакцин. Но, бактерии и вирусы в вакцинах находятся в неактивном или ослабленном состоянии.

Их достаточно для выработки антител к определенной инфекции, но спровоцировать болезнь они неспособны. При производстве вакцин используются и консерванты (мертиолят и формальдегид) в очень малых дозах. Мы ежедневно сталкиваемся с этими веществами, которые широко применяются в фармацевтике, производстве косметики и бытовой химии(мыло, пенки, шампуни). Разово попадая в организм с прививкой, эти консерванты не наносят сколько-нибудь ощутимого вреда, но все же есть риск возникновения аллергии.

Самое важное что есть у клиники – это её врачи

Наши врачи – опытные специалисты. К нам обращаются всей семьей и советуют друзьям.

Специалисты

15

Докторов
медицинских наук

9

Кандидатов
медицинских наук

2

Заслуженных
врача России

Важно помнить, что помимо анафилактической реакции, введение вакцины может стать «спусковым крючком» для некоторых неврологических заболеваний.

Такие случаи крайне редки и являются следствием неправильного или несвоевременного введения препарата. Поэтому плановая вакцинация детям в Ростове-на-Дону хоть и необходима, но проводится только если малыш на момент прививки был абсолютно здоров и это подтверждено педиатром.

При оформлении ребенка в сад или школу требуются справки о прохождении вакцинации. Ребенок будет ежедневно общаться с большим количеством детей. Встреча с опасными инфекциями в этот период неминуема, а прививки детям в Ростове-на-Дону – лучший способ избежать тяжелых последствий.

Особенно легко распространяются в дошкольных и школьных учреждениях вирусные инфекции, представителем которых является грипп. Он может привести к тяжелым осложнениям (пневмония, менингит, энцефалит, миокардит, синусит, отит) и даже к летальному исходу.

На протяжении многих лет иммунизация против гриппа подтверждает свою эффективность и является лучшей мерой профилактики. Из-за высокой изменчивости структуры вируса гриппа постоянно корректируется и состав вакцин.

Обзор клиники

В нашем центре имеются современные вакцины:

  • Пентаксим (Франция) для профилактики дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита, гемофильной инфекции.
  • Инфанрикс-Гекса (Франция) для профилактики дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита, гемофильной инфекции, гепатита В.
  • Адасель (Канада) для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша.
  • Превенар 13 (США) для профилактики пневмококковой инфекции.
  • Ротатек (США) для профилактики ротавирусной инфекции.
  • MMP II (Нидерланды) для профилактики кори, краснухи, паротита.
  • Менактра (США) для профилактики менингококковой инфекции.
  • Гардасил (Нидерланды) для профилактики папилломавируса.
  • Хаврикс (Бельгия) для профилактики гепатита А.
  • Варилрикс (Бельгия) для профилактики ветряной оспы.
  • Регевак В (Россия) для профилактики вируса гепатита В.

Точные цены на перечисленные прививки детям в Ростове-на-Дону можно узнать, позвонив по телефону, указанному на сайте. 

Наш рейтинг на ProDoctorov говорит сам за себя

Что понравилось

Комфорт 10/10
Лучшие специалисты 9/10
Обслуживание 9/10

453

Отзыва о клинике

4,5 / 5

Средняя оценка

инструкция по применению, аналоги, состав, показания

Вакцины для профилактики гриппа.

Фармакологические свойства

Фармакодинамика

Как правило, серопротекция достигается через 2-3 недели после вакцинации. Продолжительность поствакцинального иммунитета к гомологичным или близкородственным с вакцинальными штаммами может колебаться, однако в большинстве случаев составляет 6-12 месяцев.

Показания к медицинскому применению

Профилактика гриппа у взрослых и детей (в возрасте с 6 месяцев), особенно у лиц с повышенным риском возникновения осложнений.

Вакцинация рекомендуется в первую очередь для следующих категорий пациентов:

лица старше 65 лет независимо от состояния здоровья; взрослые и дети с хроническими заболеваниями дыхательной или сердечнососудистой систем, включая бронхиальную астму; взрослые и дети с хроническими метаболическими нарушениями, такими как сахарный диабет; взрослые и дети с хроническими нарушениями функции почек; взрослые и дети с иммунодефицитными состояниями, возникшими в результате заболевания, иммуносупрессивной терапии (например, цитостатиками или кортикостероидами) либо лучевой терапии; дети и подростки (с 6 месяцев до 18 лет), которые длительно получают лекарственные препараты, содержащие ацетилсалициловую кислоту, и вследствие этого подвержены риску развития синдрома Рея при заболевании гриппом.

Способ применения и дозировка

Дозировка

Взрослые: 0.5 мл.

Дети:

Дети в возрасте 36 месяцев и старше: 0.5 мл.

Дети в возрасте от 6 до 35 месяцев: клинические данные ограничены. Может использоваться дозировка 0.25 или 0.5 мл, которая должна соответствовать существующим национальным рекомендациям. Подробные инструкции по введению препарата см. в разделе «Меры предосторожности при медицинском применении».

Для детей, которые ранее не вакцинировались, требуется введение второй дозы с интервалом не менее 4 недель.

Дети младше 6 месяцев: безопасность и эффективность вакцины Инфлювак® у детей младше 6 месяцев не изучалась; какие-либо данные о применении отсутствуют.

Способ применения

Иммунизация должна выполняться путем внутримышечной либо глубокой подкожной инъекции.

Меры предосторожности, которые необходимо соблюдать при обращении с данным препаратом, либо при его введении: перед использованием вакцина должна нагреться до комнатной температуры. Непосредственно перед инъекцией шприц необходимо встряхнуть, снять защитный колпачок с иглы и удалить воздух из шприца, удерживая его в вертикальном положении иглой вверх и медленно нажимая на поршень. Проверьте визуально перед введением. Для введения дозы 0.25 мл из шприца, содержащего 0.5 мл, необходимо нажать на поршень и остановить его движение, когда внутренняя поверхность поршня достигнет метки; при этом в шприце останется соответствующее количество вакцины, необходимое для введения. Неиспользованный препарат или материалы, которые остались после использования препарата, должны быть утилизированы в соответствии с локальными требованиями.

Вакцина против гриппа, полученная из клеточной культуры — AbbVie

Нам нужна от вас некоторая информация, прежде чем вы начнете использовать платформу. Эта информация позволит нам лучше понять, как используется AdisInsight. Он не требует или не заменяет отдельные учетные записи для входа, которые многие из вас используют для сохранения результатов поиска и создания предупреждений по электронной почте. Защита вашей личной информации важна. Вот почему AdisInsight собирает минимальный объем информации, необходимой для включения функциональности, отчетов об использовании и связи с вами с информацией об AdisInsight.Для получения дополнительной информации о том, как мы защищаем и обрабатываем вашу личную информацию, пожалуйста, обратитесь к нашему политика конфиденциальности.

Пожалуйста, введите ваш официальный адрес электронной почты Адрес электронной почты Страна Выберите CountryAfghanistanAlbaniaAlgeriaAmerican SamoaAndorraAngolaAnguillaAntarcticaAntigua и BarbudaArgentinaArmeniaArubaAustraliaAustriaAzerbaijanBahamasBahrainBangladeshBarbadosBelarusBelgiumBelizeBeninBermudaBhutanBoliviaBonaire, Синт-Эстатиус и SabaBosnia и HerzegovinaBotswanaBouvet IslandBrazilBritish Индийский океан TerritoryBrunei DarussalamBulgariaBurkina FasoBurundiCambodiaCameroonCanadaCape VerdeCayman IslandsCentral африканских RepublicChadChileChinaChristmas IslandCocos (Килинг) IslandsColombiaComorosCongoCongo, Демократическая Республика theCook IslandsCosta RicaCote D’IvoireCroatiaCubaCuraçaoCyprusCzech RepublicDenmarkDjiboutiDominicaDominican RepublicEcuadorEgyptEl SalvadorEquatorial GuineaEritreaEstoniaEthiopiaFalkland (Мальвинские) острова Фарерские IslandsFijiFinlandFranceFrench GuianaFrench PolynesiaFrench Южные территорииГабонГамбияГрузияГерманияГанаГибралтарГрецияГренландияГренадаГваделупаГуамГватемалаГернсиГвинеяГвинея-БисауГайанаГайтиHeard Island and Mcdonald I slandsHoly Престол (Ватикан) HondurasHong KongHungaryIcelandIndiaIndonesiaIran, Исламская Республика ofIraqIrelandIsle из ManIsraelItalyJamaicaJapanJerseyJordanKazakhstanKenyaKiribatiKorea, Корейская Народно-Демократическая Республика ofKorea, Республика ofKosovoKuwaitKyrgyzstanLao Народная Демократическая RepublicLatviaLebanonLesothoLiberiaLibyan Арабская JamahiriyaLiechtensteinLithuaniaLuxembourgMacaoMacedonia, бывшая югославская Республика ofMadagascarMalawiMalaysiaMaldivesMaliMaltaMarshall IslandsMartiniqueMauritaniaMauritiusMayotteMexicoMicronesia, Федеративные Штаты ofMoldova, Республика ofMonacoMongoliaMontenegroMontserratMoroccoMozambiqueMyanmarNamibiaNauruNepalNetherlandsNew CaledoniaNew ZealandNicaraguaNigerNigeriaNiueNorfolk IslandNorthern Mariana IslandsNorwayOmanPakistanPalauPalestinian край, OccupiedPanamaPapua Новая ГвинеяПарагвайПеруФилиппиныПиткэрнПольшаПортугалияПуэрто-РикоКатарВоссоединениеРумынияРоссийская ФедерацияРуандаСент-БартелемиСент-ХеленаСент-Китс и НевисСент-ЛюсияСент-Мартен (Френк) ч часть) Сен-Пьер и MiquelonSaint Винсент и GrenadinesSamoaSan MarinoSao Томе и PrincipeSaudi ArabiaSenegalSerbiaSeychellesSierra LeoneSingaporeSint Маартен (Голландская часть) SlovakiaSloveniaSolomon IslandsSomaliaSouth AfricaSouth Джорджия и Южные Сандвичевы IslandsSouth SudanSpainSri LankaSudanSurinameSvalbard и Ян MayenSwazilandSwedenSwitzerlandSyrian Arab RepublicTaiwanTajikistanTanzania, Объединенная Республика ofThailandTimor-LesteTogoTokelauTongaTrinidad и TobagoTunisiaTurkeyTurkmenistanTurks и Кайкос IslandsTuvaluUgandaUkraineUnited Араб ЭмиратыВеликобританияМалые отдаленные острова СШАСоединенные Штаты АмерикиУругвайУзбекистанВануатуВенесуэлаВьетнамВиргинские острова, Британские Виргинские острова, СШАСан-Уоллис и Футуна, Западная Сахара, Йемен, Замбия, Зимбабве, Аландские острова. Промышленность Выберите отрасльБиотехнологииКонсалтингГосударствоИнженерия / ПроизводствоФинансы / ИнвестицииГосударственный институт или агентствоHMO / КлиникаБольница (общественная) Больница (другое) Больница (университетская или преподавательская) Юридические СМИ / Издательское делоМедицинская школаНеправительственная организацияДом для престарелых / Помощь в проживанииФармацевтика / Частный институт врача Кабинет врача (индивидуальная группа) Частный исследовательский кабинет Название работы Выберите должность доцент / лекторБизнес-консультантРазвитие бизнеса, лицензирование или передача технологийБизнес / финансовый аналитик или конкурентная разведкаКлинические вопросы / операции по клиническим испытаниямИнженерГлава академического отдела / факультетаДиректор лаборатории / руководитель библиотеки / специалист по информационным технологиям Библиотекарь / Библиотекарь метаданных / Библиотекарь по открытым наукам / Библиотека данных по исследованиям Директор / руководитель библиотекиПрофессиональный врач / врачДругиеФармацевтический надзор, регуляторные вопросы или качествоPhD студент

Инфлювак суспензия для инъекций — NPS MedicineWise

ЧТО В ЭТОМ БЮЛЛЕТЕНЕ

В этой брошюре даны ответы на некоторые из распространенных вопросов о вакцине Инфлювак.Он не содержит всей доступной информации. Это не заменяет разговора с врачом или фармацевтом. Пожалуйста, прочтите его внимательно и сохраните для использования в будущем.

Все лекарства и вакцины имеют риски и преимущества. Ваш врач сопоставил возможные риски инфлювака с ожидаемыми преимуществами.

Поговорите со своим врачом, медсестрой или фармацевтом, если у вас есть какие-либо опасения по поводу приема Инфлувака.

У вашего врача и фармацевта есть дополнительная информация.

ДЛЯ ЧЕГО ИСПОЛЬЗУЕТСЯ ИНФЛЮВАК

Инфлювак используется для предотвращения определенных типов гриппа (обычно называемого гриппом). Вакцина работает, заставляя организм вырабатывать собственную защиту (антитела) против трех разных типов вируса гриппа.

Каждый год могут появляться новые типы вируса гриппа, поэтому каждый год Influvac заменяется на фрагменты вирусов новых типов. Поэтому вакцинацию против гриппа рекомендуется проводить ежегодно.

Обратите внимание, что Influvac защитит вас только от трех типов вируса гриппа, используемых для изготовления вакцины.Он не защитит вас от гриппа, вызванного другими типами вирусов гриппа, или от инфекций, вызываемых другими агентами, вызывающими гриппоподобные симптомы (например, простуду).

Грипп — инфекционное заболевание. Грипп передается маленькими каплями из носа, горла или рта инфицированного человека. Симптомы гриппа проявляются через 48 часов после контакта с вирусом. К ним относятся озноб, лихорадка, общие боли, головная боль и респираторные симптомы (боль в горле, насморк, кашель).Выраженность и тип симптомов могут различаться. Большинство людей полностью выздоравливают в течение недели. Риск серьезных осложнений (например, пневмонии и смерти) выше у очень молодых, очень старых и хронических больных.

Инфлювак можно применять у взрослых и детей старше 6 месяцев.

Полную информацию о рекомендациях по вакцинации против гриппа см. В соответствующих национальных руководствах по иммунизации.

Инфлювак также может быть назначен другим лицам, подверженным риску заражения гриппом.

Если у вас есть вопросы, обратитесь к врачу.

ДО ПОЛУЧЕНИЯ ИНФЛУВАК

Не принимайте Инфлювак, если:

  • у вас была аллергическая реакция на Инфлювак или любой ингредиент, содержащийся в этой вакцине. Ингредиенты перечислены в конце брошюры
    Признаки аллергической реакции могут включать кожную зудящую сыпь, одышку и отек лица или языка.
  • у вас была аллергическая реакция или вы почувствовали недомогание после любой другой вакцины против гриппа (Fluvax или Fluarix, или Fluvirin, или Vaxigrip)
  • у вас аллергия на куриные белки, такие как яйца или перья
  • у вас аллергия на гентамицин
  • у вас есть тяжелая инфекция с высокой температурой
    Незначительная инфекция, такая как простуда, не должна быть проблемой, но поговорите об этом со своим врачом или медсестрой перед вакцинацией.
  • истек срок годности, указанный на упаковке.
  • упаковка порвана или имеет следы вскрытия.

Поговорите со своим врачом или медсестрой, если вы не уверены, следует ли вам принимать Инфлювак.

Не давайте эту вакцину кому-либо другому.

Ваш врач прописал его специально для вас.

Перед приемом Инфлювака

Сообщите своему врачу, если:

  • у вас была аллергия на какие-либо другие лекарства, продукты питания, красители или консерванты
  • У вас раньше был Инфлювак, и вы почувствовали недомогание, сообщите об этом своему врачу, медсестре или фармацевту. дается следующая доза
  • Вы беременны или собираетесь забеременеть.Ваш врач обсудит с вами преимущества и риски приема Инфлювака во время беременности
  • вы кормите грудью
    Ваш врач обсудит риски и преимущества вакцинации, однако ожидается, что вакцина не вызовет проблем у детей, находящихся на грудном вскармливании
  • вы когда-либо имели заболевание, влияющее на нервную систему, особенно синдром Гийена-Барре (СГБ)
    Если у вас был СГБ, у вас может быть больше шансов заболеть СГБ после вакцинации против гриппа, чем у тех, кто никогда не болел СГБ.
  • у вас есть какие-либо заболевания, например иммунодефицит или нарушение свертываемости крови.

Взаимодействие с другими лекарствами

Сообщите своему врачу, если вы принимаете какие-либо другие лекарства, включая те, которые вы покупаете без рецепта в аптеке, супермаркете или магазине здорового питания, или получили ли вы другую вакцину.

КАК ВВОДИТСЯ ИНФЛУВАК

Врач или медсестра введут инфлювак в виде инъекции.

Поговорите со своим врачом, медсестрой или фармацевтом, если у вас есть какие-либо сомнения по поводу того, как следует вводить эту вакцину.

Сколько вводят

Взрослые и дети старше 36 месяцев: 0,5 мл

Дети от 6 до 35 месяцев: 0,25 мл

Как вводят

Укол можно вводить в мышцу плеча .

Некоторым людям с проблемами кровотечения может потребоваться введение под кожу (подкожно).

Инфлювак никогда не следует вводить внутривенно.

При приеме

Инфлувак обычно назначают однократно ежегодно осенью.

Некоторым людям, особенно с низким иммунитетом, и детям (в возрасте от 6 месяцев до 9 лет), впервые получающих вакцинацию против гриппа, вторую дозу следует вводить через 4 недели после первой. Однако одной дозы достаточно для большинства людей, особенно для тех, кто был вакцинирован против гриппа в прошлом году.

В случае пропуска дозы

Поговорите со своим врачом или медсестрой и как можно скорее назначьте новый визит.

ПОСЛЕ ПОЛУЧЕНИЯ INFLUVAC

На что следует обратить внимание

Будьте осторожны при вождении или эксплуатации машин, пока не узнаете, как Influvac влияет на вас.

Influvac обычно не должен мешать вашей способности управлять автомобилем или работать с механизмами. Но у некоторых людей вакцинация может вызвать головокружение или бред. Убедитесь, что вы знаете, как вы реагируете на Инфлувак, прежде чем водить машину, работать с механизмами или делать что-либо, что может быть опасно, если у вас головокружение или головокружение.

ПОБОЧНЫЕ ДЕЙСТВИЯ

Сообщите своему врачу, медсестре или фармацевту как можно скорее, если вы чувствуете себя плохо во время или после приема дозы Инфлювака.

Инфлювак помогает защитить большинство людей от гриппа, но у некоторых людей он может иметь нежелательные побочные эффекты. Все лекарства и вакцины могут иметь побочные эффекты. Иногда они серьезны; в большинстве случаев это не так. Некоторые побочные эффекты могут потребовать лечения.

Попросите вашего врача, медсестру или фармацевта ответить на любые ваши вопросы.

Большинство нежелательных эффектов инфлювака мягкие и обычно проходят в течение нескольких дней. Эти эффекты, как и в случае с другими вакцинами, обычно возникают вокруг места инъекции.

ЛЕГКИЕ СОБЫТИЯ

Как можно скорее сообщите своему врачу, если вы заметили любое из следующего:

  • покраснение, отек, твердое уплотнение, болезненность, синяки или зуд вокруг места инъекции
  • лихорадка, озноб , головная боль, недомогание (как правило, недомогание)
  • мышечные боли и боли

БОЛЕЕ СЕРЬЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ, КОТОРЫЕ МОГУТ ПРОНИКОВАТЬ РЕДКО

Как и все вакцины, вводимые путем инъекций, существует очень небольшой риск серьезной аллергической реакции.Немедленно сообщите своему врачу или обратитесь в ближайшую больницу в отделение неотложной и неотложной помощи, если вы заметили одно из следующего:

  • отек конечностей, лица, глаз, носа, рта или горла
  • одышка, дыхание или затруднения глотания
  • крапивница, зуд (особенно рук или ног), покраснение кожи (особенно вокруг ушей) или серьезные кожные реакции
  • необычная усталость или слабость, внезапная и сильная.

Как и все вакцины, вводимые путем инъекций, существует очень небольшой риск таких реакций.Аллергия на Инфлювак встречается редко. Любые такие серьезные реакции обычно возникают в течение первых нескольких часов после вакцинации.

Сообщите своему врачу, если вы заметили что-то еще, что заставляет вас чувствовать себя плохо.

Другие побочные эффекты, не перечисленные выше, могут возникнуть во время или вскоре после введения дозы вакцины.

Не пугайтесь этого списка возможных побочных эффектов.

Вы можете не испытывать ни одного из них.

ХРАНЕНИЕ

Инфлувак обычно хранится в аптеке, в поликлинике или в хирургии.

Если вам необходимо хранить вакцину, всегда:

  • Храните Инфлувак в холодильнике при температуре от + 2 ° C до + 8 ° C. УПАКОВКУ НИКОГДА НЕ ДОЛЖЕН БЫТЬ ЗАМОРОЖЕН. ЗАМОРАЖИВАНИЕ РАЗРУШАЕТ ВАКЦИНУ.
  • Храните вакцину в недоступном для детей месте.
  • Храните Инфлювак в оригинальной упаковке, пока не придет время его вводить.

Спросите своего фармацевта, что делать с любым оставшимся инфлюваком, срок действия которого истек или который не использовался.

ОПИСАНИЕ ПРОДУКТА

Внешний вид

Influvac — прозрачная бесцветная жидкость.

Упаковка из 1 или 10 предварительно заполненных (0,5 мл) стеклянных шприцев. AUST R 215555

Ингредиенты

Каждая доза Influvac 0,5 мл содержит три типа фрагментов вируса гриппа в солевом растворе с фосфатным буфером.

  • штамм h2N1 15 микрограммов
  • штамм h4N2 15 микрограммов
  • штамм B 15 микрограммов
    А:
  • хлорид калия, одноосновный фосфат калия, двухосновный фосфат натрия, хлорид натрия, дигидрат хлорида кальция, гексагидрат хлорида магния и вода для инъекций.

Вакцина также содержит ограниченные количества яичного белка, формальдегида, цетримония бромида, полисорбата 80 и гентамицина.

Influvac не производится с человеческой кровью или продуктами крови, или любыми другими веществами человеческого происхождения.

Спонсор

Influvac производится в Нидерландах для:

BGP Products Pty Ltd
Level 1, 30 The Bond
30-34 Hickson Road
Millers Point NSW 2000
Австралия

Этот буклет был подготовлен:
декабрь 2016

Иммуногенность и безопасность четырехвалентной против трехвалентной инактивированной субъединичной противогриппозной вакцины у детей и подростков: рандомизированное исследование фазы III

https: // doi.org / 10.1016 / j.ijid.2019.12.010Права и контент

Основные моменты

Иммуногенность четырехвалентной вакцины против гриппа (QIV) сравнима с трехвалентной вакциной против гриппа (TIV) для штаммов гриппа общей линии.

Иммуногенность QIV превосходит TIV для штаммов B гриппа альтернативной линии.

Включение второй линии B-штамма не ставит под угрозу безопасность.

QIV могут снизить бремя вируса гриппа B у детей и подростков.

Реферат

Цели

Анализировать иммуногенность и безопасность инактивированной субъединичной четырехвалентной противогриппозной вакцины (QIV) по сравнению с трехвалентной противогриппозной вакциной (TIV) у детей и подростков от 3 до 17 лет.

Методы

В этой фазе III многоцентрового двойного слепого исследования 1200 субъектов были рандомизированы для получения QIV ( n = 402), TIV с B-штаммом линии Victoria ( n = 404), или TIV с B-штаммом линии Yamagata ( n = 394).Основная цель заключалась в том, чтобы продемонстрировать не меньшую эффективность QIV по сравнению с TIV по иммуногенности против общих штаммов гриппа на основании титров поствакцинального ингибирования гемагглютинина (HI). Вторичные цели заключались в том, чтобы показать превосходство QIV над TIV по иммуногенности против альтернативных линий B-штаммов и дополнительно охарактеризовать иммунный ответ путем анализа титров нейтрализации вируса и ингибирования нейраминидазы. Реактогенность и безопасность также сравнивали после вакцинации.

Результаты

QIV выявил не худший ответ для общих штаммов (верхние пределы 95% доверительных интервалов для средних геометрических соотношений (GMR) HI TIV / QIV <1.5) и более высокий ответ на альтернативные линии B-штаммов (HI GMRs TIV / QIV <1,0; p <0,0001) по сравнению с TIV. Частота сообщений о местных и системных побочных реакциях была одинаковой в разных группах вакцины.

Выводы

QIV имел иммуногенность, сравнимую с TIV для общих штаммов, и более высокую иммуногенность по сравнению с B-штаммами альтернативной линии в TIV. Профили безопасности и переносимости были сопоставимы.

Ключевые слова

Четырехвалентная вакцина против гриппа

Дети

Иммуногенность

Безопасность

Нейтрализация вируса

Ингибирование нейраминидазы

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2019 Авторы.Опубликовано Elsevier Ltd от имени Международного общества инфекционных болезней.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

INFLUVAC TETRA 2020 — Инактивированная вакцина против гриппа, Abbott, 1 шприц в коробке X 0,5 мл, 1790,00 рупий / коробка


О компании

Год основания1920

Юридический статус фирмы Партнерство Фирма

Характер бизнеса Производитель

IndiaMART Участник с сентября 2005 г.

GST36AAHFS8886M1Z5

Кодекс импорта и экспорта (IEC) 09100 *****

Великобритания экспортирует в Таиланд

, Австралия, Соединенные Штаты Америки

Основанная в году 1920 , Shabbir Medical Hall превратилась в надежного производителя , оптовика, экспортера и торговца фармацевтических таблеток, которые открывают свои двери на рынке.Ассортимент нашей продукции включает в себя таблеток для лечения эректильной дисфункции, противораковые препараты, фармацевтические таблетки, таблетки от гепатита С и многое другое. В соответствии со строгими стандартами, наши продукты готовятся с использованием высококачественных смесей, и все наши продукты проходят тщательную проверку качества. С момента основания отличные продукты нашей компании получили несколько восторженных отзывов от клиентов из-за их приверженности качеству и конкурентоспособным ценам.Кроме того, мы поставляем всю нашу продукцию в защищенной от взлома и влагостойкой упаковке превосходного качества. Таким образом, настаивая на качестве, конкурентоспособных ценах и требованиях клиентов, мы смогли занять известную позицию на рынке. Мы экспортируем нашу продукцию в следующие страны Европа, Гонконг, Макао, Китай, Южная Корея, Мьянма, Мальдивы, Мадагаскар, Болгария, Черногория, Косово и Ирландия .
Компания сбалансирована для вертикального роста, оснащена современным оборудованием, решительными кадрами, рабочей средой, ноу-хау и ресурсами, которые не уступают лучшим в стране.Благодаря нашему хорошо оборудованному и высокопроизводительному производственному предприятию мы можем удовлетворить основные потребности предлагаемых фармацевтических продуктов традиционным и эффективным способом. Кроме того, нашу компанию поддерживает команда профессионалов, которые заботятся о качестве и заботятся о клиентах. Члены нашей команды работают в тесном взаимодействии, чтобы обеспечить клиентам высокоэффективный ассортимент продукции. Мы стремимся не только расширять масштабы и ассортимент нашей отрасли, но и проявляем особый интерес в удовлетворении требований конечного потребителя, которому наша продукция больше всего нужна.Компания стремится к долгосрочной цели по разработке, производству, маркетингу и продаже полезных фармацевтических продуктов.

границ | 2′-Фукозиллактоза олигосахарида человеческого молока улучшает врожденный и адаптивный иммунитет в модели

вакцинации против гриппа для мышей

Введение

Уязвимые группы населения с незрелой или некомпетентной иммунной системой (например, младенцы, недоношенные дети, люди с ослабленным иммунитетом и пожилые люди) подвергают их повышенному риску инфекций, в то время как часто выявляется ограниченная реакция на вакцины (1).Например, вакцинация в раннем возрасте остается проблемой из-за ряда ограничений в создании соответствующих адаптивных и врожденных иммунных ответов. Новорожденные имеют слабые и непродолжительные ответы антител [см. (1)], которого недостаточно для полного предотвращения вирусной репликации и инфицирования. Кроме того, иммунологическая среда новорожденных поляризована в сторону иммунитета Th3-типа с подавлением иммунных ответов Th2-типа [например, выработка интерферона-γ (IFN-γ)] и цитотоксичности (CD8 + Т-клетки) (2, 3), приводя к качественно и количественно ограниченным клеточным ответам на инфекции по сравнению с младенцами более старшего возраста.Таким образом, стратегии, направленные на индукцию защитных гуморальных и оптимальных клеточных иммунных ответов, могут способствовать повышению эффективности вакцины для новорожденных. Более того, недавние данные показывают, что изменение состава кишечной микробиоты также влияет на реактивность противогриппозной вакцины, что дает новое понимание регуляции иммунных ответов после вакцинации (против гриппа) (4). Взятые вместе, диетические вмешательства, которые могут улучшить иммунную систему и сформировать оптимальную микробиоту кишечника, являются многообещающей стратегией повышения эффективности вакцины.

Диета — один из основных факторов окружающей среды, влияющих как на развитие иммунитета, так и на состав и функцию кишечной микробиоты (5, 6). О полезных свойствах грудного молока в отношении связанных с иммунитетом нарушений и инфекционных заболеваний широко сообщалось, и их можно отнести к биоактивным компонентам грудного молока, таким как олигосахариды грудного молока (HMOS). HMOS являются третьими по распространенности компонентами в грудном молоке и составляют защитную систему грудного молока из-за их хорошо известных пребиотических эффектов и мощных свойств прямого взаимодействия с иммунными клетками (7).HMOS состоят из смеси, содержащей более 200 специфических олигосахаридов, состоящих из короткоцепочечных и длинноцепочечных структур, обычно в соотношении 9: 1 соответственно. Наиболее преобладающим олигосахаридом (представляющим до 20% от общего количества HMOS) в молоке матерей с положительным геном фукозилтрансферазы 2 (FUT2) (называемых «секреторами») является 2′-фукозиллактоза (2’FL) (7).

2’FL синтезируется путем ферментативного переноса фукозогуанозин 5′-дифосфат-1-фукозы в лактозу с помощью FUT2, и предполагается, что он способствует пользе для здоровья сложной смеси HMOS (8).В частности, антиадгезионные эффекты на патогены (9), а также пребиотические свойства на мутуалистические микробы были описаны для некоторых структур HMOS (10). Кроме того, сложная смесь HMOS косвенно приводит к регуляции иммунной системы слизистой оболочки через различных механизмов, таких как активность, опосредованная короткоцепочечными жирными кислотами (SCFA). Интересно, что недавние данные показали, что специфические HMOS, включая 2’FL, обнаруживаются в системном кровотоке после перорального приема (11), предполагая потенциальные биологические функции HMOS, помимо использования в качестве предпочтительных бактериальных субстратов, предназначенных для поддержания оптимальной микробиоты кишечника.Внутри слизистой оболочки дендритные клетки (ДК) расположены чуть ниже эпителиального слоя. ДК являются основными детерминантами иммунитета из-за их роли в инициации долгосрочного адаптивного иммунитета путем обнаружения и представления антигенов CD4 + / 8 + Т-клеткам (12, 13) и являются новыми мишенями для повышения эффективности вакцинации (14). Используя гликановые микрочипы, было продемонстрировано, что 2’FL связывается с DC-специфической молекулой межклеточной адгезии-3-захватывающим неинтегрином (DC-SIGN) (15), что позволяет предположить, что определенные HMOS, такие как 2’FL, могут напрямую взаимодействовать с врожденным иммунные клетки, впоследствии влияющие на адаптивный иммунитет у младенцев.Хотя можно найти мало доказательств прямого воздействия аутентичных HMOS на фенотип и / или функции DC, было продемонстрировано, что смесь короткоцепочечных галактоолигосахаридов (scGOS) и длинноцепочечных фруктоолигосахаридов (lcFOS) в соотношении 9: 1, которое было разработано, чтобы напоминать распределение молекулярных размеров и функциональные аспекты нейтральной фракции аутентичной HMOS, напрямую влияет на развитие ДК, происходящих из человеческих моноцитов, по их фенотипам, продукции цитокинов и Т-клеткам. заправочная способность in vitro (16). In vivo , специфические пребиотические олигосахариды эффективно улучшали вакцино-специфические иммунные ответы Th2-зависимым образом с использованием нескольких моделей вакцинации мышей (17–20). Таким образом, мы предположили, что 2’FL, который структурно идентичен конкретной аутентичной HMO, может вызывать прямые иммуномодулирующие эффекты в модели вакцинации мышей и, таким образом, улучшать чувствительность вакцины.

Материалы и методы

Мыши

Шестинедельные самки мышей C57Bl / 6JOlaHsd были приобретены у Envigo (Хорст, Нидерланды) и размещены в помещении для животных Утрехтского университета и содержались в нормальных условиях с 12-часовым циклом темноты и света с доступом к пище и воде. ad libitum .Перед началом экспериментов животные получали стандартный рацион и регулярный уход в течение недели по прибытии в помещение для животных. Все эксперименты были одобрены Комитетом по этике животных Утрехтского университета (номер утверждения DEC 2015.II.243.038).

Протокол вакцинации

Как показано на Фигуре 1A, после 1-недельного периода акклиматизации мышей кормили контрольной (AIN93G) или диетой, содержащей 2’FL, до конца эксперимента ( n = 9 на группу). Концентрация олигосахаридов в материнском молоке варьируется, что зависит как от секреторного типа матери, так и от периода лактации.Грудное молоко может содержать до 20 г / л общих олигосахаридов, из которых в среднем выявляется 2,7 г / л 2’FL, в зависимости от метода обнаружения (7). Полусинтетические диеты AIN93G были смешаны с 0,25, 0,5, 1, 2,5 или 5% 2’FL (SSNIFF Spezialdiäten GmbH, Германия), чтобы можно было проверить эффекты 2’FL, исходя из физиологической концентрации человека (полученной микробной ферментацией, с чистотой> 90%) на иммунные ответы, вызванные вакциной. Процентное содержание 2’FL заменяли на равное количество (вес / вес) общих углеводов, присутствующих в контрольной диете.Подкожная вакцинация проводилась с использованием Инфлювака (Abbott Biologicals B.V., Weesp, Нидерланды) с сезона 2015/2016. Эта инактивированная вакцина против вируса гриппа основана на выделенных антигенах гемагглютинина (HA) и нейраминидазы трех штаммов миксовируса гриппа в дозе, эквивалентной 30 мкг / мл HA на штамм (всего 90 мкг / мл HA). Под анестезией изофлураном мыши получали первичную вакцинацию и бустерную вакцинацию в общем объеме 100 мкл, концентрация вакцины (90 мкг / мл).Используемая концентрация была основана на нашем пилотном эксперименте по титрованию вакцины (данные не показаны). Ревакцинация проводилась через 21 день после первичной вакцинации. Эксперименты закончились через 10 дней после повторной вакцинации. Группа отрицательного контроля ( n = 3), включенная во все эксперименты (обозначенная «фиктивной группой»), получала инъекции 100 мкл PBS. Ложная группа не использовалась для статистических сравнений с группами, получавшими добавки, но служит для демонстрации специфичности реакций, индуцированных вакциной.Реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) вызывались через 9 дней после ревакцинации внутримышечно. инъекция 20 мкл Influvac в ушные раковины правого уха и 20 мкл PBS в ушные раковины левого уха в качестве базальной линии. Толщину ушей измеряли в двух экземплярах перед провокацией вакциной и через 24 часа после этого с помощью цифрового микрометра (Mitutoyo Digimatic 293561, Венендал, Нидерланды). Антигенспецифические ответы DTH рассчитывали по формуле: DTH = Правое ухо (толщина через 24 часа — @ 0 часов) — Левое ухо (толщина через 24 часа — @ 0 часов).Кроме того, после умерщвления животных оба уха прокалывали острым металлическим сверлом для измерения веса ушей. Увеличение веса уха = Правое ухо (Вес) — Левое ухо (Вес).

Рисунок 1 . Влияние диетического вмешательства с 2′-фукозиллактозой (2’FL) на вакцино-специфические реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и уровни антител в сыворотке, собранной на 31 день. (A) Схематический обзор дизайна исследования (SDI = Начать диетическое вмешательство). (B) ответ DTH и разница веса уха (C) между левым (заражение ухом с PBS) и правым (заражение ухом с помощью Influvac) ухом через 24 часа после заражения. Специфические для вакцины уровни (D), IgG2a и (E), IgG1 в сыворотке, измеренные с помощью анализов ELISA. Данные представлены как среднее ± SEM n = 7–9 / группа в (B – E) . В панелях (B, C) квадратичная регрессия была проведена на планшете 7 для анализа зависимости доза-ответ, и оптимальная аппроксимирующая кривая нанесена на график вместе с 95% доверительным интервалом.В панелях (D, E) для выбранных групп использовали односторонний дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Бонферрони. * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, указывают на обнаруженные статистические различия по сравнению с вакцинированной контрольной группой.

Вакциноспецифические иммуноглобулины (Ig) в сыворотке

Кровь собирали через прокол щеки в конце эксперимента перед разделением мышей. Образцы крови центрифугировали (10000 об / мин в течение 10 мин) и сыворотку хранили при -20 ° C до анализа вакцин-специфических антител с помощью ELISA.Определение вакцин-специфических антител проводили, как описано ранее (17). Вкратце, 96-луночные планшеты (планшет Costar EIA / RIA, Alphen a / d Rijn, Нидерланды) покрывали Influvac, разведенным 1: 100 в PBS. Блокирующим реагентом был 2% BSA (Sigma, Zwijndrecht, Нидерланды) в PBS. Для расчета стандартной кривой добавляли серию разведений объединенной сыворотки, которая содержала вакцино-специфические антитела. 10 мкл сыворотки на мышь использовали для определения уровней антител с конечным разведением 14700 × путем серийного разведения.Антитела против IgG1-биотина и анти-IgG2a-биотина (Becton Dickinson, Heerhugowaard, Нидерланды) разводили 1: 1000 в буфере для разведения. Для конъюгированных с биотином антител планшеты затем инкубировали с разведением 1: 20 000 стрептавидин-HRP (Biosource, Etten-Leur, Нидерланды). Оптическую плотность измеряли с помощью микропланшетного ридера Benchmark (BioRad, Hercules, Калифорния, США) при длине волны 490 нм. Концентрации в исследуемых сыворотках были рассчитаны в условных единицах (AU) относительно стандартной кривой разбавленной объединенной сыворотки.Наивысшая концентрация объединенной сыворотки была определена как 100 AU / мл.

Проточная цитометрия иммунных клеток

Были получены свежевыделенные клетки селезенки и брыжеечных лимфатических узлов (MLN), которые ресуспендировали в PBS / 1% бычьего сывороточного альбумина и инкубировали с антимышиным CD16 / CD32 (Mouse BD Fc Block; BD Pharmingen, San Jose, CA, USA) для блокировать неспецифические сайты связывания в течение 20 мин на льду. Для окрашивания поверхности клетки инкубировали с CD4-PerCp-Cy5.5, CD69-PE, CD25-AlexaFluor488, CD11c-PerCp-Cy5.5, CD103-APC, CD40-FITC, CD86-PE-cy7, MHCII-APC, CD3-Percy5.5, CD27-PE, CD19-APC, B220-FITC, NK1.1-APC или CD49b-FITC (eBiosciences , Сан-Диего, Калифорния, США). Жизнеспособные клетки выделяли с помощью фиксируемого красителя жизнеспособности eFluor ® 780 (eBioscience), на образец 0,5 × 10 6 и 1,0 × 10 6 клеток использовали для поверхностного и внутриклеточного окрашивания соответственно. При всех окрашиваниях было получено более 80% живых клеток. Для обнаружения факторов транскрипции клетки сначала фиксировали и пермеабилизировали с помощью набора буферов для окрашивания forkhead box protein 3 (Foxp3) (eBioscience) в соответствии с протоколом производителя, а затем окрашивали Foxp3-PE-cy7 и Tbet-APC (eBioscience).Для каждого антитела использовали изотипические контроли, а контроли флуоресценции минус один использовали для идентификации положительной популяции от отрицательной (все изотипы приобретены у eBioscience). Кроме того, антитело против CD16 / 32 мыши использовали в качестве Fc-блока перед окрашиванием образцов (eBioscience). Результаты были собраны с помощью проточного цитометра BD FACSCanto II (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, США) и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowLogic (Inivai Technologies, Mentone, Виктория, Австралия).

Генерация дендритных клеток костного мозга (BMDC)

Избыточные мыши (самки, 11-недельные C57BL / 6JOlaHsd) содержались в нашем помещении для животных в Центральной лаборатории животных (GDL) Утрехтского университета, Нидерланды. Клетки костного мозга выделяли из бедренной кости и культивировали в среде RPMI 1640 (Gibco) с добавлением 10% FBS и 100 Ед / мл пенициллина / стрептомицина, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия и минимальной необходимой среды Eagles (MEM), не являющейся незаменимой. аминокислоты (все от Gibco Life Technologies) в присутствии 10 нг / мл GM-CSF (Prosepec, Нидерланды) в течение 6 дней для получения незрелых BMDC (iDC).Затем индуцированные iDC загружали вакциной в концентрации 0,9 мкг / мл и инкубировали в течение 24 часов при 37 ° C, 5% CO 2 перед совместным культивированием со спленоцитами, выделенными от вакцинированных мышей, получавших диетические вмешательства. НДК, обработанные средой, использовали в качестве отрицательного контроля.

Ex vivo Рестимуляция целых спленоцитов с помощью BMDC, нагруженных вакциной

Свежие селезенки удаляли в асептических условиях и получали суспензии отдельных клеток, как описано выше.Спленоциты (5 × 10 6 клеток / мл) совместно культивировали с DC (5 × 10 5 клеток / мл), загруженными с вирусом гриппа или без него, в 96-луночных планшетах для культивирования с U-образным дном в течение 5 дней при 37 ° C, Использовали 5% CO 2 , среду RPMI 1640 (Gibco) с добавлением 10% FBS и 100 Ед / мл пенициллина / стрептомицина, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия и заменимых аминокислот Eagles MEM (все от Gibco Life Технологии). Супернатанты собирали на 5 день и хранили при -80 ° C до использования и анализировали на концентрацию IL-10, IL-17A, IL-13, IL-2 и IL-4 с помощью иммуноанализа на основе гранул (Boiolgend LGENDplex, Великобритания, Лондон) и IFN-γ (eBioscience, Нидерланды) и TNF-α (eBioscience, Нидерланды) с помощью анализов ELISA в соответствии с инструкциями производителя.

Маркировка CFSE и совместное культивирование целых спленоцитов с вакцинами BMDC

Параллельно спленоциты были помечены клеточным красителем CFSE (Thermo Fisher, Нидерланды) в соответствии с инструкциями производителей в конечной концентрации 1 мкМ, были получены FITC-положительные клетки и сокультивированы с ДК, нагруженными гриппом или без него. вирус в соотношении 10: 1 в 96-луночных планшетах для культивирования с U-образным дном в течение 5 дней при 37 ° C, 5% CO 2 . На 5 день смесь сокультивированных клеток окрашивали красителем жизнеспособности, CD4-APC и CD8-PE (eBioscience, Нидерланды).Пролиферацию спленоцитов определяли, устанавливая ворота на пролиферирующих клетках и сравнивая процент пролиферированных клеток от мышей 2’FL с вакцинированными контрольными мышами.

Анализ КПЦР

образцов подвздошной кишки от вакцинированных против гриппа мышей, умерщвленных после измерения DTH, собирали в RNAlater (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) и хранили в течение ночи в холодильнике, после чего хранили при -80 ° C до выделения мРНК. . Перед выделением мРНК ткани гомогенизировали с использованием набора Precellys ® CKMix Tissue Homogenizing Kit (Bertin, KT039611009.2) с гомогенизатором Precellys 24 (Bertin, EQ 03119-200-RD000.0). мРНК экстрагировали с использованием набора NucleoSpin ® RNA Plus (Macherey-Nagel, 740984.250) в сочетании с набором рДНКаз (Macherey-Nagel, # 740963) для удаления загрязняющей ДНК. кДНК синтезировали с использованием расширенного набора iScript ™ (Bio-Rad, Базель, Швейцария) в соответствии с протоколом производителя в программируемом терморегуляторе PTC-100 (исследование MJ, PTC-100). Образцы кДНК и мРНК хранили при -80 ° C. Количественный анализ выполняли на системе обнаружения CFX96 Real-Time C1000 Thermal Cycler с использованием IQ ™ SYBR ® Green Supermix в соответствии с протоколом производителя (оба от Bio-Rad).Были изготовлены специально разработанные праймеры для CD40, CD80, CD86, PD-L1, TGF-β3, TNF-α, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12β, CXCL9, CXCL10, FUT2, FUT8 и ссылки ген GAPDH (Biolegio, Nijmegen, Нидерланды, последовательности генов и температуры отжига перечислены в таблице 1). 300 нМ прямой и обратный праймеры использовали в 10 мкл реакциях (8,8 мкл смеси + 1,2 мкл кДНК), которые измеряли в 96-луночном планшете Hard-Shell PCR с тонкими стенками (Bio-Rad, HSP9601). Планшет покрывали пленкой Microseal «B» (Bio-Rad, MSB1001), а затем измеряли при соответствующей температуре в течение 40 циклов в термоциклере C1000 системы реального времени CFX96 (Bio-Rad, 1855195).Все образцы были измерены в трех экземплярах, значения в каждом трех экземплярах, которые отличались ≥0,5 CT, были удалены. Для каждой мыши брали среднее из оставшихся значений. Относительную экспрессию мРНК каждой мыши рассчитывали с помощью метода Ливака (2-ΔΔCT) (21) и отображали как кратное изменение среднего значения контрольной группы (однократное).

Таблица 1 . Последовательности специфических праймеров для обнаруженных генов с соответствующим номером доступа.

Лечение BMDC

незрелых BMDC были созданы, как описано в разделе «Создание дендритных клеток, полученных из костного мозга».2’FL (1,25–10 мг / мл) добавляли к нДК и инкубировали в течение 24 ч при 37 ° C, 5% CO 2 . НДК, обработанные средой, использовали в качестве отрицательного контроля, а ЛПС (100 нг / мл) добавляли для созревания НДК и служили в качестве положительного контроля. Фенотипы DC были идентифицированы с помощью проточной цитометрии, измеряющей поверхностный маркер MHC-I, MHC-11, CD40 и CD86. Кроме того, уровни IL-10 и IL-12p70 в супернатанте оценивали с помощью наборов для ELISA (eBioscience, Нидерланды) в соответствии с протоколом производителя.

Статистический анализ

Все данные были проанализированы с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 7.0 для Macintosh (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США). Анализ зависимости доза-реакция был описан в нашем предыдущем исследовании (17). Все другие наборы данных были проверены на нормальность в распределении (и нормализованы с использованием логарифмического преобразования), после чего данные были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим анализом множественного сравнения post hoc Бонферрони для выбранных сравнений. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего.* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 и **** p <0,0001 считались статистически значимыми.

Результаты

Диетический 2’FL, улучшенный вакцино-специфический клеточный и гуморальный ответ

У мышей C57BL / 6 ( n = 9 на группу), получавших дважды подкожно. Influvac вакцинация, диета в диапазоне от 0,25 до 5% 2’FL (вес / вес от общего рациона) была обеспечена, и были проанализированы антиген-специфические реакции на вакцинацию (Рисунок 1A).У мышей, получавших 2’FL, по сравнению с вакцинированными мышами, получавшими контрольную диету, было обнаружено дозозависимое увеличение гриппозависимой реакции DTH (измеряемой как отек ушей и увеличение веса ушей) (фиг. 1B, C). Была проведена квадратичная регрессия и было выявлено линейное увеличение DTH до 1%, обеспечивающее фармацевтический оптимум на 2,5% 2’FL. В частности, диетическое вмешательство с 1% 2’FL значительно увеличивало ответ на DTH ( p <0,05) и прибавку в весе ушей ( p <0.001) у вакцинированных мышей, получавших 2'FL, по сравнению с контрольной диетой. Вакцино-специфические гуморальные иммунные ответы были обнаружены в сыворотке, полученной в конце эксперимента (31 день). Специфические для подкласса концентрации IgG2a и IgG1-антител определяли в сыворотке вакцинированных мышей, получавших контрольную диету, и сравнивали с фиктивно вакцинированными мышами, что указывает на то, что индуцированные антитела являются вакцино-специфическими (данные не показаны). Кроме того, в сыворотке вакцинированных мышей, получавших 2'FL с пищей, повышались уровни как вакцино-специфических IgG2a ( p <0.001 для 1% 2'FL, p <0,01 для 2,5% 2'FL и p <0,05 для 5% 2'FL) и IgG1 ( p = 0,0945 для 0,5% 2’FL, p <0,001 для 1% 2'FL, p, <0,05 для 2,5% 2'FL, p, <0,05 для 5% 2'FL) были обнаружены по сравнению с мышами, получавшими контрольную диету (Фигуры 1D, E).

Диетический 2’FL Повышенная активация и частота В-клеток

Увеличение уровней антител, опосредованное 2′-фукозиллактозой, побудило нас исследовать, затронуто ли развитие В-клеток.С этой целью частота и статус активации B-клеток в изолированной селезенке и клетках MLN от мышей, получавших 0,5 и 1% 2’FL, сравнивали с вакцинированными мышами, получавшими контрольную диету, с использованием проточной цитометрии (рис. 2A, стратегия стробирования). Анализ экспрессии поверхностных маркеров CD19, CD220 и CD27 выявил значительно более высокую частоту CD19 + B220 + B-клеток в селезенках и MLN у мышей, получавших 0,5 и 1% 2’FL, по сравнению с контрольными мышами (рис. 2B, 2.1 и 2.5. % увеличение на 0,5 и 1% 2’FL, p <0.05, p <0,01 соответственно; Рисунок 2D, 6,8 и 5,2% увеличиваются на 0,5 и 1% 2'FL, p <0,01, p <0,01 соответственно). Экспрессия CD27 была использована, чтобы отличить память от наивных В-клеток (22). Хотя не было обнаружено никакого влияния на процентное содержание активированных CD19 + B220 + CD27 + B-клеток в MLN (рис. 2E), был более высокий процент (0,5%) CD27 + активированных CD19 + B220 + B-клеток в клетках селезенки от вакцинированных мышей, получавших 1% 2'FL по сравнению с контрольными вакцинированными мышами (рис. 2C, p <0.05).

Рисунок 2 . Проточно-цитометрический анализ субпопуляций B-клеток в селезенке и мезентериальном лимфатическом узле (MLN), собранных на 31 день. (A) Репрезентативные графики B-клеток в селезенке из контроля (Cont) и 1% 2′-фукозиллактозы (2 ‘ FL) группы. Процент CD19 + B220 + B-клеток в селезенке (B), и (D), млн. Процент В-клеток памяти (CD27 + из CD19 + B220 + клеток) в селезенке (C) и (E) мл. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 9).* p <0,05, ** p <0,01 - значимые различия по сравнению с контрольными мышами. Для выбранных групп использовали однофакторный дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Бонферрони.

Диетические 2’FL, дифференциально активируемые DC в селезенке и MLN

Зная центральную роль DC в представлении антигенов B-клеткам и активации популяций CD4 + / 8 + T-клеток, мы затем изучили фенотип и статус активации DC в селезенке и MLN мышей, получающих 2’FL.Свежие изолированные спленоциты и клетки MLN окрашивали маркерами созревания (MHC-II, MHC-I) и костимулирующими поверхностными маркерами (CD40, CD86) и количественно оценивали с помощью проточной цитометрии (рис. 3A). Примерно 1% увеличение CD11c + MHCII + DC было обнаружено в спленоцитах, выделенных от мышей, получавших 1% 2’FL, по сравнению с контрольными мышами (фиг. 3B, p <0,05). Кроме того, экспрессия CD86 + (фигура 3C, p = 0,06) и CD40 + (фигура 3D, p <0,05) на DC CD11c + MHCII +, обнаруженная с помощью средней интенсивности флуоресценции (MFI), была увеличена у мышей, получавших 1% 2. 'FL диета.Не было обнаружено различий в экспрессии MHC-I на DC селезенки между 2'FL и контрольными мышами, получавшими диету (фиг. 3E).

Рисунок 3 . Проточно-цитометрический анализ процентного содержания дендритных клеток (DC) и экспрессии поверхностных маркеров в селезенке и брыжеечном лимфатическом узле (MLN) на 31 день. DC селезенки анализировали на основании их экспрессии CD11c и MHC-II. (А) . Репрезентативные графики и гистограмма селезеночных DC из контрольной (Cont) и 1% 2′-фукозиллактозы (2’FL) групп.Процент (B) CD11c + MHCII + DC в общих спленоцитах, статус активации дополнительно определялся на основе их средней интенсивности флуоресценции (MFI) поверхностных маркеров (C) CD86, (D) CD40 и (E) Выражение MHC-I. (F) Репрезентативные графики и гистограмма MLN-DC из контрольной (продолжение) и группы 1% 2’FL. (G) Процент CD11c + MHC-II + в общем количестве клеток MLN; (H) процент толерогенных дендритных клеток (tDC) (CD103 + CD11c + MHC-II + клеток) в MLN-DC; MFI поверхностных маркеров (I), CD86 и (J), экспрессия CD40 на tDC.Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для n = 6–9 мышей на группу; * p <0,05, изображена значительная разница по сравнению с контролем с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим непараметрическим тестом Краскела-Уоллиса.

В MLN предполагается, что CD103 + DC представляют настоящих DC из-за их способности индуцировать дифференцировку наивных CD4 + T-клеток в Foxp3 + регуляторные T-клетки (Treg) (23) и заставлять отвечающие T-клетки экспрессировать молекулы, находящиеся в кишечнике (24).Хотя процент CD11c + MHCII + DC в MLN существенно не отличался между группами диетического вмешательства (Рисунок 3F, G), значительное увеличение (5,4%) в популяции CD103 +, так называемых толерогенных DC (tDCs, CD103 + CD11c + MHC- II + DC) был обнаружен у мышей, получавших 1% диеты 2’FL, по сравнению с контрольными мышами (фигура 3H, p <0,05). Кроме того, MFI экспрессии CD86 + на CD103 + DC значительно снизился (фигура 3I, p <0,05), тогда как MFI экспрессии CD40 + был значительно увеличен (фигура 3J, p <0.05) на изолированных MLN от мышей, получавших диетическое вмешательство 1% 2'FL, по сравнению с вакцинированными контрольными мышами. Эти данные показывают, что добавление 1% 2'FL в рацион индуцирует больше активированных DC в селезенке и более толерогенные фенотипические DC в MLN.

Повышение частоты Th2 и Treg в селезенке мышей, принимающих 2′FL

Изменения фенотипа DC могут напрямую влиять на антигенпрезентирующую способность и, следовательно, на специфические Т-клеточные ответы. Чтобы проверить, модулируются ли Т-клеточно-специфические ответы вакцины с помощью 2’FL с перекосом по Th2 [важно для повышения эффективности вакцины (25)], свежевыделенные спленоциты и MLN окрашивали внутриклеточным фактором транскрипции Tbet (Th2) и Foxp3. (Treg) (Рисунок 4A).В селезенке не было обнаружено различий в частоте CD4 + или CD4 + CD69 + Т-клеток (Рисунки 4B, C). Однако Tbet + CD4 + CD69 + Т-клеток (активированных клеток типа Th2) был увеличен на 1% 2’FL по сравнению с вакцинированными мышами, получавшими контрольную диету (фигура 4D, p <0,05). Кроме того, экспрессия Tbet + на CD4 + CD69 + клетках была повышена ( p <0,01, данные не показаны), а активация Tbet + CD69 + CD4 + Т-клеток, измеренная с помощью MFI экспрессии CD69, была увеличена у мышей, получавших 1% рацион. 2'FL по сравнению с вакцинированными мышами, получавшими контрольную диету ( p <0.05, рисунок 4E).

Рисунок 4 . Проточно-цитометрический анализ популяций T-хелферов (Th) 1 и регуляторных Т-клеток (Tregs) в селезенке на 31 день. (A) Показаны репрезентативные графики CD4 T-клеток селезенки из группы 1% 2’FL. (B) Процент CD4 + Т-клеток в общем количестве живых лимфоцитов. Процент (C) ранних (CD69 + CD4 + клеток) и (D) поздно активированных (CD25 + CD4 + клеток) CD4 + T-клеток в селезенке (F) .Процент (D) Th2 клеток (Tbet + CD69 + CD4 + клеток) и (G) Tregs (Foxp3 + CD25 + CD4 + клеток) в CD4 + T-клетках. Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) экспрессии CD69 (E), Th2 и (H), Treg. (I) Процент Foxp3 + Tbet + Treg (Tbet + CD4 + CD25 + Foxp3 + клеток). Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего n = 7–9 / группа; * p <0,05, ** p <0,01 - значимые различия по сравнению с контролем с использованием непараметрического теста Краскела-Уоллиса, за которым следует апостериорный тест Данна для выбранных пар.

И наоборот, обе дозы 2’FL немного увеличили процент CD25 + CD4 + Т-клеток селезенки (увеличение на 1,4 и 1,6% на 0,5 и 1% 2’FL, соответственно, рис. 4F, p <0,01 для 0,5% 2 ′ FL и p <0,001 для 1% 2′FL), а также процентное соотношение (увеличение на 0,6 и 0,8% на 0,5 и 1% 2′FL, соответственно, рисунок 4G, p = 0,06 для 0,5% 2 ′ FL, p <0,01 для 1% 2'FL) и экспрессия маркера активации CD69 ( p <0.01 для 1% 2'FL, фиг. 4H) Foxp3 + Treg по сравнению с контрольной диетой. Кроме того, было обнаружено 2% увеличение Foxp3 + Tbet + Treg в селезенке у 1% мышей 2'FL (рис. 4I, p <0,05). Аналогичные эффекты 2'FL на субпопуляции Т-клеток в MLN показаны на рисунке S1 в дополнительных материалах.

Вакцино-специфическая пролиферация CD4 + и CD8 + Т-клеток увеличилась у мышей, получавших диетический 2’FL, после

Ex vivo рестимуляции

Чтобы исследовать, являются ли измененные Т-клеточные ответы в селезенке специфичными для вакцины, была проведена рестимуляция ex vivo .CFSE-меченные цельные клетки селезенки от фиктивных или вакцинированных мышей совместно культивировали с BMDC, нагруженными гриппом или без него (та же партия, что использовалась при первичной и бустерной вакцинации), общее количество живых лимфоцитов, пролиферацию CD4 + и CD8 + Т-клеток оценивали с помощью проточной цитометрии. через 5 дней совместного культивирования (стратегия гейтинга, фиг. 5A). Неожиданно оказалось, что при совместном культивировании с контрольными DC абсолютное количество общих спленоцитов увеличивалось у вакцинированных мышей, получавших 1% 2’FL, по сравнению с вакцинированными контрольными мышами (фиг. 5B, p <0.01) и 0,5% 2'FL (Рисунок 5B, p <0,05), тогда как при совместном культивировании с контрольными DC не наблюдалось влияния на процент пролиферации CD4 + и CD8 + Т-клеток при совместном культивировании с контрольными DC (рисунки 5C, D). . После рестимуляции нагруженными гриппом DC низкофоновые ответы были показаны для всех трех параметров (а именно, общего количества спленоцитов, процентного содержания CD4 + и CD8 + Т-клеток) у ложно вакцинированных мышей. Все вакцинированные группы показали значительно большее количество живых клеток по сравнению с фиктивными мышами, что указывает на то, что ответы были специфичными для вакцины.Вакцинированные мыши, получавшие 1% 2'FL, имели даже более высокое абсолютное количество живых клеток по сравнению с контрольными вакцинированными мышами (фиг. 5B, , p <0,01). Было обнаружено на 13% больше CD4 + и на 7,4% больше CD8 + Т-клеток в группе, получавшей 1% 2'FL, по сравнению с контрольной вакцинированной группой (Рисунок 5C, p <0,01; Рисунок 5D, p <0,001, соответственно) , тогда как изменения в пределах 0,5% 2'FL не достигли значимости. Эти данные показывают, что диетическое вмешательство с 2'FL рядом с развитием B-клеток также увеличивало вакцино-специфические Т-клеточные ответы.

Рисунок 5 . Вакциноспецифическая пролиферация и продукция цитокинов после рестимуляции ex vivo дендритными клетками, полученными из костного мозга (BMDC), нагруженными гриппом. (A) Типичные графики пролиферированных CD4 + и CD8 + Т-клеток после рестимуляции ex vivo . (B) Абсолютные события живых спленоцитов после рестимуляции ex vivo . Процент пролиферировавших (C) CD4 + и (D) CD8 + Т-клеток после рестимуляции ex vivo .Продукция (E), IFN-γ и (F) IL-2 после рестимуляции ex vivo . BMDC были получены перед разделом на 25-й день и нагружены 0,9 мкг / мл инфлювака или без него в течение 24 часов, на 31-й день BMDC были совместно культивированы с CFSE-меченными цельными клетками селезенки от ложных или вакцинированных мышей в соотношении 1: 10 в течение 5 дней, свежие суспензии селезенки получали из образцов селезенки, собранных на 31 день. Сокультивированные клетки окрашивали красителем жизнеспособности (APC-cy7), антителами к CD4 (APC) и CD8 (PE) перед измерением FACS, пролиферацию клеток контролировали по уровням разбавления CFSE.В параллельном эксперименте BMDC, нагруженные вирусом гриппа, совместно культивировали с целыми клетками селезенки фиктивных или вакцинированных мышей в соотношении 1:10 в течение 5 дней, супернатант собирали на 5 день. Интерферон-γ (IFN-γ) измеряли с помощью ELISA. ; IL-2 измеряли с помощью анализа Biolegend. Данные представлены как среднее ± SEM n = 2–3 / группа в фиктивной группе и n = 6–9 / группа в других группах; Ложная группа ( n = 3) никогда не использовалась для статистических сравнений с группами, получавшими добавки, а служила исключительно для демонстрации специфичности ответов, вызванных вакциной.* p <0,05, ** p <0,01 значительно отличаются по сравнению с контролем с использованием непараметрического теста Краскела-Уоллиса, за которым следует апостериорный тест Данна для выбранных пар.

Параллельно с этими анализами пролиферации немеченые спленоциты совместно культивировали с BMDC, нагруженными гриппом или без него, и индуцированная вакциной продукция цитокинов определялась в клеточном супернатанте, собранном на 5 день. В соответствии с наблюдаемыми изменениями Т-клеток в селезенке, оба 0 .Диеты с 5 и 1% 2’FL индуцировали более высокую продукцию IFN-γ клетками селезенки по сравнению с контрольной диетой (рис. 5E, p <0,05, p <0,05, соответственно) и тенденцию к увеличению уровней IL- 2 после повторной стимуляции вакциной (фиг. 5F).

Диетическая 2’FL, дифференциально измененная экспрессия мРНК кишечника

Для выявления эффектов диетического 2’FL на воспаление кишечника анализировали профили экспрессии мРНК подвздошной кишки. 2’FL — это FUT2-зависимая HMOS, а FUT2 — это ген, кодирующий α (1,2) -фукозилтрансферазу, которая снижает риск инфекционных заболеваний (26).Здесь мы обнаружили значительное увеличение экспрессии мРНК FUT2 в подвздошной кишке мышей, получавших 2’FL (рис. 6A, p <0,05 для 0,5% 2'FL, p <0,01 для 1% 2'FL). С другой стороны, уровни мРНК FUT8 были значительно подавлены у мышей, получавших 2'FL (фиг. 6A, p <0,001 для 0,5% 2'FL, p <0,05 для 1% 2'FL).

Рисунок 6 . Влияние диетического вмешательства с 2′-фукозиллактозой (2’FL) на экспрессию мРНК в подвздошной кишке, собранной на 31 день.Относительная экспрессия (A) генов, связанных с фукозилтрансферазами, включая фукозилтрансферазу (FUT) 2 и FUT8, (B) анти- (TGF-beta3, IL-10) и провоспалительные цитокины (IL-12β, IL-1α, IL -1β, TNF-α) и экспрессия генов, связанных с хемокинами (CXCL10, CXCL9), а также ген костимулирующих (CD80, CD86, CD40) и ингибирующих (PD-L1) маркеров (C) . Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего n = 6–9 / группа; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0.001 указывают на существенные различия. Был использован непараметрический тест Краскела-Уоллиса, за которым последовал апостериорный тест Данна для выбранных пар.

Для выявления специфических противовоспалительных свойств 2’FL на клетках кишечника человека (27) были измерены гены, связанные как с противовоспалительными, так и с провоспалительными цитокинами. Как показано на Фигуре 6B, никакого влияния диетических вмешательств на экспрессию мРНК IL-10 выявлено не было, однако было обнаружено увеличение экспрессии мРНК TGF-β3 ( p <0.01 для 1% 2′FL). Экспрессия мРНК (про) воспалительных генов, связанных с цитокинами, а именно IL-1α, IL-1β, TNF-α и CXCL-10, за исключением CXCL-9, была значительно снижена диетическим 2'FL. Интересно, что экспрессия мРНК IL-12β также была усилена, что, по-видимому, связано со статусом активации DC, показанным на Фигуре 6C. Кроме того, данные кПЦР выявили снижение уровня мРНК CD86 и повышение уровня мРНК CD80 в подвздошной кишке за счет диетического 2'FL (фиг. 6C). Повышенная мРНК PD-L1 подтверждает толерогенный фенотип кишечных ДК, поскольку экспрессия PD-L1 коррелирует с индукцией Foxp3 + Tregs (28).

2’FL напрямую модулируют фенотип и антигенпрезентирующую способность BMDC

In vitro

Поскольку HMOS также являются потенциальными модуляторами микробиоты, до сих пор неясно, являются ли наблюдаемые иммуномодулирующие эффекты in vivo пищевого 2’FL прямыми и / или зависимыми от микробиоты. Чтобы изучить прямое влияние 2’FL на иммунную регуляцию, in vitro, исследование , в котором BMDC обрабатывали четырьмя различными концентрациями [0,125, 0,25, 0,5 и 1% (вес / объем в среде)] 2’FL. был выполнен.Необработанные средой и клетки, обработанные LPS (100 нг / мл), использовали в качестве отрицательного и положительного контроля соответственно. Используя ту же стратегию анализа, которая использовалась для эксперимента in vivo , DC сначала были выделены путем стробирования по клеткам CD11c + MHCII + (фиг. 7A). 2’FL не оказывал влияния на процентное содержание CD11c + MHCII + DC по сравнению с необработанными контрольными клетками (фигура 7B). Процент экспрессии CD40 + и CD86 + на BMDC был увеличен (0,29 относительного раза и 0,24 относительного раза, соответственно) на 1% 2’FL (Рисунки 7C, D), тогда как только MFI экспрессии CD86 + был значительно увеличен на 1% 2. ′ FL (рис. S2A в дополнительных материалах, 0.Относительное увеличение в 26 раз, p <0,01). Хотя процентное содержание MHC-I не изменилось (фигура 7E), MFI экспрессии MHC-I на BMDC была значительно увеличена на 1% 2'FL (рисунок S2C в дополнительном материале, относительное увеличение в 0,47 раза, p <0,05 ). 2'FL не влиял на продукцию IL-10 (фиг. 7F), но было обнаружено увеличение продукции IL-12p70 при самой низкой концентрации (фиг. 7G, p <0,01) по сравнению с необработанным контролем.

Рисунок 7 .Влияние 2′-фукозиллактозы (2’FL) на фенотипы и антигенпредставляющую способность дендритных клеток костного мозга (BMDC) in vitro . (А) . Репрезентативные графики и гистограмма дендритных клеток селезенки (DC) из необработанного контроля (Cont) и 1% 2’FL, LPS (100 нг / мл) использовали в качестве положительного контроля. Процент (B) CD11c + MHCII + DC в общем количестве живых клеток, статус созревания дополнительно определялся на основе их процентного содержания поверхностных маркеров (C) CD86, (D) CD40 и (E) MHC-I положительное выражение. (F) IL-10 и (G) IL-12, производство BMDC. Незрелые BMDC генерировали и обрабатывали 0,125, 0,25, 0,5 или 1% 2’FL в течение 24 часов, среду и стимуляцию LPS использовали в качестве отрицательного и положительного контроля, соответственно. Клетки собирали для анализа фенотипов BMDC методом проточной цитометрии; супернатант собирали для измерения IL-10 и IL-12p70 с помощью ELISA. (H) Репрезентативные графики пролиферированных CD4 + и CD8 + Т-клеток после рестимуляции ex vivo различными DC.Процент пролиферировавших (I) CD4 + и (J) CD8 + Т-клеток после рестимуляции ex vivo различными ДК. Незрелые BMDC обрабатывали либо средой, либо 1% 2’FL в течение 5 часов перед загрузкой 0,9 мкг / мл инфлювака в течение 24 часов, после чего различные BMDC совместно культивировали со свежими цельными клетками селезенки, меченными CFSE, из невакцинированных (фиктивных) или вакцинированных мышей в соотношении 1:10 в течение 5 дней, свежие суспензии селезенки получали из образцов селезенки вакцинированных мышей-доноров на 31 день.Совместно культивируемые клетки окрашивали антителами к CD4 (APC) и CD8 (PE) перед измерением FACS, пролиферацию клеток контролировали по уровням разведения CFSE. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего, было проведено шесть независимых экспериментов; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, **** p <0,0001. Непараметрический тест Краскела – Уоллиса использовался для панелей (B – G) Непараметрический тест Краскела – Уоллиса, затем апостериорный тест Данна для выбранных пар использовался для панелей (I, J) .iDC-influen = незрелые DC, нагруженные притоком; 2’FL-DC_influ = 1% DC, обработанный 2’FL, нагруженный инфлюваком; Sham_spl = клетки селезенки фиктивных мышей; Vacc_spl = клетки селезенки вакцинированных мышей.

Для определения антигенпредставляющей способности BMDC, модулированных 2’FL, был проведен анализ рестимуляции in vitro . BMDC обрабатывали 1% 2’FL, поскольку эта концентрация вызывала максимальные фенотипические изменения, как показано на фиг. 7C-E, после этого BMDC загружали с 0 или без него.9 мкг / мл инфлювака в течение 24 часов перед совместным культивированием со свежими цельными спленоцитами невакцинированных (фиктивных) или вакцинированных против гриппа мышей. Пролиферацию CD4 + и CD8 + Т-клеток измеряли с помощью проточной цитометрии (фигура 7H). BMDC, обработанные 1% 2’FL, индуцировали на 7,7% более высокую пролиферацию вакцин-специфичных CD4 + Т-клеток по сравнению с необработанными BMDC средой (фигура 7I, p <0,05). Кроме того, BMDC, обработанные 1% 2'FL, вызывали тенденцию к увеличению пролиферации CD8 + Т-клеток (фиг. 7J, p = 0.06). Эти результаты согласуются с данными in vivo , подтверждающими прямое действие 2’FL на фенотип и функцию антигенпредставляющих DC и, следовательно, улучшение иммунного развития, что приводит к усиленному ответу на вакцину.

Обсуждение

В рамках этого исследования мы демонстрируем, что диетический 2’FL дозозависимо улучшает как клеточные, так и гуморальные реакции на вакцину против гриппа в модели вакцинации мышей. Затем следует in vitro, подтверждение независимого от микробиоты прямого иммуномодулирующего свойства 2’FL на антигенпредставляющих DC.Было показано, что специфические структуры HMOS связаны со снижением риска пищевой аллергии (29, 30) и инфекционных эпизодов (31). Иммунологические последствия добавления этого единственного диетического компонента, обычно присутствующего в сложной матрице HMOS, были изучены в установленной иммунной системе. Насколько нам известно, это первая демонстрация конкретной ОПЗ, способной напрямую улучшать чувствительность к вакцине на мышиной модели вакцинации против гриппа.

Эффективность вакцинации новорожденных выражается в соотношении защиты и / или уровней антител, специфичных для вакцины (25).Ограничения в установлении правильных ответов антител IgG в раннем возрасте как с точки зрения количества, так и качества могут быть связаны с внутренним ограничением B-клеток в развитии (32). Поэтому индуцирование улучшенных В-клеточных ответов рассматривается как потенциальная стратегия повышения эффективности вакцины. Здесь мы определяем, что диетический 2’FL способен увеличивать как частоту B-клеток, так и активацию (рис. 2), что приводит к улучшенным гуморальным ответам, специфичным для вакцины, что наблюдается по повышенным уровням IgG1 и IgG2a у мышей (рис. 1D, E). .Однако, в отличие от настоящего исследования, предыдущие исследования, в которых пребиотик scGOS / lcFOS улучшали вакцино-специфические ответы ГЗГ против гриппа, ограничиваясь отсутствием эффектов на вакцино-специфические ответы антител IgG1 и IgG2a, не были обнаружены (17), что указывает на другой иммуномодулирующий механизм, с помощью которого диетический 2’FL теперь, кажется, улучшает эффективность вакцины у мышей. Эта модель вакцинации хорошо подходит для определения способности иммунной системы человека реагировать на данный антиген, что является очень хорошим способом изучения иммунной модуляции с помощью питания (33).Чтобы определить потенциальное использование и трансляционную способность наших результатов, необходимы дальнейшие исследования. В исследованиях на людях уменьшенное количество B-клеток памяти (CD27 + IgA +, CD27 + IgM + и CD27- IgG + B-клетки памяти) было обнаружено в образцах крови здоровых детей на грудном вскармливании без уведомления о секреторном статусе (34). С другой стороны, в грудном молоке присутствуют активированные B-клетки, которые предназначены для секретирования IgG (35), а также специфические антитела против вирусных или бактериальных антигенов (36).Как и в нашем исследовании, было обнаружено, что другие компоненты, присутствующие в грудном молоке, напрямую влияют на реакцию на вакцинацию. Например, диета, обогащенная (n-3) lcPUFA, способствует здоровому иммунному ответу с использованием тех же моделей in vivo (37), а также моделей с измененной активностью B-клеток (38). Биоактивные компоненты, такие как 2’FL, присутствующие в сложной смеси HMOS, могут стимулировать развитие B-клеток и последующее производство антител, что, как известно, оказывает положительное влияние на иммунитет, индуцированное грудным молоком.Поэтому мы предполагаем, что необходимы дополнительные исследования, чтобы увидеть, каков вклад одного 2’FL в сочетании с другими пребиотическими олигосахаридами и пищевыми компонентами. Кроме того, необходимы будущие клинические исследования для дальнейшего подтверждения эффекта диетического 2’FL на развивающуюся иммунную систему младенцев, населения с ослабленным иммунитетом и / или пожилых людей.

Дендритные клетки — это профессиональные антигенпрезентирующие клетки, которые инициируют и запускают адаптивный иммунный ответ и, таким образом, критически важны для индукции вакциноспецифических клеточных иммунных ответов (14).Статус созревания ДК, который характеризуется увеличением экспрессии на клеточной поверхности молекул MHC-I и MHC-II и костимулирующих молекул, включая CD40, CD86, повышенной антиген-презентирующей способности и индукции продукции специфических цитокинов (39), имеет большое значение. чтобы привести к оптимизированной способности инициировать Т-клеточный иммунитет. В текущем исследовании диетический 2’FL индуцировал более высокий процент зрелых CD11 + MHC-II + DC в селезенке вакцинированных мышей (Фигуры 3B – D). Однако, поскольку метаболиты бактериальной деградации HMOS, такие как SCFAs, могут напрямую взаимодействовать как с человеческими, так и с мышиными DCs (40), было неясно, были ли эффекты созревания диетического 2’FL на DC напрямую опосредованы или получены через микробиоту. зависимый механизм.Наши данные in vitro показывают зависимое от концентрации 2’FL увеличение экспрессии CD40 и CD86 на CD11c + MHCII + DC (Фигуры 7C – E) и антигенпрезентирующую функцию с повышенной способностью к пролиферации антигенспецифических CD4 + и CD8 + Т-клетки (Фигуры 7I, J). Эти данные вместе подтверждают, что 2’FL напрямую взаимодействует с антигенпрезентирующими DCs. Это мнение подтверждается свидетельствами того, что 2’FL связывается с DC-SIGN, который экспрессируется на DC (15). Однако, взаимодействует ли 2’FL с DC-SIGN, а также отвечает ли DC-SIGN-опосредованная передача сигналов за наблюдаемую иммунную регуляцию, требует дальнейшего изучения.

Функциональные изменения DC были впоследствии отражены индукцией более высокого процента экспрессирующих Tbet CD4 + Т-клеток в селезенке мышей, получавших 2’FL с пищей (фиг. 4D). Это согласуется с предыдущими исследованиями, в которых добавление к пище пребиотических олигосахаридов усиливало системные цитокины с перекосом по Th2 в модели мыши с вакцинацией мышей (19). В той же модели вакцинации добавление scGOS / lcFOS увеличивает системные ответы Th2, о чем свидетельствует увеличение процента Tbet + активированных CD69 + CD4 + Т-клеток (18).Наши результаты вместе с этими исследованиями подчеркивают критическую роль иммуномодулирующего и, более конкретно, Th2-искаженного эффекта диетических олигосахаридов в улучшении чувствительности к вакцинам. Кроме того, ex vivo рестимуляция спленоцитов от вакцинированных мышей, получавших 2’FL, нагруженными гриппом BMDC приводит к более высокой пролиферации вакцин-специфичных CD4 + и CD8 + Т-клеток по сравнению с контрольными вакцинированными мышами (рисунки 5C, D), сопровождаемые за счет более высокой продукции IFN-γ (рис. 5E).Эти результаты показывают, что диета 2’FL снабжает вакцинированных мышей способностью эффективно и устойчиво увеличивать вакцино-специфические CD4 + и / или CD8 + Т-клетки, продуцирующие IFN-γ, при встрече с соответствующими антигенами. Таким образом, наряду с врожденным иммунитетом, диетический 2’FL также усиливает адаптивный иммунитет в этой модели вакцинации мышей, указывая на потенциал 2’FL в приобретении иммунной компетентности в раннем возрасте младенцев.

Факторы питания являются регуляторами экспрессии генов у млекопитающих, поэтому разумно предположить, что одним из возможных объяснений улучшающих реакцию на вакцинацию эффектов диетического 2’FL является модуляция экспрессии генов.Здесь мы сообщили, что диетический 2’FL увеличивал экспрессию кишечного гена FUT2, в то время как подавлял экспрессию гена FUT8 (рис. 6А), оба из которых кодируют ферменты фукозилтрансферазы, что указывает на влияние диетического 2’FL на метаболизм вакцинированных мышей. . Адаптированный метаболизм может впоследствии привести к инициированию внутриклеточного сигнального пути, который скоординированно регулирует этот набор генов. Наше наблюдение, что гены, связанные с выработкой противовоспалительных цитокинов, а также гены, связанные с костимулирующей передачей сигналов, были изменены, по-видимому, отражает метаболические изменения.В кишечнике человека экспрессия гена FUT2 была тесно связана с разнообразием и составом популяции бифидобактерий (41), что было связано с улучшением вакцин-специфичных ответов DTH при добавлении scGOS / lcFOS (19). Однако прямая связь между изменением экспрессии этих генов и улучшенной эффективностью вакцинации требует дальнейшего изучения.

Грудное молоко — это хорошо зарекомендовавший себя фактор усиления защиты от инфекций у младенцев (42–44), а 2’FL является основным компонентом сложной смеси HMOS, присутствующей в материнском молоке.В текущем исследовании мы продемонстрировали улучшение вакциноспецифических ответов DTH и антител с помощью диетического 2’FL. Стимулирующие эффекты были связаны с активацией B-клеток памяти, индукцией оптимальных Th2-ответов через созревающих DC в селезенке и облегчением роста вакцин-специфичных CD4 + и CD8 + T-клеток селезенки при рестимуляции ex vivo . Эти данные вместе с данными in vitro указывают на наличие независимого от микробиоты прямого иммуномодулирующего потенциала 2’FL и, таким образом, подтверждают информацию о полезных для здоровья свойствах, полученных из сложной смеси олигосахаридов в материнском молоке.

Заявление об этике

Экспериментальные процедуры были одобрены Этическим комитетом исследований на животных Утрехтского университета и Центральной комиссией по использованию животных (номера разрешений: DEC2015.II.243.038 и AVD108002016460) и соответствовали принципам надлежащего ухода за лабораторными животными в соответствии с Европейской директивой для защита животных, используемых в научных целях.

Взносы авторов

LX, BL и GF разработали эксперименты; LX, TLM, IA, NAH, NK, BB и SO выполнили экспериментальные процедуры; LX выполнил сбор данных, анализ и подготовил рукопись; JG, GF и BL контролировали программу; BS внесла особый вклад в программу в отношении олигосахаридов грудного молока.Все перечисленные авторы внесли значительный вклад в написание рукописи и одобрили ее к публикации.

Заявление о конфликте интересов

Ни один из авторов не имеет конкурирующих финансовых интересов в отношении представленной работы; Дж. Дж. Является главой отдела фармакологии Утрехтского института фармацевтических наук, факультета естественных наук Утрехтского университета, и частично работает в Nutricia Research. И BS, и BL работают в Nutricia Research. BL, как указано в членстве, возглавляет стратегический альянс между Университетским медицинским центром Утрехта / детской больницей Вильгельмина и Nutricia Research.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить D. Veening и T. Wehkamp за их техническую помощь, а также A. Kostadinova и M. M. Vonk за полезные обсуждения.

Финансирование

Грант на исследование был получен от Китайского совета по стипендиям для LX, награда No. 201406050044.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00452 / полный # дополнительный-материал.

Рисунок S1 . Проточно-цитометрический анализ популяций Т-хелперов (Th) 1 и регуляторных Т-клеток (Tregs) в мезентериальном лимфатическом узле (MLN). (A) Процент CD4 + Т-клеток от общего количества живых лимфоцитов. Процент (B), ранних (CD4 + CD69 + клетки) и (E) поздно активированных (CD4 + CD25 + клетки) CD4 + Т-клеток в MLN. Процент (C) Th2 клеток (Tbet + CD4 + CD69 + клеток) и (F) Tregs (Foxp3 + CD4 + CD25 + клеток) в MLN.Активация Th2 (D) и Treg (G) была представлена ​​MFI экспрессии CD69. (H) Процент Foxp3 + Tbet + Treg (Tbet + CD4 + CD25 + Foxp3 + клеток). Вкратце, не изучались различия между группами диетического вмешательства по процентному содержанию CD4 + и CD4 + CD69 + Т-клеток (B) в MLN. Значительно более низкий процент Th2-клеток (Tbet + CD69 + CD4 + T-клетки) наблюдался в группах с добавлением 0,5 и 1% 2′-фукозиллактозы (2’FL) по сравнению с контрольной группой, хотя статус активации, как показывает MFI экспрессии CD69 + клеток не различались между группами.В соответствии с наблюдаемой повышенной частотой CD103 + DC в MLN, как 0,5%, так и 1% 2’FL-группы показали повышенный процент CD4 + CD25 + T-клеток и Foxp3 + Treg по сравнению с контрольной группой. Статус активации, показанный MFI CD69 + экспрессии Tregs, и процент Foxp3 + Tbet + Tregs, оставался незатронутым диетическими 2’FL в MLN. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего n = 7–9 / группа; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0.001 и **** p <0,0001 односторонний дисперсионный анализ с последующим апостериорным тестом Бонферрони для выбранных групп.

Рисунок S2 . Средняя интенсивность флуоресценции (MFI) поверхностных маркеров (A) CD86, (B) CD40 и (C) экспрессии MHC-I на дендритных клетках костного мозга (BMDC), обработанных средой, LPS (0,125 –1%) 2′-фукозиллактоза (2’FL). Оси и столбчатых диаграмм показывают относительную экспрессию поверхностных маркеров, полученную при установке контроля среды как однократной в пределах одного эксперимента и для каждого донора.Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего, было проведено четыре независимых эксперимента; * p <0,05, ** p <0,01 и *** p <0,001. Использовался непараметрический тест Краскела – Уоллиса.

Сокращения

2’FL, 2′-фукозиллактоза; BMDC, дендритные клетки костного мозга; ДК, дендритные клетки; DC-SIGN, DC-специфичная молекула межклеточной адгезии-3-захватывающая неинтегрин; DTH, гиперчувствительность замедленного типа; lcFOS, длинноцепочечные фруктоолигосахариды; Foxp3, белок вилочного бокса 3; FUT2, фукозилтрансфераза 2; FUT8, фукозилтрансфераза 8; HMOS, олигосахариды грудного молока; я.д., внутрикожный; IFNγ, интерферон-γ; Ig, иммуноглобулин; MFI — средняя интенсивность флуоресценции; MLN, мезентериальный лимфатический узел; SCFAs, жирные кислоты с короткой цепью; scGOS, короткоцепочечные галактоолигосахариды; п / к, подкожно; Th, Т-помощник; Treg, регуляторные Т-клетки.

Список литературы

2. Баша С., Сурендран Н., Пичичеро М. Иммунные ответы у новорожденных. Expert Rev Clin Immunol (2014) 10 (9): 1171–84. DOI: 10.1586 / 1744666X.2014.942288

CrossRef Полный текст | Google Scholar

4.Oh JZ, Ravindran R, Chassaing B, Carvalho FA, Maddur MS, Bower M и др. TLR5-опосредованное зондирование кишечной микробиоты необходимо для антител к вакцинации против сезонного гриппа. Иммунитет (2014) 41 (3): 478–92. DOI: 10.1016 / j.immuni.2014.08.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Пендерс Дж., Тийс С., Винк С., Стелма Ф.Ф., Снейдерс Б., Куммелинг И. и др. Факторы, влияющие на состав кишечной микробиоты в раннем детстве. Педиатрия (2006) 118 (2): 511–21. DOI: 10.1542 / педс.2005-2824

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Сяо Л., Ван’т Ланд Б., Ван де Ворп WRPH, Шталь Б., Фолкертс Г., Гарссен Дж. Факторы питания в раннем возрасте и иммунитет слизистой оболочки в развитии аутоиммунного диабета. Front Immunol (2017) 8: 1219. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.01219

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Thurl S, Munzert M, Boehm G, Matthews C., Stahl B.Систематический обзор концентраций олигосахаридов в материнском молоке. Nutr Ред. (2017) 75 (11): 920–33. DOI: 10,1093 / Nutrit / nux0448

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Кастанис-Муньос Э., Мартин М.Дж., Прието, Пенсильвания. 2’-фукозиллактоза: богатый генетически детерминированный растворимый гликан, присутствующий в материнском молоке. Nutr Ред. (2013) 71 (12): 773–89. DOI: 10.1111 / Nure.12079

CrossRef Полный текст | Google Scholar

9.Смиловиц Дж. Т., Лебрилла CB, Миллс Д. А., Герман Дж. Б., Freeman SL. Олигосахариды грудного молока: взаимосвязь структура-функция у новорожденного. Annu Rev Nutr (2014) 34: 143–69. DOI: 10.1146 / annurev-nutr-071813-105721

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Живкович AM, Герман JB, Lebrilla CB, Mills DA. Гликобиом грудного молока и его влияние на микробиоту желудочно-кишечного тракта младенцев. Proc Natl Acad Sci U S. A (2011) 15 (108): 4653–8. DOI: 10.1073 / пнас.1000083107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Васкес Э., Сантос-Фандила А., Бак Р., Руэда Р., Рамирес М. Основные олигосахариды грудного молока всасываются в системный кровоток после перорального введения крысам. Br J Nutr (2017) 117 (2): 237–47. DOI: 10.1017 / S0007114516004554

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Юнг С., Унутмаз Д., Вонг П., Сано Дж., Де лос Сантос К., Спарвассер Т. и др.Истощение дендритных клеток CD11c + in vivo отменяет примирование CD8 + Т-клеток экзогенными клеточно-ассоциированными антигенами. Иммунитет (2002) 17 (2): 211–20. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (02) 00365-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Макри К., Дюмон С., Джонстон А. П., Минтерн Дж. Д. Нацеливание на дендритные клетки: многообещающая стратегия повышения эффективности вакцины. Clin Transl Immunology (2016) 5 (3): e66. DOI: 10.1038 / cti.2016.6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15.Noll AJ, Yu Y, Lasanajak Y, Duska-McEwen G, Buck RH, Smith DF и др. DC-SIGN человека связывает определенные гликаны грудного молока. Biochem J (2016) 473 (10): 1343–53. DOI: 10.1042 / BCJ20160046

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Lehmann S, Hiller J, van Bergenhenegouwen J, Knippels LMJ, Garssen J, Traidl-Hoffmann C. Доказательства иммуномодулирующих свойств неперевариваемых олигосахаридов in vitro: прямое влияние на дендритные клетки, полученные из моноцитов человека. PLoS One (2015) 10 (7): e0132304. DOI: 10.1371 / journal.pone.0132304

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Вос А.П., Хаарман М., Буко А., Говерс М., Кнол Дж., Гарссен Дж. И др. Смесь определенных пребиотических олигосахаридов стимулирует гиперчувствительность замедленного типа в модели вакцинации против гриппа мышей. Int Immunopharmacol (2006) 6 (8): 1277–86. DOI: 10.1016 / j.intimp.2006.03.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18.van’t Land B, Schijf M, van Esch BC, van Bergenhenegouwen J, Bastiaans J, Schouten B, et al. Регуляторные Т-клетки играют важную роль в иммуномодулированном ответе на вакцину с помощью специфических олигосахаридов. Vaccine (2010) 28 (35): 5711–7. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2010.06.046

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Вос А.П., Кнол Дж., Шталь Б., М’рабет Л., Гарссен Дж. Специфические пребиотические олигосахариды модулируют раннюю фазу реакции на вакцинацию мышей. Int Immunopharmacol (2010) 10 (5): 619-25. DOI: 10.1016 / j.intimp.2010.02.014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Schijf MA, Kerperien J, Bastiaans J, Szklany K, Meerding J, Hofman G, et al. Изменения в регуляторных Т-клетках, индуцированные специфическими олигосахаридами, улучшают чувствительность к вакцине у мышей. PLoS One (2013) 8 (9): e75148. DOI: 10.1371 / journal.pone.0075148

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21.Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-дельта дельта C (T)). Методы (2001) 25 (4): 402–8. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Агемацу К., Хокибара С., Нагумо Х., Комияма А. CD27: маркер В-клеток памяти. Immunol Today (2000) 21 (5): 204–6. DOI: 10.1016 / S0167-5699 (00) 01605-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

23.Coombes JL, Siddiqui KR, Arancibia-Cárcamo CV, Hall J, Sun CM, Belkaid Y, et al. Функционально специализированная популяция CD103 + DC слизистой оболочки индуцирует Foxp3 + регуляторные Т-клетки посредством TGF-бета и механизма, зависимого от ретиноевой кислоты. J Exp Med (2007) 204 (8): 1757–64. DOI: 10.1084 / jem.20070590

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Моленаар Р., Гройтер М., ван дер Марель А.П., Розендаал Р., Мартин С.Ф., Эделе Ф. и др. Стромальные клетки лимфатических узлов поддерживают индуцированное дендритными клетками «хоминг» Т-клеток в кишечнике. J Immunol (2009) 183 (10): 6395-402. DOI: 10.4049 / jimmunol.0

1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Тейлор С.Л., Макгукин М.А., Весселинг С., Роджерс Г.Б. Сладкоежки инфекции: как гликаны опосредуют инфекцию и восприимчивость к болезням. Trends Microbiol (2018) 26 (2): 92–101. DOI: 10.1016 / j.tim.2017.09.011

CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. He Y, Liu S, Kling DE, Leone S, Lawlor NT, Huang Y, et al.2’-фукозиллактоза олигосахарида грудного молока модулирует экспрессию CD14 в энтероцитах человека, тем самым ослабляя LPS-индуцированное воспаление. Кишечник (2016) 65 (1): 33–46. DOI: 10.1136 / gutjnl-2014-307544

CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Франсиско Л. М., Салинас В. Х., Браун К. Э., Вангури В. К., Фриман Г. Дж., Кучро В. К. и др. PD-L1 регулирует развитие, поддержание и функцию индуцированных регуляторных Т-клеток. J Exp Med (2009) 206 (13): 3015–29. DOI: 10.1084 / jem.200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

29. Sprenger N, Odenwald H, Kukkonen AK, Kuitunen M, Savilahti E, Kunz C. FUT2-зависимые олигосахариды грудного молока и аллергия в возрасте 2 и 5 лет у младенцев с высоким риском наследственной аллергии. Eur J Nutr (2017) 56 (3): 1293–301. DOI: 10.1007 / s00394-016-1180-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Сеппо А.Е., Autran CA, Bode L, Järvinen KM. Олигосахариды грудного молока и развитие аллергии на коровье молоко у младенцев. J Allergy Clin Immunol (2017) 139 (2): 708.e – 11.e. DOI: 10.1016 / j.jaci.2016.08.031

CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Хестер С. Н., Чен Х, Ли М., Монако М. Х., Комсток С. С., Кухленшмидт Т. Б. и др. Олигосахариды грудного молока подавляют инфекционность ротавируса in vitro и у остро инфицированных поросят. Br J Nutr (2013) 110 (7): 1233–42. DOI: 10.1017 / S0007114513000391

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32.Райт П.Ф., Каррон Р.А., Белше Р.Б., Томпсон Дж., Кроу Дж. Э. младший, Бойс Т.Г. и др. Оценка живого, холодного пассирования, чувствительного к температуре респираторно-синцитиального вируса-кандидата в младенчестве. J Infect Dis (2000) 182 (5): 1331–42. DOI: 10.1086 / 315859

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Альберс Р., Бурде-Сикар Р., Браун Д., Колдер П.С., Херц Ю., Ламберт С. и др. Мониторинг иммунной модуляции путем питания среди населения в целом: выявление и обоснование воздействия на здоровье человека. Br J Nutr (2013) 110 (2): 1–30. DOI: 10.1017 / S0007114513001505

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Янсен М.А., ван ден Хеувел Д., ван Зельм М.С., Джаддо В.В., Хофман А., де Йонгсте Дж. К. и др. Снижение В-клеток памяти и увеличение количества Т-клеток памяти CD8 в крови детей на грудном вскармливании: исследование поколения R. PLoS One (2015) 10 (5): e0126019. DOI: 10.1371 / journal.pone.0126019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35.Туайон Э., Валя Д., Бекварт П., Аль-Таба И., Меда Н., Боллор К. и др. B-клетки, полученные из грудного молока: высокоактивированная популяция переключаемых клеток памяти, примированных к секреции антител. J Immunol (2009) 182 (11): 7155–62. DOI: 10.4049 / jimmunol.0803107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Ван де Перре П. Передача антител с материнским молоком. Vaccine (2003) 21 (24): 3374–6. DOI: 10.1016 / S0264-410X (03) 00336-0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

37.Hogenkamp A, van Vlies N, Fear AL, van Esch BC, Hofman GA, Garssen J, et al. Пищевые жирные кислоты влияют на иммунную систему мышей-самцов, сенсибилизированных к овальбумину или вакцинированных против гриппа. J Nutr (2011) 141 (4): 698–702. DOI: 10.3945 / jn.110.135863

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Kosaraju R, Guesdon W, Crouch MJ, Teague HL, Sullivan EM, Karlsson EA, et al. Активность В-клеток нарушается при ожирении у людей и мышей, и они реагируют на незаменимую жирную кислоту при заражении мышиным гриппом. J Immunol (2017) 198 (12): 4738–52. DOI: 10.4049 / jimmunol.1601031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Kaisar MMM, Pelgrom LR, van der Ham AJ, Yazdanbakhsh M, Everts B. Бутират кондиционирует дендритные клетки человека для примирования регуляторных Т-клеток типа 1 посредством как ингибирования гистондеацетилазы, так и передачи сигналов рецептора 109A, связанного с g-белком. Front Immunol (2017) 8: 1429. DOI: 10.3389 / fimmu.2017.01429

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41.Wacklin P, Mäkivuokko H, Alakulppi N, Nikkilä J, Tenkanen H, Räbinä J, et al. Генотип секретора (ген FUT2) прочно связан с составом бифидобактерий в кишечнике человека. PLoS One (2011) 6 (5): e20113. DOI: 10.1371 / journal.pone.0020113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Аджетунмоби О.М., Уайт Б., Чалмерс Дж., Таппин Д.М., Вольфсон Л., Флеминг М. и др. Грудное вскармливание связано с сокращением госпитализации детей: данные шотландской когорты новорожденных (1997–2009). J Pediatr (2015) 166 (3): 620.e – 5.e. DOI: 10.1016 / j.jpeds.2014.11.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Duijts L, Jaddoe VWV, Hofman A, Moll HA. Продолжительное и исключительно грудное вскармливание снижает риск инфекционных заболеваний в младенчестве. Педиатрия (2010) 126 (1): e18–25. DOI: 10.1542 / педс.2008-3256

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

44. Морроу А.Л., Руис-Паласиос Г.М., Цзян X, Ньюбург Д.С.Гликаны грудного молока, которые ингибируют связывание патогенов, защищают грудных детей от инфекционной диареи. J Nutr (2005) 135 (5): 1304–7. DOI: 10.1093 / jn / 135.5.1304

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

питательных веществ | Бесплатный полнотекстовый | Олигосахарид 3′-GL человеческого молока улучшает иммунную реакцию и иммунитет к вакцинации против гриппа после воздействия дезоксиниваленола в доклинических моделях

1. Введение

Микотоксин дезоксиниваленол (ДОН) является широко распространенным загрязнителем пищевых продуктов, который, как известно, вызывает иммунотоксичность у людей и животных.ДОН производится как вторичный метаболит из грибов Fusarium, которые загрязняют продукты питания человека на глобальном уровне, особенно зерновые и зерновые продукты [1,2]. Острое и хроническое воздействие ДОН оказывает значительное негативное влияние на кишечную, неврологическую и репродуктивную системы [3]. Иммунная система чрезвычайно чувствительна к ДОН, так как прием внутрь очень низких уровней может изменить иммунные реакции [4,5]. В зависимости от концентрации и продолжительности воздействия при воздействии ДОН могут индуцироваться как иммунодепрессивные, так и иммуностимулирующие эффекты [6].Более высокие дозы ДОН вызывают иммуносупрессивные эффекты, которые можно объяснить апоптозом лейкоцитов, тогда как иммуностимулирующие эффекты наблюдаются после воздействия более низких доз [7,8,9]. Введение ДОН мышам снижает популяцию антигенпрезентирующих клеток и уровни экспрессии различных Toll-подобных рецепторов (TLR) в лимфоидных органах, которые имеют решающее значение для иммунного надзора [10]. Учитывая важную роль кишечного эпителия в формировании селективного барьера между внутрипросветными диетическими антигенами и микробами и внутренней средой, повышенная проницаемость кишечника связана с различными воспалительными заболеваниями и нарушением иммунного гомеостаза [11].Уже известно, что ДОН может повреждать кишечный барьер и вызывать воспалительную реакцию in vitro и in vivo и увеличивать проницаемость кишечника [12], тогда как добавление специфических неперевариваемых олигосахаридов (NDO), таких как короткоцепочечные галактоолигосахариды (scGOS) может защищать целостность барьера, в основном, облегчая сборку плотных соединений и уменьшая воспалительную реакцию после воздействия DON [13]. Специфические NDO могут обеспечивать пребиотические и иммуномодулирующие свойства, аналогичные тем, которые наблюдаются для олигосахаридов грудного молока (HMOs).В грудном молоке было идентифицировано более двухсот структурно различных форм ОПЗ [14]; их концентрация зависит от нескольких факторов, включая стадию лактации и генетический фон матери [15]. Структурная сложность и разнообразие ОПЗ уникальны для грудного молока. Они представляют собой первые пребиотики, которые получают младенцы и поддерживают развитие как микробиома, так и иммунной системы. Хотя NDO, как и HMO, только частично перевариваются бактериями в кишечнике [16,17], некоторые специфические структуры, такие как 2′-фукозиллактоза (2’FL) и галактоолигосахариды (GOS), обнаруживаются в кишечнике. системный кровоток после перорального приема [18,19].ОПЗ имеют решающее значение для развития здоровой иммунной системы у младенцев [20]. Были предложены различные механизмы для объяснения иммуномодулирующих свойств NDO и HMO. Известно, что они являются эффективными пребиотическими ингредиентами и могут вызывать иммуномодулирующие эффекты косвенно через микробиотозависимые механизмы, восстанавливая баланс кишечной микробиоты и способствуя развитию здорового кишечного сообщества у младенцев [21,22,23]. Более того, ОПЗ могут вызывать независимые от микробиоты иммуномодулирующие эффекты посредством прямого взаимодействия с иммунокомпетентными клетками [24,25].Некоторые функциональные структуры HMO, экспрессируемые на повышенных уровнях в молозиве человека, основаны на удлинении лактозы, образуя различные галактозиллактозы (GL), такие как 3′-GL, 4′-GL и 6′-GL [26,27, 28]. Существует несколько смесей NDO, таких как GOS с короткой цепью (scGOS) или трансгалактоолигосахариды (TOS), которые в основном производятся путем свободного ферментативного транс-гликозилирования или путем бактериальной ферментации [29] и содержат GL, которые идентичны изолированные от ОПЗ [30]. Состав этих NDO, образующихся в результате транс-гликозилирования, сильно зависит от источника фермента и выбранной технологии.Некоторые специфические GL, такие как 3′-, 4′- и 6′-GL, могут обладать противовоспалительными свойствами в отношении эпителиальных клеток кишечника человека in vitro за счет ингибирования сигнального пути NF-κB [27]. Более того, эти GL обладают способностью ослаблять воспалительные реакции слизистой оболочки на ранней стадии развития интактной незрелой слизистой оболочки кишечника человека, одновременно поддерживая созревание иммунной системы слизистой оболочки кишечника путем модуляции баланса Th2 / Th3 [30]. Полезные свойства NDO, улучшающие Th2-зависимые вакцино-специфические иммунные ответы, были подтверждены в различных исследованиях in vivo [24,31,32].Чтобы проверить возможные аналогичные положительные эффекты 3′-GL на иммунную систему, в настоящем исследовании использовался TOS, который представляет собой еще одну смесь NDO с высоким содержанием 3′-GL (дополнительный рисунок S1). Наша группа ранее сообщала, что ДОН способствует аллергической сенсибилизации к сывороточным белкам у мышей, нарушая целостность кишечного эпителия и индуцируя клеточный стресс, что приводит к усиленному инициированию Th3-ответов и аллергической сенсибилизации [33]. Однако информации о влиянии ДОН на Th2-опосредованные иммунные ответы мало.Поскольку наши более ранние наблюдения предполагают, что DON способствует Th3-доминирующим иммунным ответам, которые, как известно, ингибируют Th2-опосредованный иммунитет, мы предположили, что потребление DON может влиять на реактивность вакцины на мышиной модели. Модель вакцинации — это хорошо зарекомендовавший себя и проверенный метод определения влияния диетических вмешательств на клеточные и гуморальные иммунные ответы с акцентом на Th2-опосредованные ответы [34,35]. Кроме того, возможные иммуномодулирующие эффекты пищевых добавок с TOS, содержащих высокие уровни 3′-GL (22% вес / вес), были протестированы путем оценки реакции на вакцину у мышей, подвергшихся воздействию DON.Более того, чтобы понять возможные задействованные механизмы и учитывая незаменимую роль микробиома кишечника в развитии здоровой иммунной системы [36], изменения, индуцированные в слое эпителиальных клеток кишечника и микробной активности, были исследованы как in vivo, так и in vitro. Это исследование дает ключевые идеи относительно потенциала диетического вмешательства с TOS, ослабления неблагоприятных эффектов DON на иммунитет, улучшения Th2-опосредованных иммунных ответов и восстановления гомеостаза кишечника.

5. Обсуждение

Воздействие многих загрязнителей пищевых продуктов, таких как микотоксины, связано с широким спектром воздействия на иммунную систему [46]. Учитывая их высокую распространенность и стабильность на всех этапах обработки пищевых продуктов, понимание иммунотоксичности этих пищевых загрязнителей имеет решающее значение для разработки эффективных профилактических стратегий. Здесь мы исследовали неблагоприятные эффекты широко распространенного микотоксина ДОН на клеточный и гуморальный иммунный ответ на вакцинацию против вируса гриппа у мышей и показали, что диетический TOS, специфическая смесь NDO, содержащая высокие уровни структур GL, аналогичных выделенным из грудное молоко, оказывает иммуностимулирующее действие и защищает от вызванных ДОН кишечных и иммунных нарушений, как in vitro, так и in vivo.Пищевые добавки с 0,5% TOS усиливали Th2-зависимый клеточный и гуморальный иммунитет, что измерялось по усилению ответа DTH и продукции IgG2a после вакцинации. Эти данные соответствуют более высокому проценту активированных клеток CD69 + Th2 в селезенке и увеличению продукции IFN-γ повторно стимулированными спленоцитами вакцинированных мышей. Предыдущие исследования с использованием диетического вмешательства со смесями scGOS / lcFOS NDO [24,31,32], а также с олигосахаридом 2′-фукозиллактозы грудного молока (2’FL) [38] и их комбинацией [47], показали аналогичные эффекты на Th2-зависимые ответы на вакцину против гриппа и повышенную пролиферацию вакцин-специфичных CD4 + и CD8 + Т-клеток и более высокую продукцию IFN-γ после повторной стимуляции ex vivo спленоцитов у вакцинированных мышей [38 ].Ранее в рамках этой модели наблюдались различные оптимальные уровни конкретных NDO. Xiao et al. показали, что добавление к пище 2′-FL до 1% увеличивало гриппоспецифический ответ DTH у вакцинированных мышей дозозависимо, тогда как более высокие концентрации 2′-FL (> 1%) не давали такой же картины [38]. Кроме того, Vos et al. показали, что диетическое вмешательство с scGOS / lcFOS в концентрации 5% увеличивало ответ DTH, тогда как более высокие концентрации не вызывали такой же эффект в аналогичной модели [32].Это ясно указывает на то, что эти олигосахариды могут быть наиболее эффективными на определенном оптимальном уровне структуры в данной модели. Усиление системных Th2-зависимых адаптивных иммунных ответов теоретически может привести к лучшим иммунным ответам против инфекций и может быть полезным для ослабления чрезмерных Th3-ответов, которые возникают при аллергии. Такие эффекты наблюдались для диетических scGOS / lcFOS и 2’FL, поскольку они могут уменьшать симптомы аллергической астмы и пищевой аллергии на моделях мышей за счет индукции Т-регуляторных клеток IL-10 + и модуляции баланса Th2 / Th3. и подавление параметров, связанных с Th3 [48,49].Добавление ДОН к рациону вакцинированных мышей оказало специфически пагубный эффект на опосредованный В-клетками гуморальный иммунитет, на что указывает снижение продукции вакцино-специфических иммуноглобулинов. Хотя добавка TOS в концентрации 0,5% может эффективно улучшить вакцино-специфические уровни DTH и IgG, требовалась более высокая концентрация TOS, чтобы вызвать аналогичные эффекты, когда животных кормили рационами, загрязненными DON. Воздействие DON также уменьшало Tbet + Th2-клеток в селезенке и индуцировало значительное снижение секреции IFN-γ спленоцитами после повторной стимуляции ex vivo.Эти результаты согласуются с предыдущими наблюдениями, когда сообщалось о снижении устойчивости к кишечным и легочным реовирусным инфекциям после воздействия ДОН на мышах [50,51]. Воздействие DON временно уменьшало ответ хозяина на реовирус за счет подавления IFN-γ и увеличения экспрессии мРНК IL-4 в пластырях Пайера и, следовательно, подавления IFN-опосредованных ответов типа 1 [50,51]. Результаты нашего исследования показали, что добавление 1% TOS в рационы, загрязненные DON, увеличивало частоту Tbet + Th2-клеток и секрецию IFN-γ повторно стимулированными спленоцитами, и, следовательно, предотвращало вызванное DON снижение иммунные ответы типа 1 у вакцинированных животных.Более того, употребление кормов, загрязненных ДОН, привело к значительному снижению частоты В-клеток в селезенке вакцинированных мышей, что соответствует снижению продукции вакцин-специфичных IgG у этих животных. Интересно, что у мышей, подвергшихся воздействию DON, было больше В-клеток памяти CD27 + в селезенке, что могло быть компенсаторным ответом на снижение способности этих клеток продуцировать антитела. Добавление 1% TOS к рациону мышей, подвергшихся воздействию DON, восстановило процент В-клеток до значений контрольной группы.Можно сделать вывод, что добавка TOS может восстановить баланс Th2 / Th3, а также активность В-клеток в селезенке и улучшить реакцию на вакцинацию у мышей, подвергшихся воздействию DON. Регуляторные Т-клетки CD25 + и IL-10 + играют важную роль в иммуномодулирующих свойствах некоторых смесей NDO, содержащих scGOS / lcFOS, и некоторых HMO, таких как 2′-FL и 6′-сиалиллактоза (6′- SL) усиливают Th2 и уменьшают Th3 ответы [24,49,52]. Хотя присутствие только TOS в рационе мышей не оказывало значительного влияния на регуляторные Т-клетки, добавление TOS к рациону, загрязненному DON, значительно увеличивало количество CD25 + FoxP3 + Treg-клеток в селезенках вакцинированных мышей.Более того, диетический TOS увеличивал высвобождение регуляторного цитокина IL-10 из спленоцитов мышей, подвергшихся воздействию DON. Наблюдаемые эффекты TOS на регуляторные Т-клетки и IL-10 могут быть реакцией на Th3-искажающие эффекты DON и могут представлять механизм восстановления баланса Th2 / Th3 после воздействия DON. Другое возможное объяснение иммуномодулирующих свойств пребиотических олигосахаридов может заключаться в том, что они влияют на механизмы, зависимые от микробиоты, путем восстановления баланса состава микробиоты в кишечнике [25].Существует потенциальная связь между изменениями метаболитов кишечных микробов и улучшенными вакцино-специфическими иммунными ответами при добавлении HMOS [47,53]. Клинический анализ концентраций SCFA в образцах фекалий младенцев в возрасте 3–5 месяцев показал, что у младенцев, вскармливаемых исключительно грудью, относительная доля ацетата была выше по сравнению с младенцами, не находящимися на грудном вскармливании [54]. Профили SCFA, образующиеся при ферментации HMO кишечными бактериями, обладают хорошо известными противовоспалительными свойствами и регулируют клетки врожденного иммунитета, такие как макрофаги, нейтрофилы и DC, а также антиген-специфический адаптивный иммунитет, опосредованный T-клетками и B-клетками [55 ].SCFAs оказывают значительное влияние на регуляторные Т-клетки и эффекторные Т-клетки, повышая экспрессию генов во время активации лимфоцитов, и могут усиливать слизистые и системные ответы антител [55]. Диеты, загрязненные DON, значительно снижали концентрацию SCFA в слепой кишке мышей, и этот эффект был восстановлен за счет добавления TOS в рацион. Влияние TOS на SCFA было более выраженным с точки зрения концентрации уксусной кислоты, что указывает на то, что TOS усиливает специфические микробные сообщества в кишечнике.Ацетат в больших количествах продуцируется некоторыми бактериями, такими как различные виды Bifidobacterium и Bacteroides, и может усиливать выработку слизи и дифференцировку бокаловидных клеток, тем самым поддерживая эпителиальный барьер кишечника и иммунную функцию [56]. Более того, штаммы бифидобактерий в кишечнике человека способны эффективно использовать 3′-GL [57]. Пребиотические свойства TOS, возможно, играют важную роль в модуляции иммунных ответов. Известно, что DON нарушает функцию и целостность эпителиального барьера, в основном за счет нарушения экспрессии и локализации соединительных белков [12,58], и он может уменьшать высоту ворсинок в кишечник [12].В настоящем исследовании кормление мышей рационами, загрязненными ДОН, подавляло экспрессию мРНК белка плотных контактов ZO-1 в подвздошной кишке и уменьшало высоту ворсинок, что согласуется с наблюдениями в предыдущих исследованиях. Укороченная высота ворсинок может быть частью механизма репарации, чтобы преодолеть дисфункцию барьера после воздействия ДОН за счет уменьшения площади поверхности ворсинок [59]. Добавление TOS к рациону, загрязненному DON, усиливало экспрессию мРНК соединительных белков и восстанавливало высоту ворсинок в отделах подвздошной кишки до контрольных значений у вакцинированных мышей.Сходные положительные эффекты были зарегистрированы для scGOS, поскольку он может ослаблять деструктивные эффекты DON на архитектуру ворсинок у мышей B6C3F1 и кишечный барьер клеток Caco-2, возможно, за счет стимуляции сборки плотных контактов в слое эпителиальных клеток [13]. Точно так же введение 2′-FL крысам имело трофический эффект, на что указывало увеличение высоты ворсинок и площадей в кишечнике [60]. Наблюдаемый эффект TOS может быть результатом прямого усиления созревания эпителиального барьера и образования слизи и модуляции экспрессии соединительных белков [61], или может быть следствием усиленного производства SCFAs, которые, как известно, улучшают целостность кишечного барьера и защищают слой слизистой оболочки [62,63].Несбалансированная экспрессия соединительных белков приводит к неплотному кишечному барьеру и позволяет антигенам легче проходить через эпителий, что приводит к выработке цитокинов. Это может влиять на захват и процессинг чужеродных антигенов ДК и, следовательно, влиять на развитие эффекторных клеток из наивных Т-клеток [20]. Мышиные хемокины CXCL2 / MIP-2 и CXCL1 / KC, как известно, являются функциональными гомологами человеческого CXCL8 и, как было установлено, вносят вклад в инициирование воспалительных каскадов и рекрутирование нейтрофилов в слизистую оболочку [45].В настоящем исследовании воздействие ДОН увеличивало экспрессию хемокина CXCL1 / KC в отделах подвздошной кишки, которая значительно подавлялась добавлением TOS с пищей. Сходные противовоспалительные свойства и снижение экспрессии CXCL1 / LC описаны для scGOS у мышей, подвергшихся воздействию DON [13]. Высвобождение и синтез этих хемокинов зависит от Toll-подобного рецептора (TLR) 4, и известно, что эпителиальные клетки кишечника способны экспрессировать этот рецептор [64]. TLR4 играет важную роль в иммуномодулирующих свойствах различных HMO, таких как 2′-FL, и смеси scGOS / lcFOS NDO [20,65].Следовательно, TLR4-зависимые пути могут частично участвовать в противовоспалительных эффектах TOS в кишечнике. Дальнейшие исследования необходимы для полного понимания механизмов, вовлеченных в защитные эффекты TOS против вызванного DON нарушения кишечного барьера и воспаления. Чтобы подтвердить наблюдения in vivo на целостность кишечника и изучить прямое действие TOS и его основного компонента, 3 ‘ -GL, на эпителиальном барьере более подробно, одноклеточные монослои клеточной линии Caco-2 использовали в качестве in vitro модели кишечного эпителиального барьера человека.Клетки Caco-2 способны полностью поляризоваться, образуя щеточные границы и межклеточные соединения, и, следовательно, представляют морфологические характеристики нормальных энтероцитов человека [66]. Предварительная обработка TOS предотвращала неблагоприятное воздействие DON на целостность барьера клеточного слоя Caco-2 и снижала индуцированную DON продукцию CXCL8. Эти результаты согласуются с наблюдениями in vivo в этом исследовании и подтверждают защитный эффект TOS на эпителиальный слой кишечника. Аналогичные положительные эффекты наблюдались для 3′-GL на вызванное DON нарушение барьера и продукцию CXCL8.Однако наблюдаемые эффекты на модели клеток Caco-2 не могут быть объяснены TLR4-зависимыми путями, поскольку эти клетки имеют очень низкую поверхностную экспрессию TLR4 [67], что указывает на то, что другие пути могут участвовать в защитных свойствах 3’- GL на кишечнике.

В заключение, воздействие ДОН подавляет иммунные ответы на вакцинацию за счет снижения Th2-опосредованных клеточных и гуморальных иммунных ответов у мышей. Диетическое вмешательство со специфическими олигосахаридами, TOS, может ослабить побочные эффекты DON на системный адаптивный иммунный ответ за счет восстановления баланса Th2 / Th3 и улучшения реакции на вакцину.Он также может восстановить микробную активность кишечника и защитить эпителиальный барьер кишечника. Результаты экспериментов in vitro показывают, что наблюдаемые свойства TOS в отношении кишечной микробиоты и эпителиального барьера, возможно, связаны с 3′-GL, присутствующим в смеси, который является одной из специфических олигосахаридных структур, присутствующих в материнском молоке. Таким образом, диетические добавки к детским смесям с TOS могут быть полезны для укрепления иммунной системы и развития здорового кишечного микробиома, а также предотвращения вредного воздействия загрязняющего пищу ДОНа на кишечную и иммунную системы.Мы также показали, что 3′-GL, основной компонент TOS, частично отвечает за наблюдаемые эффекты TOS на кишечник, что означает важность изучения эффектов отдельных олигосахаридных структур на кишечник и развитие системного иммунитета.

Ответы антител, индуцированные трехвалентной инактивированной вакциной против гриппа среди беременных и небеременных женщин в Таиланде: согласованное когортное исследование

Аннотация

Фон

Мы сравнили титры антител к гриппу среди вакцинированных и невакцинированных беременных и небеременных женщин.

Методы

В течение 1 st 30 июня th сентября 2018, четыре группы участников когорты — вакцинированные беременные, невакцинированные беременные, вакцинированные небеременные и невакцинированные небеременные женщины были отобраны по соответствующему возрасту, гестационному возрасту и неделям вакцинации. Титры сывороточных антител против каждого штамма инактивированной трехвалентной вакцины против гриппа (IIV3) Южного полушария 2018 года оценивали с помощью анализа ингибирования гемагглютинации (HI) в образцах сыворотки на день 0 (до вакцинации) и день 28 (через месяц после вакцинации).Средний геометрический титр (GMT), отношение GMT ​​(GMR), сероконверсия (определяемая как увеличение в 4 раза титра HI) и серопротекция (т. Е. Титр HI ≥1: 40) сравнивались в исследуемых группах с использованием многоуровневого регрессионного анализа с контролем вакцинация за предыдущий год на основании медицинских карт и базовых уровней антител.

Результаты

Всего в исследовании приняли участие 132 участника (по 33 в каждой из четырех исследовательских групп). Исходные значения GMT для вакцинных штаммов гриппа A (h2N1), A (h4N2) и B существенно не различались во всех четырех группах (все значения p> 0.05). Через один месяц обе вакцинированные группы имели значительно более высокие значения GMT, GMR, сероконверсии и серопротекции, чем их невакцинированные контрольные группы (все значения p <0,05). Уровень сероконверсии был более 60% для любого штамма среди вакцинированных групп, причем самый высокий (88,8%) наблюдался против A (h2N1) в группе вакцинированных беременных. Точно так же по крайней мере 75% вакцинированных участников развили уровни серопротективных антител против всех трех штаммов; самая высокая серопротекция была обнаружена против A (h4N2) - 92.6% среди вакцинированных небеременных участниц. Ответы антител (после вакцинации GMT, GMR, сероконверсия и серопротекция) существенно не различались между беременными и небеременными женщинами для всех трех штаммов IIV3 (все p> 0,05).

Выводы

Сезонный IIV3 2018 г. был иммуногенным против всех трех вакцинных штаммов, и беременность, похоже, не влияла на иммунный ответ на IIV3. Эти результаты подтверждают текущие рекомендации по вакцинации против гриппа беременным женщинам.

Образец цитирования: Nakphook S, Patumanond J, Shrestha M, Prasert K, Chittaganpitch M, Mott JA, et al. (2021) Ответы антител, индуцированные трехвалентной инактивированной вакциной против гриппа среди беременных и небеременных женщин в Таиланде: согласованное когортное исследование. PLoS ONE 16 (6): e0253028. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0253028

Редактор: Ray Borrow, Public Health England, UNITED KINGDOM

Поступила: 31 марта 2021 г .; Принята к печати: 21 мая 2021 г .; Опубликовано: 9 июня 2021 г.

Это статья в открытом доступе, свободная от всех авторских прав, и ее можно свободно воспроизводить, распространять, передавать, модифицировать, строить или иным образом использовать в любых законных целях.Работа сделана доступной по лицензии Creative Commons CC0 как общественное достояние.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его вспомогательных информационных файлах.

Финансирование: Это исследование было поддержано Фондом провинциальной больницы Накхон Пханом (исх. № NP 0032.202.3 / 7) при поддержке КП и СН. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи. Для этого исследования не было получено дополнительного внешнего финансирования.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Беременные женщины подвергаются более высокому риску тяжелого заболевания гриппом из-за физиологических и иммунологических изменений, поэтому им рекомендуется вакцинация против гриппа [1–3]. Недавние метаанализы показывают, что вакцинация против гриппа во время беременности может снизить заболеваемость лабораторно подтвержденным гриппом на 53–63%, уменьшить неблагоприятные исходы родов, такие как преждевременные роды и низкий вес при рождении, и еще больше распространить профилактику гриппа на их младенцев [4 –6].Иммуногенность вакцины против гриппа является важным показателем того, насколько хорошо вакцина реагирует на различные группы населения, поскольку вакцина должна быть иммуногенной, чтобы быть клинически эффективной [7]. Однако данные об ответах антител на противогриппозные вакцины во время беременности остаются неясными и особенно скудны в тропических странах со средним уровнем дохода, таких как Таиланд.

Хотя большинство исследований, проведенных среди беременных женщин, сообщают об адекватных гуморальных иммунных ответах на трехвалентную вакцину против гриппа (IIV3), хотя и о более низком ответе на штамм гриппа B [8–10], только несколько исследований включали небеременную группу для сравнения [11, 12].Используя вакцинированных небеременных женщин в качестве контроля, Schlaudecker et al. обнаружили, что, несмотря на сходные уровни сероконверсии и серопротекции, повышение титров антител к вирусам гриппа A (h2N1) и A (h4N2) после вакцинации у беременных женщин было снижено [12]. Это предполагает, что иммунологические изменения во время беременности могут модулировать ответ антител [12,13]. Напротив, другие обсервационные исследования и рандомизированные контролируемые исследования не сообщили о каких-либо существенных различиях в ответах антител на IIV3 между беременными и небеременными женщинами [11,14].

В Таиланде задокументированы серьезные исходы гриппа, включая материнскую и младенческую смертность [15]. Министерство общественного здравоохранения Таиланда (MOPH) рекомендует сезонные вакцины IIV3 для беременных с 2009 года, но охват вакцинацией остается низким [16]. Предыдущие исследования тайских беременных женщин неизменно показывают, что на их решения о вакцинации в основном влияют рекомендации их врачей [17–19], для которых данные об эффективности, безопасности и иммуногенности вакцины могут быть важными индикаторами [20].Kittikraisak et al. Недавно сообщили о расширенных преимуществах материнской вакцинации в передаче антител против гриппа их младенцам. в исследовании среди тайских беременных женщин в специализированном центре в Бангкоке [21]. Мы провели проспективное когортное исследование с основной целью оценки иммунных ответов, индуцированных IIV3 среди беременных и небеременных женщин, и сравнили их с их невакцинированными аналогами.

Материалы и методы

Дизайн и постановка исследования

Это было проспективное согласованное когортное исследование, включающее две группы (беременные и небеременные) и четыре группы — вакцинированные беременные женщины, невакцинированные беременные женщины, вакцинированные небеременные женщины и невакцинированные небеременные женщины в сельской северо-восточной провинции Накхон. Фаном, Таиланд (рис. 1).Это исследование проводилось в течение четырех месяцев с 1 -го июня по 30 -го сентября 2018 года как вложенное исследование в рамках более крупного когортного исследования по оценке эффективности вакцины против гриппа среди беременных женщин в провинции Накхон Пханом (идентификатор тайского регистра клинических испытаний: TCTR20201014004). Для желающих участников в провинциальной больнице был предложен сезонный инактивированный IIV3 в южном полушарии (Influvac ® , Abbott Biologicals B.V., Нидерланды), бесплатно предоставленный Министерством здравоохранения Таиланда (одна внутримышечная доза 0.5 мл), содержащий следующие три антигена: A / Michigan / 45/2015 A (h2N1) pdm09, A / Singapore / INFIMH-16-0019 / 2016 A (h4N2) и B / Phuket3073 / 2013 (линия Yamataga) [22 ]. Титры сывороточных антител против каждого из трех вакцинных штаммов оценивали на крови, взятой у участников с помощью венепункции в день 0 (до вакцинации) и день 28 (через месяц после вакцинации).

Выбор участников

Исследуемая популяция состояла из женщин репродуктивного возраста старше 18 лет, посещавших провинциальную больницу Накхон Пханом в течение периода исследования.Беременные женщины, которые хотя бы один раз посетили клинику дородовой помощи (ANC) больницы, были отобраны, если они были гражданами Таиланда, проживали в провинции по крайней мере с июня 2018 года и не планировали переехать в другое место до родов. Беременные женщины с беременностью более 33 недель были исключены, чтобы избежать родов до второй венепункции, которая была назначена через месяц после первой венепункции. Беременные участницы, желающие и не желающие получать вакцины от сезонного гриппа, были сопоставлены по возрастной группе, гестационному возрасту и неделе вакцинации.Для сравнения небеременные женщины, как желающие, так и не желающие получать вакцины против гриппа, были отобраны из числа пациентов, посещавших службы планирования семьи в больнице после сопоставления по возрасту с беременными участницами. Их небеременный статус был подтвержден отрицательным тестом на беременность в моче. Любой потенциальный участник с острым заболеванием, которое могло помешать процедуре взятия крови, был исключен из исследования.

Сбор данных

После включения в исследование были собраны такие демографические данные, как возраст, рост и вес (для расчета индекса массы тела (ИМТ)), гестационный возраст ребенка, количество беременностей, основное заболевание и статус курения.Истории вакцинации против гриппа непосредственно в предыдущем году и наличие каких-либо ранее существовавших заболеваний были получены из медицинских карт. Особое внимание было уделено кодам МКБ-10 для иммуносупрессивных состояний, таких как B20 (ВИЧ-инфекция), N18 (хроническая болезнь почек), O24 (гестационный сахарный диабет), E08 (сахарный диабет), D89 (аутоиммунное заболевание), C80 (злокачественное новообразование). и C95 (лейкемия). Данные о соответствии вакцинного штамма циркулирующим вирусам были получены из Тайского национального института здравоохранения (NIH) (таблица S1).

Непосредственно перед вакцинацией медсестрами-исследователями было взято 5 мл или примерно одна чайная ложка крови у участников в асептических условиях. Кровь собирали в пробирку Red Top Vacutainer, помеченную наклейкой с уникальным идентификационным номером исследования. Второй анализ крови был взят через месяц вакцинации. Аналогичным образом, для невакцинированных участников образцы крови были взяты в день включения (День 0) и через один месяц (День 28). Для участников, которые не смогли поехать в провинциальную больницу, медсестры-исследователи взяли образцы крови у участников и доставили в провинциальную больницу на пакетах со льдом.Затем сыворотки отделяли от образцов крови с помощью центрифуги в лаборатории больницы Накхон Пханом и хранили в холодильнике при контролируемой температуре 4–8 ° C в течение до 48 часов, а затем в морозильной камере при -20 ° C до использования. Образцы сыворотки доставлялись в тайскую лабораторию NIH в Нонтхабури каждую неделю.

Серологические исследования и результаты

Титры антител в сыворотке определяли методом ингибирования гемагглютинации (HI) в соответствии со стандартным протоколом ВОЗ в тайской лаборатории NIH с использованием эритроцитов гуся, как описано ранее [23,24].Персонал лаборатории не имел доступа к информации о когортной группе участников. Серопротекция определялась как титр HI ≥1: 40, а сероконверсия — как по крайней мере четырехкратное увеличение титра антител по сравнению с образцами сыворотки на день 0 и день 28. Среднее геометрическое значение титра (GMT) рассчитывали путем взятия антилогарифма среднего значения логарифмически преобразованных титров HI. Среднее геометрическое соотношение титров (GMR) или кратное увеличение определяли как отношение GMT ​​крови после вакцинации к GMT крови до вакцинации.

Расчет размера выборки

Минимальный размер выборки был рассчитан на основе метода Флейсса [25] с использованием программного обеспечения Stata версии 14.2 (StataCorp LP, College Station, TX, USA). По крайней мере, 28 участников были необходимы в каждой из вакцинированных и невакцинированных групп, чтобы иметь 80% мощность для обнаружения 30% или более сероконверсии после вакцинации при 5% ошибке типа I. Чтобы компенсировать возможную потерю возможности последующего наблюдения, размер выборки был увеличен на 15% до 33 на группу, так что общий размер выборки составил 132 (т.е. 33 × 4).

Статистический анализ

Описательная статистика использовалась для подсчета таких переменных, как триместр беременности, количество беременностей, статус курения и история вакцинации. Среднее и стандартное отклонение использовались для определения центральной тенденции непрерывных переменных, таких как возраст, гестационный возраст и ИМТ. Оценки ответов антител (GMT, GMR, серопротекция и сероконверсия) сравнивали между вакцинированными и невакцинированными группами как беременных, так и небеременных групп, а также между вакцинированными беременными и небеременными женщинами с использованием многоуровневой регрессии.В частности, мы провели многоуровневый анализ GMT и GMR для оценки среднего и 95% доверительных интервалов (ДИ) в каждой группе с помощью модели линейной регрессии со смешанными эффектами с условиями взаимодействия между статусом беременности и вакцинационным статусом IIV3, с учетом истории вакцинации за предыдущий год. и исходные уровни антител, и вакцинационный статус IIV3 в качестве случайной точки пересечения. Для серопротекции и сероконверсии многоуровневый анализ проводился с использованием модели отрицательной биномиальной регрессии со смешанными эффектами для оценки пропорций и их 95% доверительного интервала в каждой группе, сохраняя все остальные параметры такими же, как для GMT и GMR.Использование многоуровневой регрессии позволило скорректировать множественные сравнения путем частичного объединения и сдвига точечных оценок и их 95% доверительного интервала [26]. В качестве поданализа сравнивали доли вакцинированных участников, достигших более высоких титров HI ≥1: 80 и ≥1: 160 после одного месяца вакцинации между беременными и небеременными группами. Статистический анализ был проведен с использованием программного обеспечения Stata версии 14.2, и значимость была установлена ​​на уровне p <0,05.

Этические соображения

Протокол исследования был рассмотрен и одобрен Комитетом по этике Университета Таммасат (Ref.MTU-EC-ES-4-217 / 60). До сбора данных также было получено одобрение местного этического комитета больницы Накхон Пханом (№ NP-EC11-№4 / 2560). Письменное информированное согласие было получено от каждого участника медсестрами-исследователями, которые не были задействованы в услугах дородовой помощи и / или планирования семьи в больнице.

Результаты

Характеристики участников

В исследовании приняли участие 132 участника (т.е. 66 беременных и 66 небеременных женщин), по 33 участника в каждой из четырех групп (рис. 1).Базовые демографические характеристики представлены в таблице 1. Средний возраст участников составлял 26,4 года (стандартное отклонение [SD] 5,4 года). Соответствующие частоты вакцинированных и невакцинированных беременных участниц составляли 11 (33,3%), 18 (54,6%) и 4 (12,1%) в первом, втором и третьем триместрах соответственно. Четырнадцать вакцинированных (42,4%) и девять невакцинированных участниц (27,3%) забеременели впервые. Ни у одного из участников исследования не было ранее существовавших иммунодепрессивных заболеваний.ИМТ и история курения существенно не различались во всех четырех группах (значение p> 0,05). Разница в доле вакцинированных беременных и небеременных участников, не получивших вакцинацию против гриппа в предыдущем году, не была статистически значимой (87,9% против 78,8%, p = 0,511) (Таблица 1).

Соответствующий штамм вакцины

Согласно данным дозорного эпиднадзора Национального института здравоохранения Таиланда, A / Singapore / INFIMH-16-0019 / 2016 A (h4N2) был доминирующим штаммом, циркулировавшим до периода исследования, и соответствующий штамм сезонной вакцины IIV3 2018 г. во время периода исследования для A / Michigan / 45/2015 A (h2N1) pdm09, A / Singapore / INFIMH-16-0019 / 2016 A (h4N2) и B / Phuket / 3073/2013 (происхождение Яматага) было 100%, 78.2% и 100% соответственно (таблица S1).

Ответы антител на вакцинацию против гриппа

Исходные (до вакцинации) GMT участников существенно не различались для каждого штамма вакцины во всех четырех группах (все значения p> 0,05; Таблица 2). На исходном уровне доля участников с серопротективными титрами HI ≥1: 40 находилась в диапазоне 21,2–28,0%, 37,9–48,6% и 8,9–12,1% для A (h2N1), A (h4N2), и B соответственно.

Через месяц как беременные, так и небеременные вакцинированные женщины имели значительно более высокие значения GMT, GMR, сероконверсии и серопротекции по сравнению с их невакцинированными контрольными группами (все значения p <0.05; Таблица 2). В частности, после вакцинации GMT против вирусов A (h2N1), A (h4N2) и B у беременных женщин было 171,8 (95% ДИ 118,8–248,2), 195,7 (95% ДИ 131,2–291,9) и 94,7 (95% ДИ). 70,4–127,5) соответственно; в то время как у вакцинированных небеременных женщин этот показатель составил 106,1 (95% ДИ 72,9–154,3), 241,1 (95% ДИ 161,4–360,0) и 113,5 (95% ДИ 84,1–153,3), соответственно (рис. 2). Разница в GMR среди вакцинированных беременных и небеременных женщин не была значимой для A (h2N1) (20,9 против 14,9, p = 0.219), A (h4N2) (26,4 против 21,2, p = 0,611) и B (12,3 против 21,1, p = 0,133) (Таблица 2).

Уровень сероконверсии среди вакцинированных беременных женщин составил 88,8%, 69,5% и 76,9% против вирусов A (h2N1), A (h4N2) и B, соответственно. Показатели достоверно не различались среди вакцинированных небеременных женщин: 62,5%, 76,0% и 76,7% соответственно (все значения p> 0,05; Таблица 2). По крайней мере у 78% вакцинированных участников развились уровни серопротективных антител против всех трех штаммов; самая высокая серопротекция была обнаружена против A (h4N2) — 92.6% среди вакцинированных небеременных участниц. Доли как беременных, так и небеременных участниц, у которых после вакцинации развились серопротективные титры HI ≥40, значимо не различались (p> 0,05). Когда для серопротекции использовались более высокие точки отсечки титра HI ≥1: 80 и ≥1: 160, доля вакцинированных беременных женщин, достигших уровней серопротекции для всех штаммов вакцины, находилась в диапазоне 73–85% и 38–67%, соответственно. . Эти пропорции существенно не различались среди вакцинированных небеременных женщин (65–77% и 50–67% соответственно) (Таблица 3).

Обсуждение

В нашем сопоставленном когортном анализе мы обнаружили, что IIV3 вызывал высокие гуморальные иммунные ответы как у беременных, так и у небеременных женщин по сравнению с их невакцинированными аналогами. Кроме того, ответы антител в форме GMT, GMR после вакцинации и пропорции участников, достигших уровней сероконверсии и серопротекции, статистически не различались между беременными и небеременными женщинами. Эти данные свидетельствуют о том, что беременность не повлияла на иммунный ответ на IIV3 в нашей исследуемой популяции.

Наши результаты резко контрастируют с результатами Schlaudecker et al. которые обнаружили значительные различия в поствакцинальном GMT против вирусов гриппа A (h2N1) pdm09 и A (h4N2) среди беременных и небеременных контрольной группы в аналогичном проспективном исследовании [12]. Это несоответствие может быть связано с некоторыми различиями в характеристиках исследуемой выборки. Средний возраст беременных женщин в исследовании Schlaudecker et al. Составлял почти 32 года, и почти все из них (97%) получали IIV3 в предыдущем году [12].Предыдущая вакцинация была связана с более низким иммунным ответом при последующей вакцинации беременных женщин [27,28]. Для сравнения, наши участники были моложе и, вероятно, были иммунологически наивны по отношению к вакцинным штаммам, поскольку большинство из них раньше не получали никаких противогриппозных вакцин и, следовательно, могли иметь более высокий иммунный ответ. Кроме того, мы контролировали возможные смешивающие факторы между беременными и небеременными женщинами с помощью сопоставления когорт и многоуровневой регрессии, что могло дать более надежные оценки.Сходные результаты эквивалентных титров антител после вакцинации были получены в других исследованиях, в которых также учитывались исходные различия между беременными и небеременными женщинами [11,14].

По сравнению с вирусами гриппа A (h2N1) pdm09 и B, исходная серозащита против A (h4N2) в нашем исследовании была высокой, возможно, обусловленной естественной инфекцией, поскольку это был доминирующий циркулирующий штамм и вакцинация в предыдущий год была низкой. Тем не менее, через месяц после вакцинации как у беременных, так и у небеременных групп иммунный ответ против всех трех штаммов гриппа был сильным, что превышает рекомендуемые Европейским комитетом по лекарственным средствам для человека (CHMP) серологические критерии вакцины против гриппа для здоровых взрослых в возрасте до 60 лет. лет (т.е. > 2,5 GMR,> 40% уровень сероконверсии,> 70% уровень серопротекции) [29]. В Таиланде Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов использует критерии CHMP в качестве справочного материала для утверждения вакцин против гриппа для общественного использования. Однако в 2014 г. CHMP применил более диверсифицированный подход к измерению и отчетности об иммунном ответе на вакцины против гриппа из-за растущих опасений относительно уместности клинической корреляции титра HI ≥1: 40 для разных подгрупп [29,30]. Например, одно исследование показало, что для детей титр HI> 1: 110 необходим для 50% клинической защиты, а титр 1: 330 необходим для корреляции с 80% клинической защиты [31].Это означает, что беременным женщинам могут потребоваться более высокие титры HI для обеспечения клинической защиты их младенцев, особенно до их первых шести месяцев, в течение которых новорожденным не показана вакцинация против гриппа. Поскольку новых рекомендуемых пороговых значений для беременных женщин нет, а титр HI выше ≥1: 150 может коррелировать только с предельными преимуществами [32], мы использовали титры HI ≥1: 80 и ≥1: 160 для дальнейшего анализа серопротективных уровней среди наш образец исследования. Наши результаты показали, что более 70% беременных женщин достигли титра HI ≥1: 80 против всех трех штаммов и более 60% достигли титра ≥1: 160 после одного месяца вакцинации (за исключением гриппа B), что не отличалось от те, которые наблюдаются у небеременных здоровых женщин, обозначают сильный иммунный ответ.

Вакцина была хорошо согласована с циркулирующими штаммами, и ответы антител, наблюдаемые в этом исследовании, хорошо соответствовали общей эффективности вакцины в более крупном когортном исследовании, в котором участвовало более 1700 участников и оценивалась эффективность IIV3 против лабораторно подтвержденного гриппа. ассоциированное острое респираторное заболевание среди беременных — 65% (95% ДИ 38% -81%) [33]. В отличие от некоторых предыдущих исследований, проведенных в других странах, в которых сообщалось о низкой эффективности вакцины против гриппа A (h4N2), что объясняется либо адаптивными к яйцам мутациями в вакцинном штамме A (h4N2) [34,35], либо низкой иммуногенностью в целом [ 36], результаты этого исследования и когортного исследования VE показали, что IIV3 является иммуногенным и эффективным против A (h4N2) среди беременных женщин [33].Эти данные предоставляют важную эмпирическую поддержку политике рекомендации вакцинации против сезонного гриппа беременным женщинам, особенно в таких странах, как Таиланд, где охват вакцинацией среди этой группы постоянно низок. Предыдущее исследование показало, что тайские врачи в ДРП в государственных больницах с большей вероятностью рекомендовали вакцины против гриппа беременным женщинам, если они считали вакцины эффективными [20]. Поскольку рекомендации медицинских работников являются известными предикторами поглощения IIV3 среди беременных женщин в Таиланде [17,18], эпидемиологические данные о преимуществах вакцины, таких как эффективность и иммуногенность, в реальных условиях могут уменьшить нерешительность медицинских работников и помочь в их рекомендации относительно IIV3. беременным.

Несмотря на сильные стороны использования сопоставленных когорт и контроля искажающих факторов с помощью многоуровневой регрессии, в нашем исследовании есть некоторые ограничения. Во-первых, размер выборки был первоначально рассчитан для оценки различий между вакцинированными и невакцинированными группами, которые могут быть небольшими по численности и не иметь достаточной мощности, чтобы сделать подтверждающий вывод между беременными и небеременными женщинами. Следовательно, мы не проводили подгрупповых анализов ответов антител при вакцинации в разных триместрах беременности.Во-вторых, мы полагались исключительно на титры HI для измерения гуморального иммунитета. Дополнительные меры, такие как анализ микронейтрализации и индукция плазмобластов, могут потребоваться в будущих исследованиях, поскольку они могут быть более чувствительными и специфичными для беременных [11]. В-третьих, данные о предварительной вакцинации участников исследования были ограничены одним годом. Хотя предшествующие вакцинации могут повлиять на иммунный ответ на вакцину против гриппа, вероятность того, что беременным женщинам делали прививки в течение нескольких лет в Таиланде, менее вероятна, поскольку они рекомендуются только для сезонной вакцинации IIV3 в случае беременности, а уровень охвата вакциной среди беременных женщин составляет менее 1%. [16].Наконец, мы не оценивали уровни антител у младенцев, которые могут быть важным фактором для профилактики гриппа у младенцев посредством вакцинации матерей. Однако результаты Kittikraisak et al. предполагают, что вакцинированные тайские беременные женщины имеют более высокий уровень передачи антител против гриппа через плаценту своим младенцам, чем невакцинированные [21].

В заключение, сезонный IIV3 был иммуногенным против всех трех вакцинных штаммов, и беременность, по-видимому, не влияла на иммунный ответ на IIV3.Эти результаты подтверждают текущие рекомендации по вакцинации против гриппа беременным женщинам. Для оценки иммунного ответа беременных с последующими вакцинациями могут потребоваться более масштабные исследования клинических корреляций и дополнительных маркеров гуморального и клеточного иммунитета.

Благодарности

Мы благодарны участникам и медсестрам-исследователям провинциальной больницы Накхон Пханом за их внимание и сотрудничество в этом исследовании. Мы также благодарим сотрудников Thai NIH за их помощь в проведении лабораторных исследований.

Заявление об ограничении ответственности

Выводы и заключения в этом отчете принадлежат авторам и не обязательно отражают официальную позицию Центров по контролю и профилактике заболеваний или Агентства по токсичным веществам и регистрации заболеваний.

Ссылки

  1. 1. Grohskopf LA, Alyanak E, Broder KR, Blanton LH, Fry AM, Jernigan DB и др. Профилактика сезонного гриппа и борьба с ним с помощью вакцин: рекомендации консультативного комитета по практике иммунизации — США, сезон гриппа 2020–2021 гг.MMWR Recomm Rep. 2020; 69 (8): 1–24. pmid: 32820746.
  2. 2. Бучи П., Бадур С., Кассианос Г., Прейсс С., Там Дж. С.. Вакцинация беременных от гриппа должна стать приоритетом для всех стран: комментарий экспертов. Int J Infect Dis. 2020; 92: 1–12. pmid: 31863875
  3. 3. Всемирная организация здравоохранения. Вакцины против гриппа Позиционный документ ВОЗ — ноябрь 2012 г. Wkly Epidemiol Rec. 2012; 87 (47): 461–76. pmid: 23210147
  4. 4. Quach THT, Mallis NA, Cordero JF.Эффективность вакцины против гриппа у беременных женщин: систематический обзор и метаанализ. Matern Child Health J. 2020; 24 (2): 229–40. pmid: 31865602
  5. 5. Нунес М.С., Мадхи С.А. Вакцинация против гриппа во время беременности для профилактики подтвержденного гриппа у младенцев: систематический обзор и метаанализ. Hum Vaccin Immunother. 2018; 14 (3): 758–66. pmid: 28708952
  6. 6. Нунес М.С., Акил А.Р., Омер С.Б., Мадхи С.А. Влияние вакцинации против гриппа во время беременности на исходы родов: систематический обзор и метаанализ.Am J Perinatol. 2016; 33 (11): 1104–14. Epub 2016/09/08. pmid: 27603545.
  7. 7. Domnich A, Manini I, Panatto D, Calabrò GE, Montomoli E. Показатели иммуногенности противогриппозных вакцин: исследование 1164 зарегистрированных клинических испытаний. Вакцины (Базель). 2020; 8 (2): 325. pmid: 32575440
  8. 8. Amin AB, Nunes MC, Tapia MD, Madhi SA, Cutland CL, Wairagkar N, et al. Иммуногенность противогриппозных вакцин, вводимых беременным женщинам, в ходе рандомизированных клинических испытаний в Мали и Южной Африке.Вакцина. 2020; 38 (41): 6478–83. pmid: 32868130
  9. 9. Steinhoff MC, Omer SB, Roy E, Arifeen SE, Raqib R, Altaye M и др. Иммунизация против гриппа во время беременности — ответы антител у матерей и младенцев. N Eng J Med. 2010. 362 (17): 1644–6. pmid: 20427817.
  10. 10. Муньос Ф.М., Джексон Л.А., Свами Г.К., Эдвардс К.М., Фрей С.Е., Стивенс И. и др. Безопасность и иммуногенность сезонных трехвалентных инактивированных вакцин против гриппа у беременных. Вакцина. 2018; 36 (52): 8054–61.Epub 2018/11/13. pmid: 30416018.
  11. 11. Кей А.В., Бейлесс Н.Л., Фукуяма Дж., Азиз Н., Деккер С.Л., Макки С. и др. Беременность не ослабляет реакцию антител или плазмобластов на инактивированную вакцину против гриппа. J Infect Dis. 2015; 212 (6): 861–70. pmid: 25740957
  12. 12. Schlaudecker EP, McNeal MM, Dodd CN, Ranz JB, Steinhoff MC. Беременность изменяет антительный ответ на трехвалентную иммунизацию против гриппа. J Infect Dis. 2012. 206 (11): 1670–3. pmid: 22984116
  13. 13.Шлаудекер Е.П., Амброджио Л., Макнил М.М., Финкельман Ф.Д., Уэй СС. Снижение реакции на вакцинацию против гриппа с прогрессированием беременности у человека. Вакцина. 2018; 36 (31): 4734–41. pmid: 29941326
  14. 14. Муньос Ф.М., Патель С.М., Джексон Л.А., Свами Г.К., Эдвардс К.М., Фрей С.Е. и др. Безопасность и иммуногенность трех сезонных инактивированных вакцин против гриппа среди беременных женщин и устойчивость антител у их младенцев. Вакцина. 2020; 38 (33): 5355–63. Epub 2020.06.24. pmid: 32571718.
  15. 15. Тонгной П., Прафазири П., Давуд Ф.С., Линдблэйд К.А. Материнская смерть от гриппа в тропическом Таиланде. Ланцет. 2017; 389 (10068): 571–2. pmid: 28170335
  16. 16. Овусу Дж. Т., Прапасири П., Дицунгноен Д., Литонгин Дж., Ючароен П., Раттанайот Дж. И др. Охват вакцинацией против сезонного гриппа среди групп высокого риска в Таиланде, 2010–2012 гг. Вакцина. 2015; 33 (5): 742–7. pmid: 25454853
  17. 17. Kaoiean S, Kittikraisak W., Suntarattiwong P, Ditsungnoen D, Phadungkiatwatana P, Srisantiroj N, et al.Предикторы вакцинации против гриппа среди беременных женщин в Таиланде: роль врачей в увеличении использования вакцины. Другие вирусы гриппа респира. 2019; 13 (6): 582–92. pmid: 31419068
  18. 18. Ditsungnoen D, Greenbaum A, Praphasiri P, Dawood FS, Thompson MG, Yoocharoen P, et al. Знания, взгляды и убеждения, связанные с вакциной против сезонного гриппа среди беременных женщин в Таиланде. Вакцина. 2016; 34 (18): 2141–6. Epub 2016/02/09. pmid: 26854910.
  19. 19. Левонгтракул Т., Кунпалин Ю., Ингвия Т., Чайхонгвонгваттхана С.Принятие вакцинации против гриппа среди беременных женщин, посещающих женскую консультацию больницы им. Короля Чулалонгкорна. Тайский журнал акушерства и гинекологии. 2017: 75–82.
  20. 20. Praphasiri P, Ditsungneon D, Greenbaum A, Dawood FS, Yoocharoen P, Stone DM, et al. Рекомендуют ли тайские врачи вакцины от сезонного гриппа беременным женщинам? Поперечное исследование взглядов и практик врачей в Таиланде. PLoS One. 2017; 12 (1): e0169221. pmid: 28099486
  21. 21.Kittikraisak W, Phadungkiatwatana P, Ditsungnoen D, Kaoiean S, Macareo L, Rungrojcharoenkit K и др. Сравнение титров антител к гриппу у женщин, вакцинированных во 2-м и 3-м триместрах беременности. Вакцина. 2021; 39 (1): 18–25. pmid: 33243634
  22. 22. Всемирная организация здравоохранения. Рекомендуемый состав вакцин против вируса гриппа для использования в сезоне гриппа в Южном полушарии 2018 г. Женева, Швейцария: ВОЗ, 2017 [цитировано 9 февраля 2021 года]. https: // www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/2018_south/en/.
  23. 23. Глобальная сеть ВОЗ по эпиднадзору за гриппом. Серологическая диагностика гриппа по тесту торможения гемагглютинации. В кн .: Руководство по лабораторной диагностике и вирусологическому надзору за гриппом. Женева, Швейцария: ВОЗ, 2011.
  24. 24. Читтаганпич М., Путхаватана П., Прафазири П., Вайчароен С., Шреста М., Мотт Дж. А. и др. Антительный ответ против гриппа B линий среди местных жителей в возрасте 65 лет и старше, получивших трехвалентную инактивированную вакцину против гриппа в течение двух последовательных сезонов в Таиланде.Юго-Восточная Азия J Trop Med Public Health. 2019; 50 (3): 500–13.
  25. 25. Флейс Дж. Л., Левин Б., Пайк М. С.. Статистические методы расчета ставок и пропорций: John Wiley & Sons; 2013.
  26. 26. Гельман А., Хилл Дж., Ядзима М. Почему нам (обычно) не нужно беспокоиться о множественных сравнениях. J Res Educ Eff. 2012. 5 (2): 189–211.
  27. 27. Сперлинг Р.С., Энгель С.М., Валленштейн С., Краус Т.А., Гарридо Дж., Сингх Т. и др. Иммуногенность трехвалентной инактивированной вакцины против гриппа, полученной во время беременности или в послеродовом периоде.Obstet Gynecol. 2012. 119 (3): 631–9. pmid: 22353963
  28. 28. Ohfuji S, Fukushima W, Deguchi M, Kawabata K, Yoshida H, Hatayama H и др. Иммуногенность моновалентной вакцины против гриппа A (h2N1) 2009 среди беременных женщин: снижение ответа антител в результате предшествующей сезонной вакцинации. J Infect Dis. 2011. 203 (9): 1301–8. pmid: 21459817
  29. 29. Wijnans L, Voordouw B. Обзор изменений в лицензировании вакцин против гриппа в Европе. Другие вирусы гриппа респира.2016; 10 (1): 2–8. pmid: 26439108
  30. 30. Европейское медицинское агентство. Руководство по вакцинам против гриппа. Доклинический и клинический модуль. Лондон, Англия: Комитет по лекарственным средствам для человека, Европейское агентство по лекарственным средствам, 2016 г. [цитировано 9 февраля 2021 г.]. https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/influenza-vaccines-non-clinical-clinical-module_en.pdf.
  31. 31. Блэк С., Николай Ю., Весикари Т., Кнуф М., Дель Джудиче Дж., Делла Чиоппа Дж. И др. Титры антител к ингибированию гемагглютинации как коррелят защиты инактивированных вакцин против гриппа у детей.Pediatr Infect Dis J. 2011; 30 (12): 1081–5. pmid: 21983214
  32. 32. Coudeville L, Bailleux F, Riche B, Megas F, Andre P, Ecochard R. Взаимосвязь между титрами антител, ингибирующих гемагглютинацию, и клинической защитой от гриппа: разработка и применение байесовской модели случайных эффектов. BMC Med Res Methodol. 2010; 10 (1): 18. pmid: 20210985
  33. 33. Накпхук С., Прасерт К., Чайхонгвонгваттана С., Патуманонд Дж. Эффективность трехвалентной инактивированной вакцины против гриппа среди беременных женщин: однолетнее проспективное когортное исследование в Накхон Фаном.Chiangrai Medical Journal. 2021; 13 (1): 106–19. Доступно по ссылке: https://he01.tci-thaijo.org/index.php/crmjournal/article/view/248355/168852.
  34. 34. Сковронски Д.М., Джанджуа Н.З., Де Серрес Дж., Сабайдук С., Эшаги А., Дикинсон Дж. А. и др. Низкая эффективность вакцины против гриппа 2012–2013 годов связана с мутацией в адаптированном к яйцам вакцинным штаммом h4N2, а не с дрейфом антигена в циркулирующих вирусах. PLoS One. 2014; 9 (3): e92153. pmid: 24667168
  35. 35. Kissling E, Pozo F, Buda S, Vilcu A-M, Rizzo C, Gherasim A и др.Эффективность противогриппозной вакцины против гриппа A в Европе в сезоны различных компонентов вакцины A (h2N1) pdm09 и тех же компонентов вакцины A (h4N2) (2016–17 и 2017–18 годы).

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *