Кровь пцр на туберкулез: Инвитро. Туберкулёз, узнать цены на анализы и сдать в Москве

Содержание

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в сыворотке крови

Исследуемый материал Сыворотка крови

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Определение ДНК возбудителей туберкулеза, комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения.

Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

  • определяемый фрагмент — специфичные участки ДНК микобактерий;
  • специфичность определения — 100%;
  • чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

 

Литература

  1. Макаревич А.Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.
  2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 — pр. 828 — 829.

Анализ крови на антитела к туберкулезу

Анализ крови на антитела к туберкулезуназначают с целью диагностики при подозрении на инфицирование. Исследование методом ИФА позволяет выявить антитела к возбудителю заболевания — микобактериям (палочке Коха).

Туберкулез передается воздушно-капельным путем и нередко протекает скрыто, активизируясь только в 10% случаев. Чаще всего он поражает легкие, в результате чего возникают характерные симптомы:

  • долгий кашель с отхождением мокроты (иногда — крови),
  • подъем температуры тела,
  • слабость и повышенная утомляемость,
  • снижение веса,
  • повышенная потливость в ночные часы.

Различают две формы туберкулеза — открытую и закрытую. В первом случае больной при несоблюдении правил безопасности может стать источником заражения окружающих, во втором — нет.

Подготовка и проведение

Специфической подготовки к процедуре не требуется. Однако анализы крови на антитела к туберкулезу лучше проводить натощак, накануне отказавшись от употребления жирных и жареных блюд.

Для забора биологического материала используют вакуумную систему с активатором свертывания или без антикоагулянта. В лабораторных условиях из цельной крови выделяют сыворотку, которая затем подлежит дальнейшему исследованию.

В норме антитела классов G и M должны отсутствовать. Их обнаружение свидетельствует о наличии текущей инфекции в легких, а также внелегочном туберкулезе (костно-суставном, мочеполовом и др.).

В редких случаях возможны ошибочные реакции.

  • Ложноположительные — при тяжелых ифекционных и соматических болезнях, для которых характерны обширные деструктивные изменения в пораженных органах (например, цирроз печени, онкологические патологии), а также антифосфолипидном синдроме и во время беременности.
  • Ложноотрицательные — после иммуносупрессивной терапии, при некоторых индивидуальных особенностях организма человека и низкой иммуногенности возбудителя.

Анализ крови на антитела используют в комплексной диагностике туберкулеза наряду с рентгенографией, ПЦР, микроскопией мазков мокроты. Специфичность метода достигает 90%. Однократного обнаружения иммуноглобулинов IgG недостаточно для постановки точного диагноза, поэтому после врач назначит дополнительные процедуры.

Где сдать анализ на туберкулез?

Сдать анализ крови на антитела к туберкулезу методом ИФА Вы можете в «Литех». Высокоточное лабораторное оборудование и опыт наших специалистов позволяют получить достоверный результат в максимально короткие сроки. Записаться на анализ крови на туберкулез можно любым удобным способом — по телефону или через интернет-регистратуру.

Все статьи

Диагностика туберкулеза по анализу крови

Диагностика туберкулеза по анализу крови часто заключается в проведении исследования по ПЦР методике. Определение генетического материала возбудителя — палочки Коха — путем многократного копирования ДНК-фрагмента. Для обследования нужно сдать кровь из вены.

Туберкулез — инфекционная болезнь, которой можно заразиться воздушно-капельным путем от человека или животного. У 90 процентов первичное инфицирование не приводит к развитию туберкулеза — иммунная система подавляет микобактерии. Переход из латентной формы в активную наступает при сильном подавлении иммунитета. В группу риска входят:

  • ВИЧ-инфицированные,
  • больные сахарным диабетом,
  • беременные,
  • пожилые,
  • дети после виража туберкулиновых проб,
  • контактирующие с больными туберкулезом.

Сегодня анализ крови по методике ПЦР — один из самых чувствительных и быстрых методов диагностики. Можно также провести стандартный бактериальный посев, который отличается высокой специфичностью. Но у него есть и недостатки — длительность, необходимость высокой концентрации палочек Коха в материале. При диагностике легочной формы болезни бакпосев сочетают с рентгенографией.

Специалисты также назначают анализы на антитела к микобактериям — специфическим иммуноглобулинам. Определяют суммарно IgG и IgM. Для диагностики используют метод иммуноферментного анализа, ИФА. В активной форме иммунная система вырабатывает большое количество антител к антигенам. Анализы показательны через месяц с момента перехода заболевания в активную форму. Обследование вакцинированных пациентов не дает ложноположительных результатов. Специфичность тестов крови достигает 95 процентов. Чувствительность зависит от локализации микобактерий.

Показания к диагностике туберкулеза по анализу крови:

  • подозрения на внелегочный туберкулез,
  • контакт с больными,
  • ВИЧ-инфекция,
  • признаки туберкулезной бактериемии.

Бактериемия — содержание бактерий в крови, изначально она стерильна. Возможна на первых стадиях туберкулезной инфекции, при генерализованном, внелегочном туберкулезе. Опасна развитием сепсиса и септического шока. В группу риска развития генерализованного заболевания входят больные ВИЧ на поздних стадиях, пациентов, прекративших лечение, поздно обратившихся при появлении признаков. Если для диагностики у ВИЧ-инфицированных проводить микробиологические анализы или пробы на туберкулин, то возможно получение ложноотрицательных результатов и-за угнетенного иммунитета.Им лучше проходить ПЦР исследование.

В сети лабораторий «Литех» можно пройти диагностику по разным анализам крови. Записывайтесь на удобное время.

Сдать ДНК Mycobacterim tuberculosis, кач, кровь анализ во Владимире

COVID-19

Получить результат

Поиск анализов

Описание

Диагностика инфекционных заболеваний (ПЦР) — ДНК Mycobacterium tuberculosis, кач, кровь

Сроки исполнения: 3-4 рабочих деней*.
Биоматериал: кровь

Описание:

Туберкулез — широко распространенная инфекция. Возбудитель туберкулеза — 

Mycobacterium tuberculosis. Основным методом диагностики является бактериологическое исследование (чувствительность 80-85% при активных легочных формах и 7-10% — при туберкулезе почек). Однако микобактерии очень медленно растут на питальных средах, и для получения даже предварительного ответа при бактериологическом исследовании требутся 3 недели. Бактериологический метод выделения микобактерий туберкулеза весьма эффективен в основном при легочных формах туберкулеза, а в отношении других форм проявляет низкую чувствительность (выявление положительных проб не превышает 50%). Поэтому в таких случаях до получения результатов бактериологического исследования используют метод ПЦР.

Диагностика туберкулеза ПЦР имеет большое диагностическое значение (время исследования 4-5 часов). Показано, что результаты ПЦР в 100% случаев совпадали с положительными результатами микроскопии и бактериологического посева и свидетельствовали о наличии ДНК микобактерий в 65% случаев у больных туберкулезом с отрицательным результатом микроскопии и посева. Для детекции ДНК достаточно чтобы в исследуемом материале было около 10 микобактерий. Обнаружение ДНК микобактерии туберкулеза в материале с помощью ПЦР необходимо для:

  • быстрого обнаружения источника инфекции;
  • диагностики легочного туберкулеза;
  • диагностики туберкулеза внелегочной локализации;
  • контроля эффективности противотуберкулезного лечения;
  • раннего выявления случаев рецидивов.

Mycobacterium tuberculosis в исследуемом биоматериале в норме отсутствуют. Их выявление в исследуемом материале с высокой вероятностью указывает на этиологическую роль микобактерий в развитии заболевания. Вместе с тем следует отметить, что применение ПЦР для диагностики туберкулеза не заменяет бактериологический метод.

Забор биоматериала не входит в стоимость.
Стоимость, перечень и сроки исследований уточняйте у администратора.

ПЦР: современные методики диагностики туберкулеза — Новости

С помощью ПЦР-диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя.

Cправочно:

Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР) — метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных). Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro).

Метод ПЦР имеет очень высокую информативность и позволяет легко и эффективно определять наличие микобактерии в организме, но, только если проводить анализ мокроты (если это туберкулез органов дыхания) или мочи (при туберкулезе орагнов мочевыделительной системы), а не крови. ПЦР анализ крови на туберкулез нельзя считать информативным, так как ДНК микобактерии туберкулеза в крови бывает только у больных туберкулезным сепсисом, что на практике встречается весьма редко.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества.

Данный тест имеет массу достоинств, которые проявляются в следующем:
• 100%-ное выявление, так как в биологической пробе определяется от 10 до 100 клеток;
• специфичность теста очень высока: выявляется особенный фрагмент, который имеется только в конкретном возбудителе;
• скорость получения результата анализа – от 4 до 4,5 часа.

С помощью этой диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя. Чтобы провести полимеразную цепную реакцию на устойчивость, используют гены, запоминающие невосприимчивость к некоторым лекарствам, после чего через двое суток можно получить результат.

Андрей Чередниченко, заведующий ПЦР-лабораторией: «На сегодняшний день во фтизиатрической службе СФО работают пять ПЦР-лабораторий. Лаборатория ННИИТ является одной из самых современных, здесь используется формат Real-Time ПЦР (или ПЦР в реальном времени). Эта методика позволяет не только выявить ДНК возбудителя туберкулеза, но и те его мутации, которые указывают на устойчивость к препаратам противотуберкулезного ряда. Одним из передовых методов ПЦР является метод гибридизации на стрипах, который позволяет провести определение микобактерий и их устойчивость к противотуберкулезным препаратам».

Актуальность проведения ПЦР-исследования на туберкулез прежде всего в том, что данная методика позволяет выявлять микобактерии у пациентов без бактериовыделения. Благодаря данной методике диагностировать туберкулез и назначать правильные схемы лечения (учитывая устойчивость к определенным препаратам) стало значительно легче.

Анализ крови на туберкулез. Лабораторная диагностика туберкулеза. Сдать кровь на туберкулез, цена в Волгограде, Волжском.

Комплексные исследования

АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКА

АУТОИММУННЫЕ МАРКЕРЫ АУТОИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ

Аллергодиагностика Панели аллергенов

Аутоиммунные маркеры ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖКТ И ПЕЧЕНИ

Аутоиммунные маркеры ЗАБОЛЕВАНИЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Аутоиммунные маркеры ПРИЧИН БЕСПЛОДИЯ

Аутоиммунные маркеры и РЕВМОПРОБЫ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Инфекции. БАКТЕРИИ.Определение антител в крови методом ИФА

Инфекции. БАКТЕРИИ.РНК/ДНК-диагностика. Выявление методом ПЦР

Инфекции. Вирусы. ГЕПАТИТЫ.Определение антител в крови

Инфекции. Вирусы. Определение антител в крови методом ИФА

Инфекции. Вирусы. РНК/ДНК-диагностика. Выявление методом ПЦР

Инфекции. Гельминты , простейшие и грибы

Исследование генетической предрасположенности в НЕОНАТОЛОГИИ и ПЕДИАТРИИ

Исследование генетической предрасположенности к ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИМ/УРОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ДЕРМАТОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ЗАБОЛЕВАНИЯМ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

Исследование генетической предрасположенности к ИММУНОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к КАРДИОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ЛОР ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к НАРУШЕНИЮ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ

Исследование генетической предрасположенности к НЕФРОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ОНКОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ОРТОПЕДИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к РЕВМАТОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к СТОМАТОЛОГИЧЕСКИМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование генетической предрасположенности к ЭНДОКРИННЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ

Исследование клещей

МОНИТОРИНГ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

ОНКОМАРКЕРЫ

ПРЕНАТАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА РАЗВИТИЯ ПЛОДА (PRISCA)

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Аллергодиагностика бытовых аллергенов.

Аллергодиагностика инсектных аллергенов.

Аллергодиагностика лекарственных аллергенов.

Аллергодиагностика пищевых аллергенов.

Аллергодиагностика пыльцы цветущих деревьев.

Аллергодиагностика трав луговых.

Аллергодиагностика трав сорных.

Биохимические исследования витаминов и жирных кислот.

Биохимические исследования микроэлементов.

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЕМОСТАЗИОГРАММА И ФАКТОРЫ СВЁРТЫВАНИЯ КРОВИ.

ГОРМОНЫ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА и ОНКОМАРКЕРЫ.

ИММУНИТЕТ. Исследование клеточного и гуморального компонентов.

ИССЛЕДОВАНИЯ МОЧИ.

ИССЛЕДОВАНИЯ ФЕКАЛИЙ.

Инфекции. БАКТЕРИИ.

Инфекции. ВИРУСЫ.

Инфекции. ГРИБКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ. Определение антител в крови.

Инфекции. ГРИБКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ. ПЦР(ДНК)-диагностика.

Инфекции. Гельминты , простейшие и грибы.

ЛАБОРАТОРНЫЕ КОМПЛЕКСЫ и НАБОРЫ.

МИКРОСКОПИЯ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОТЦОВСТВА / РОДСТВА.

САХАРНЫЙ ДИАБЕТ диагностика: аутоиммунные и генетические маркеры.

Услуги забора биоматерилов.

АНТИФОСФОЛИПИДНЫЙ СИНДРОМ.

ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общеклинические исследования.

Лабораторная диагностика туберкулеза — сдать анализы в СЗЦДМ

Туберкулез — инфекционная болезнь, возбудителем которой является микобактерия. Чаще всего поражает дыхательную системы, однако может распространяться и в другие ткани и органы. Наиболее распространенный путь передачи — воздушно-капельный. Для того чтобы развилась активная форма болезни, необходимы благоприятные условия, например, сниженный иммунитет. 

Патология проявляется длительным кашлем, субфебрильной температурой, которая может удерживаться в течении нескольких месяцев, ночным потоотделением, лимфаденопатией. Современные схемы лечения позволяют избавиться от болезни. Однако, для этого необходима своевременная постановка диагноза. Первое время туберкулез может не вызывать клиническую симптоматику, поэтому диагностика должна быть профилактической и регулярной. Ранняя терапия позволяет избавиться от осложнений, среди которых выраженные структурные нарушения дыхательной системы и вторичное распространение инфекции.

Современные методы диагностики туберкулеза

Различают следующие методы диагностики патологии:

  • бактериологический анализ мочи;

  • общий анализ мочи;

  • биохимическое исследование крови;

  • T-SPOT.TB;

  • микробиологические методы диагностики;

  • исследование свертывающей системы;

  • микроскопический анализ мокроты;

  • лучевые методы диагностики.

Перейти к анализам

Рассмотрим эти методы подробнее.

Бактериологический анализ мочи

Показан при внелегочной форме туберкулеза. Этот метод диагностики крайне важен, ведь туберкулез мочеполовой системы часто вызывает осложнения и долгое время не вызывает симптомов. Именно туберкулез может долго маскироваться под воспалительный процесс или мочекаменную болезнь. Поэтому, длительная патология данных органов, которая сложно поддается лечению, является показанием к диагностике. Также, анализ мочи показан при туберкулезе для исключения вовлечения в процесс мочеполовой системы.

Для того, чтобы определить наличие возбудителя в моче, проводится бактериоскопия или посев на среду.

Для обнаружения микобактерии проводится специальное окрашивание, при котором возбудитель приобретает другой оттенок, отличный от здоровых клеток.

Другой метод заключается в посеве образца мочи на питательную среду. Если наблюдается рост культуры микобактерий, это говорит о наличии в организме возбудителя.

Общий анализ мочи

В общем анализе мочи наблюдаются характерные изменения при туберкулезе. Это появление капель гноя, наличие или следы белка и более кислая реакция. Также появляются видоизмененные лейкоциты, бактерии, эритроциты.

Биохимический анализ крови

На некоторых стадиях болезни выявляются изменения в биохимическом исследовании крови. При неактивной форме никаких изменений в данных анализах нет, хотя они могут появляться при сопутствующей патологии.

Острая форма туберкулеза приводит к снижению альбумино-глобулинового коэффициента. Если патология привела к осложнениям в виде поражения печени, повышается уровень трансаминаз, разных фракций билирубина. Эти показатели входят в обязательное обследование пациента с туберкулезом. Пациент сдает этот анализ в динамике, для оценки состояния.

Ухудшение работы почек может отражаться в повышении креатинина, изменениях скорости клубочковой фильтрации.

Биохимический анализ крови не имеет специфической диагностической ценности, однако является важным компонентом оценки качества лечения и состояния пациента.


К иммунологическим методам диагностики относится методика T-SPOT.TB.  Основа способа заключается в изучении реакции Т-лимфоцитов. Процедура имеет высокую чувствительность и довольно информативен. Ложные результаты исключены даже тогда, когда остальные методики нечувствительны к результату. Метод применяется в сомнительных случаях, например после прививок, у пациентов с аутоиммунной патологией, у медработников. Данный способ позволяет оценить наличие возбудителя количественно, но не дает информации о фазе процесса.

Особое место данная диагностика занимает у носителей ВИЧ. Дело в том, что вирус поражает именно лимфоциты. Несмотря на это диагностика по методу T-SPOT.TB дает точные результаты.

Высокая точность теста объясняется также тем, что тест-система чувствительна к компонентам возбудителя, но именно к тем, которых нет ни в вакцине БЦЖ, ни в других микроорганизмах, которые имеют сходные компоненты. Суть метода заключается в количественном определении в крови эффекторных Т-клеток (CD4 и CD8), вырабатывающих ИФН-ɣ (гамма-интерферон), который продуцируется в ответ на стимуляцию специально подобранными антигенами ESAT-6 и CFP10. Речь идет об одном из фрагментов генома микобактерии. Примечательно, что высокая специфичность наблюдается и в латентную, и в активную фазу.

Особенной подготовки к сдаче анализов не требуется — достаточно ограничить прием пищи за два часа до процедуры. Проводится забор венозной крови. Это необходимо проводить в соответствующих условиях, с соблюдением правил асептики и антисептики.

Положительный результат теста говорит о том, что в организме присутствует микобактерия, а отрицательный — об обратном.

Микробиологические методы диагностики

Применяются для прямого обнаружения возбудителя туберкулеза в биологических тканях организма. Применяются различные методики.

Окраска по Цилю-Нельсену заключается в том, что мазок с препаратом обрабатывается специфическим красителем. Микобактерии приобретают характерный оттенок, что говорит о том, что реакция произошла. Так можно подтвердить или исключить наличие возбудителя в материале. Метод экономичный и сравнительно быстрый. Однако, он чувствителен только при высокой концентрации микроорганизмов в образце.

Люминесцентная микроскопия дает более высокое разрешение и улучшает методику окраски. Требуется применение флуорохромов — специфических веществ, которые “подсвечивают” микобактерии и делают их более видимыми под микроскопом.

Полимеразно-цепная реакция позволяет осуществить воспроизведение ДНК бактерии из её фрагментов, которые содержатся в тканях. Это быстрый и информативный метод диагностики, который имеет высокую специфичность и чувствительность.

Культуральный метод заключается в выращивании культуры из микобактерий. Для этого берется фрагмент биоматериала и сеется на питательную среду. Потом оценивается штамм, который вырос на среде и подтверждается или исключается диагноз. Используется специфическая среда, на которой с большей вероятностью вырастет необходимая среда. Выращенные колонии можно использовать для определения чувствительности к антибиотикам.

ВАСТЕС460 — это современный метод диагностики, в ходе которого используется радиометрическая система и меченый СО2. Бактерия поглощает элемент-индикатор и её можно обнаружить в исследуемом материале.

Исследование свертывающей системы крови

Коагулограмма часто используется в фтизиатрии, так как у пациентов с туберкулезом постепенно возникает кровохаркание или легочные кровотечения. Это приводит к изменению показателей гемостаза. Анализ может меняться и после хирургического лечения болезни.

Контроль коагулограммы основан на анализе таких показателей, как АЧТВ, фибриноген, время кровотечения, время свертывания. Эти показатели могут колебаться в разные стороны, в зависимости от объема кровопотери. Если она незначительна — коагуляционная система стимулируется и показатели повышаются. Потеря большого объема крови приводит к снижению в организме факторов свертывания и соответствующим изменениям коагулограммы.

Микроскопический анализ мокроты

Анализ мокроты — обязательное исследование при туберкулезе. При этой патологии мокроты выделяется в небольшом количестве, имеет вкрапления крови, гноя, слизи. На ранних стадиях, кровь может не появляться. Кавернозная форма болезни приводит к появлению в материале так называемых рисовых телец. Также, наблюдаются вкрапления кристаллов, эластичных волокон, холестерина. Повышается белок в общем составе мокроты. Если произошел распад — мокрота содержит кальций, волокна различного происхождения, холестерин и, собственно, туберкулезные микобактерии.

Проводится также бактериология мокроты. Применяется специфический метод окраски, который позволяет определить наличие микобактерии. Посевы на питательные среды также имеют диагностическую ценность.

Бактериоскопия мокроты подразумевает её изучение под необходимым увеличением микроскопа. При высокой концентрации микроорганизмов методика довольно специфична и чувствительна. Мокрота изучается 3 раза для того, чтобы получить наиболее точный результат.

Лучевые методы диагностики

Лучевые методы позволяют визуализировать изменения в организме, к которым привела микобактерия. Это и скрининговый метод диагностики, и способ оценки тяжести и степени патологии. Также, лучевая диагностика — метод динамической оценки пациента. Различают такие лучевые методики в диагностике туберкулеза:

  • флюорография;
  • рентгенография;
  • томография;
  • рентгеноконтрастные исследования.

Флюорография используется для скрининговой диагностики, которая требует подтверждения при подозрительных результатах. Неспецифический метод, который используется для профилактического осмотра. Цифровая методика позволяет оценивать изображение на экране с использованием увеличения и приближения картинки. Метод прост, быстрый и экономичный.

Рентгенография является более точной методикой и позволяет полноценно обследовать структуры грудной клетки. на снимке можно обнаружить признаки функциональной недостаточности различных органов, проследить топография новообразования, диагностировать каверну, ателектаз, абсцесс или нарушение целостности плевральной полости. Выполняется в двух проекциях для более точных результатов. Иногда используется прицельное проведение диагностики.

Томография является наиболее точной методикой визуализации структур грудной клетки. Это формирование послойных изображений органов и структур. Можно определить распространение и локализацию очага болезни, увидеть, какие ткани он поразил и насколько глубоко проник.

Методики с использованием контраста применяются для получения изображения бронхиального дерева (бронхография). Можно обнаружить полостные изменения, нарушения дренажной функции, структурные изменения и наличие фистул. также применяется ангиопульмонография. контраст вводится в сосудистое русло и позволяет оценить легочной кровоток. особенно это важно при кровохарканьи и кровотечениях.

Применяются радионуклидные методы, сцинтиграфия. Они применяются для оценки функциональной активности или нарушений.

Ультразвуковая методика применяется для оценки деятельности сердца, диагностики состояния плевральных синусов, лимфатических узлов.

Сбор материала и подготовка к исследованиям

Для анализа мочи на туберкулез применяется утренняя порция. необходимо провести туалет наружных половых органов и не касаться ими резервуара для сбора материала. Контейнер должен быть стерильным и сухим. Собранный биоматериал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию, не допускать его высыхания и нагревания. За сутки до сдачи анализа необходимо отказаться от таких продуктов, как черника, морковь, свекла и других ярких овощей и фруктов. Также следует ограничить прием диуретиков, витаминов, ацетилсалициловой кислоты. Женщинам следует помнить, что анализы мочи не сдают во время менструаций. Сдается средняя, промежуточная порция мочи.

Сдача крови происходит натощак, так как прием пищи может исказить результаты исследования. Стоит проконсультироваться с лечащим врачом на предмет отмены некоторых препаратов. Накануне не следует употреьоять кофе, алкоголь, табак. Сбор крови происходит в стерильных условиях, с соблюдением правил забора материала. Для некоторых исследований необходима капиллярная, а для некоторых — венозная кровь.

Мокрота собирается натощак, с соблюдением основных правил. Материал необходимо откашлять, чтобы в посуду не попала слизь изо рта или носоглотки. Используется специальная плевательница из темного стекла, с плотной крышкой. Мокрота не должна обветриваться или высыхать.

К инструментальным методам исследования не требуется особая подготовка. Исключение — применение контрастного вещества. Перед его использованием необходимо оценить функцию почек. Большинство рентгеноконтрастных веществ выводится именно эти органом и врач должен быть уверен в том, что выделительная система выдержит эту нагрузку.

Нормы и выявляемые отклонения

В норме, в организме не должно быть микобактерий. Их наличие расценивается как положительный результат диагностики туберкулеза. Негативный результат говорит о том, что у пациента нет данной патологии. Некоторые методы неспецифичны и не обладают высокой диагностической ценностью. Они используются для оценки общего состояния. Бактериологические методики более специфичны и их положительные результаты можно считать подтверждением диагноза. Отрицательный результат является поводом для повторных анализов, если есть клинические признаки болезни.

Сроки готовности результатов диагностики туберкулеза


Общий и биохимический анализ крови, мокроты и мочи может быть готов в течении нескольких часов. Как правило, результаты сообщаются на следующий день.

Бактериологический метод с окраской занимает около 24 часов.

Посевы занимают больше времени — до нескольких недель.

Результат лучевых методов диагностики зависит от скорости описания снимка. Чаще всего, это занимает около суток.

Простой ПЦР-тест на основе крови может предсказать прогрессирование туберкулеза

Главная »Темы» Респираторные

Согласно новым результатам, опубликованным в Американском журнале респираторной и интенсивной терапии , простой тест на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) может предсказать риск инфицирования и прогрессирование до активного туберкулеза (ТБ). 1

У большинства людей, инфицированных Mycobacterium tuberculosis , болезнь не прогрессирует в течение жизни, но даже в этом случае ежегодно диагностируется более 10 миллионов случаев туберкулеза. 2 Лица, находящиеся в непосредственном контакте с больными туберкулезом, являются важной целевой группой для профилактических мер, поскольку они подвергаются высокому риску как инфицирования, так и развития активной болезни.

В этом исследовании авторы исследовали свою гипотезу о том, что сигнатуры экспрессии генов могут предсказывать случаи туберкулеза у недавних домашних контактов людей с активной формой туберкулеза. Когорта включала 4466 ВИЧ-отрицательных здоровых семейных контактов с 1098 индексными случаями ТБ, которые были включены в период с 2006 по 2010 год в исследование Grand Challenges 6-74, которое проводилось в 4 африканских странах.


Продолжить чтение

Была разработана сигнатура риска на основе многоузловой ПЦР (RISK4), которая была подтверждена слепым прогнозом прогрессирования ТБ в тестовых наборах из Южной Африки, Гамбии и Эфиопии. Сигнатура RISK4 предсказывала прогрессирование во всем комбинированном наборе тестов (площадь под кривой = 0,67 [0,57-0,77], P = 2,6X10 -4 ) и для каждого отдельного сайта. Затем надежность RISK4 оценивалась с помощью слепых прогнозов, выполненных на образцах из внешней когорты лиц, для которых время заражения туберкулезом было неизвестно. RISK4 также значительно предсказал риск прогрессирования ТБ в этой популяции (площадь под кривой = 0,69 [0,62-0,76], P = 3,4X10 -7 ).

Этот тип теста «потенциально может быть разработан в качестве скринингового теста на риск прогрессирования во время расследования контактов с ТБ, проводимого национальными структурами общественного здравоохранения», — пишут авторы.

Ссылки

  1. Suliman S, Thompson E, Sutherland J, et al; Когортные исследовательские группы GC6-74 и ACS.Панафриканская кровяная сигнатура с четырьмя генами предсказывает прогрессирование туберкулеза [опубликовано в Интернете 6 апреля 2018 г.]. Am J Respir Crit Care Med . DOI: 10.1164 / rccm.201711-2340OC
  2. Всемирная организация здравоохранения. Global Tuberculosis Report 2017. Опубликован в 2017 г. По состоянию на 14 мая 2018 г.

Темы:

Диагностическое тестирование Общая пульмонология Туберкулез

Хотите узнать больше?

Пожалуйста, войдите или зарегистрируйтесь для просмотра этого содержания.

Авторизоваться регистр

Открыть Следующее сообщение в респираторном Закрывать

TB PCR Test — About, Normal range, Preparation, Test Results & More

Клиническое определение tb-pcr

TB-PCR — один из тестов, который помогает диагностировать и подтверждать туберкулезную инфекцию. Туберкулез — это заболевание, вызываемое бактериями Mycobacterium tuberculosis, которые обычно поражают легкие, но могут поражать и другие части тела.Это может вызвать туберкулез легких и другие инфекции, например кожные и брюшные. Он передается через воздух, когда больные кашляют, чихают или плюются.

Другими широко используемыми тестами, используемыми для диагностики и скрининга туберкулезной инфекции, являются:

КУБ, исследование мазка Культура, Mycobacterium Tuberculosis Панель антител к Mycobacterium (TB-IgG, IgM, IgA) Quantiferon TB Test Goldmantoux

зачем проходить тестирование?

Тест TB-PCR заказан для диагностики и обнаружения M. Туберкулез от других микобактерий. Это также помогает контролировать лечение туберкулеза.

причина пройти тест tb-pcr

Наблюдаемые и проверенные симптомы включают:

  • Необъяснимая потеря веса
  • Усталость
  • Лихорадка
  • Ночные поты
  • Озноб
  • Потеря аппетита
  • Продолжительный и стойкий кашель
  • Кровь в мокроте
  • Болезненное дыхание
  • Болезненный кашель

При серьезном распространении туберкулеза в легкие проявляются следующие симптомы:

  • Боль в груди
  • Кашель с кровью
  • Продолжительный кашель более трех недель

Подготовка к тесту tb-pcr

Подготовительные инструкции перед тестом *:

  • Пост не требуется.
  • Никаких других специальных приготовлений не требуется.

требуется образец?

Тип образца: Сыворотка (образец крови)

Процедура забора образца: венепункция (взятие крови из вены, обычно из руки)

Понимание результатов TB-PCR

Отрицательный (IgG) Нет инфекции

‘* A Референсный диапазон представляет собой набор ценностей, который помогает медицинскому работнику интерпретировать результаты медицинского обследования. Это может варьироваться в зависимости от возраста, пола и других факторов. Референсные диапазоны также могут различаться в разных лабораториях по величине и единицам измерения в зависимости от используемых инструментов и метода установления референсных диапазонов.

ПЦР может быть методом выбора для идентификации как легочного, так и внелегочного туберкулеза | BMC Research Notes

  • 1.

    Всемирная организация здравоохранения: ОТЧЕТ ВОЗ 2007. Глобальный контроль над туберкулезом. Надзор, планирование, финансирование. 2007 г., ВОЗ, Женева

    Google Scholar

  • 2.

    Всемирная организация здравоохранения: отчет ВОЗ об эпидемии туберкулеза. 1997, Женева

    Google Scholar

  • 3.

    Саид В., Ахмед Дж., Насим А., Эндоронхиальный туберкулез: клинические и диагностические аспекты. Pak Armed Forces Med J. 2002, 52: 154-8.

    Google Scholar

  • 4.

    Батт Т., Карамат К.А., Ахмад Р.Н., Махмуд А.: Достижения в диагностике туберкулеза. Pak J Pathol. 2001, 12 (1): 1-3.

    Google Scholar

  • 5.

    Риккардо Манганелли, Эжени Дубнау, Санджай Тьяги, Фред Рассел Крамер, Иссар Смит: Дифференциальная экспрессия генов фактора 10 сигма в Mycobacterium tuberculosis. Молекулярная микробиология. 1999, 31 (2): 715-724. 10.1046 / j.1365-2958.1999.01212.x.

    Артикул Google Scholar

  • 6.

    Soini H, Musser JM: Молекулярная диагностика микобактерий.Clin Chem. 2001, 47: 809-14.

    PubMed CAS Google Scholar

  • 7.

    Styrt BA, Shinnick TM, Ridderhof JC, Crawford JT, Tenover FC: сроки обработки микобактериальных культур. J Clin Microbiol. 1997, 35: 1041-1042.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • 8.

    Hale YM, Pfyffer GE, Salfinger M: Лабораторная диагностика микобактериальных инфекций: новые инструменты и извлеченные уроки.Clin Infect Dis. 2001, 33: 834-846. 10.1086 / 322607.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Sarmiento OL, Weigle KA, Alexander J, Weber DJ, Miller WC: Оценка с помощью метаанализа ПЦР для диагностики туберкулеза легких с отрицательным мазком мокроты. J Clin Microbiol. 2003, 41: 3233-3240. 10.1128 / JCM.41.7.3233-3240.2003.

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 10.

    Massoud Hajia, Rana Amini Mohammad Rahbar: Надежен ли анализ ПЦР для диагностики внелегочного туберкулеза ?. Африканский журнал исследований микробиологии. 2009, 3 (12): 877-881.

    Google Scholar

  • 11.

    Шах Санджай, Миллер Альберт, Мастеллоне Энтони, Ким Кьюнгми, Коланинно Питер, Хохштейн Лиза, Д’Амато Ричард, AMPLICOR: Биопсия и образцы жидкостей организма от AMPLICOR. Грудь. 1998, 113: 1190-1194. 10.1378 / сундук.113.5.1190.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 12.

    Eisenach KD, Cave MD, Bates JH, Crawford JT: амплификация повторяющейся последовательности ДНК с помощью полимеразной цепной реакции, специфичной для Mycobacterium tuberculosis. J Infect Dis. 1990, 161: 977-981. 10.1093 / infdis / 161.5.977.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 13.

    Квок С., Хигучи Р. Как избежать ложноположительных результатов с помощью ПЦР.Природа (Лондон). 1989, 339: 237-238. 10.1038 / 339237a0.

    CAS Статья Google Scholar

  • 14.

    Coninx R: Туберкулез в сложных чрезвычайных ситуациях. Bull World Health Organ. 2007, 85: 637-40. 10.2471 / BLT.06.037630.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 15.

    Хасан Р., Джабин К., Мехрадж В., Зафар Ф., Малик Ф., Хассан К. и др.: Тенденции в отношении устойчивости Mycobacterium tuberculosis , Пакистан, 1990-2007 гг.Int J Infect Dis. 2009, 13: e377-82. 10.1016 / j.ijid.2009.01.008.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 16.

    Фарния П.Ф., Мохаммади З., Зарифи Д.Дж., Табатаби Дж., Ганави К., Газисаиди П.К., Фарния М., Гейди М., Бахадори М.Р., Велаяти А.А.: Повышение чувствительности прямой микроскопии для обнаружения кислотоустойчивых бацилл в мокроте : использование хитина при переваривании слизи. J Clin Microbiol. 2002, 40: 508-511. 10.1128 / JCM.40.2.508-511.2002.

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 17.

    Сельвакумар Н., Рахман Ф., Гарг Р., Раджасекаран С., Мохан Н.С., Тьягараджан К., Сундарам В., Санта Т., Фриден Т.Р., Нараянан ПР: Оценка метода микроскопии седиментационного мазка сульфата аммония фенола для диагностики туберкулеза легких. J Clin Microbiol. 2002, 40: 3017-3020. 10.1128 / JCM.40.8.3017-3020.2002.

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 18.

    Thornton CG, MacLellan KM, Brink TL, Lockwood DE, Romagnoli M, Turner J, Merz WG, Schwalbe RS, Moody M, Lue Y, Passen S: новый метод обработки респираторных образцов для обнаружения микобактерий с использованием C 18 -карбоксипропилбетаина: слепое исследование.J Clin Microbiol. 1998, 36: 1996-2003.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • 19.

    Eisenach KD, Cave MD, Bates JH, Crawford JT: амплификация повторяющейся последовательности ДНК с помощью полимеразной цепной реакции, специфичной для Mycobacterium tuberculosis . J Infect Dis. 1990, 161: 977-981. 10.1093 / infdis / 161.5.977.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 20.

    Telenti A, Marchesi F, Balz M, Bally F, Bottger EC, Bodmer T: Быстрая идентификация микобактерий на уровне видов с помощью полимеразной цепной реакции и анализа рестрикционных ферментов. J Clin Microbiol. 1993, 31: 175-178.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Перера Дж., Чандрасекхаран Н.В., Карунанаяке Э.Х .: Обнаружение Mycobacterium tuberculosis на основе ПЦР : эффект подготовки образца.Юго-Восточная Азия J Trop Med. 1994, Общественное здравоохранение, 25: 693-697.

    Google Scholar

  • 22.

    Сингх К.К., Муралидхар М., Кумар А., Чаттопадхьяя Т.К., Капила К., Сингх М.К., Шарма С.К., Джайн Н.К., Тьяги Дж.С.: Сравнение собственной полимеразной цепной реакции с традиционными методами для обнаружения Mycobacterium tuberculosis ДНК при гранулематозной лимфаденопатии. J Clin Pathol. 2000, 53: 355-361. 10.1136 / jcp.53.5.355.

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 23.

    Greco S, Rulli M, Girardi E, Piersimoni C, Saltini C: Диагностическая точность внутренней ПЦР для легочного туберкулеза у пациентов с положительным мазком мазка: мета-анализ и метарегрессия. J Clin Microbiol, март 2009 г., 47: 569-576.

    CAS Статья Google Scholar

  • 24.

    Джабин К., Шакур С., Чишти С., Аяз А., Хасан Р.: Устойчивый к фторхинолонам Mycobacterium tuberculosis , Пакистан, 2005-2009 [письмо]. Emerg Infect Dis [сериал в Интернете].2011 г., [дата цитирования], [http://www.cdc.gov/EID/content/17/3/564.htm]

    Google Scholar

  • Диагностическая точность собственного ПЦР-анализа в реальном времени на Mycobacterium tuberculosis: систематический обзор и метаанализ | BMC Infectious Diseases

  • 1.

    Организация WH: Global tuberculosis report 2016.pdf. 2016.

    Google Scholar

  • 2.

    Tiwari RP, Hattikudur NS, Bharmal RN, Kartikeyan S, Deshmukh NM, Bisen PS. Современные подходы к быстрой диагностике туберкулеза: перспективы и вызовы впереди. Туберкулез (Edinb). 2007. 87 (3): 193–201.

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Шагас М., Сильва Р.М., Баззо М.Л., Сантос Джи. Использование полимеразной цепной реакции для ранней диагностики туберкулеза в культуре микобактерий туберкулеза. Braz J Med Biol Res. 2010. 43 (6): 543–8.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 4.

    Шину П., Наир А., Сингх В., Кумар С., Бареджа Р. Оценка быстрых методов обнаружения микобактерий в мокроте со скудными бациллами или клинически очевидных, отрицательных по мазку случаев туберкулеза легких и внелегочного туберкулеза. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2011; 106 (5): 620–4.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 5.

    Хелб Д., Джонс М., Стори Е., Беме С., Уоллес Е., Хо К., Коп Дж., Оуэнс М.Р. , Роджерс Р., Банада П. и др. Быстрое обнаружение микобактерий туберкулеза и устойчивости к рифампицину с использованием технологии по требованию, близкой к пациенту.J Clin Microbiol. 2010. 48 (1): 229–37.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 6.

    Стандарты диагностики и классификация туберкулеза у взрослых и детей. Это официальное заявление Американского торакального общества и Центров по контролю и профилактике заболеваний было принято Советом директоров ATS в июле 1999 года. Это заявление было одобрено Советом Общества инфекционных болезней Америки в сентябре 1999 года.Am J Respir Crit Care Med. 2000. 161 (4 Pt 1): 1376–95. https://doi.org/10.1164/ajrccm.161.4.16141.

  • 7.

    Хорита Н., Ямамото М., Сато Т., Цукахара Т., Нагакура Х., Таширо К., Шибата И., Ватанабе Х., Нагаи К., Накашима К. и др. Чувствительность и специфичность полимеразной цепной реакции в реальном времени Cobas TaqMan MTB для микобактерий туберкулеза, подтвержденных культурой: метаанализ 26999 образцов из 17 исследований. Научный доклад 2015; 5: 18113.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 8.

    Morales-Lopez SE, Yepes JA, Anzola I, Aponte H, Llerena-Polo CR. Парадоксальные результаты двух автоматических ПЦР в реальном времени в диагностике туберкулеза плевры. Int J Infect Dis. 2017; 54: 36–8.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 9.

    Park KS, Kim JY, Lee JW, Hwang YY, Jeon K, Koh WJ, Ki CS, Lee NY. Сравнение анализов Xpert MTB / RIF и Cobas TaqMan MTB для выявления микобактерий туберкулеза в образцах из дыхательных путей.J Clin Microbiol. 2013. 51 (10): 3225–7.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 10.

    Барлетта Ф., Ванделаннуте К., Коллантес Дж., Эванс К.А., Аревало Дж., Ригоутс Л. Стандартизация ПЦР в реальном времени на основе TaqMan для обнаружения комплекса микобактерий туберкулеза в мокроте человека. Am J Trop Med Hyg. 2014. 91 (4): 709–14.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 11.

    Kox LF, van Leeuwen J, Knijper S, Jansen HM, Kolk AH. ПЦР-анализ на основе ДНК, кодирующей 16S рРНК, для обнаружения и идентификации микобактерий в клинических образцах. J Clin Microbiol. 1995. 33 (12): 3225–33.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 12.

    Ли Б.В., Тан Дж. А., Вонг СК, Тан СВ, Яп, Гонконг, Низкий ПС, Чиа Дж. Н., Тай Дж. С.. Амплификация ДНК с помощью полимеразной цепной реакции для быстрой диагностики туберкулезного менингита.Сравнение протоколов, включающих три последовательности ДНК микобактерий, IS6110, антиген 65 кДа и MPB64. J Neurol Sci. 1994. 123 (1–2): 173–9.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 13.

    Thierry D, Brisson-Noel A, Vincent-Levy-Frebault V, Nguyen S, Guesdon JL, Gicquel B. Характеристика вставленной последовательности микобактерий туберкулеза, IS6110, и ее применение в диагностике. J Clin Microbiol. 1990. 28 (12): 2668–73.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 14.

    Пай М., Флорес Л.Л., Хаббард А., Райли Л.В., Колфорд Дж. М. мл. Тесты амплификации нуклеиновых кислот в диагностике туберкулезного плеврита: систематический обзор и метаанализ. BMC Infect Dis. 2004; 4: 6.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 15.

    Сармьенто О.Л., Вейгле К.А., Александр Дж., Вебер Д.Д., Миллер В.Оценка с помощью метаанализа ПЦР для диагностики туберкулеза легких с отрицательным мазком мокроты. J Clin Microbiol. 2003. 41 (7): 3233–40.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 16.

    Пай М., Флорес Л.Л., Пай Н., Хаббард А., Райли Л.В., Колфорд Дж. М. мл. Диагностическая точность тестов амплификации нуклеиновых кислот при туберкулезном менингите: систематический обзор и метаанализ. Lancet Infect Dis. 2003. 3 (10): 633–43.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 17.

    Миллер Н., Клири Т., Краус Дж., Янг А.К., Спруилл Дж., Гнатышин Х.Дж. Быстрое и специфическое обнаружение микобактерий туберкулеза в респираторных образцах с положительным мазком на кислотоустойчивые бациллы и культуральных флаконах BacT / ALERT MP с использованием флуорогенных зондов и ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol. 2002. 40 (11): 4143–7.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 18.

    Эспи MJ, Uhl JR, Sloan LM, Buckwalter SP, Jones MF, Vetter EA, Yao JD, Wengenack NL, Rosenblatt JE, Cockerill FR 3rd, et al. ПЦР в реальном времени в клинической микробиологии: приложения для рутинных лабораторных исследований. Clin Microbiol Rev.2006; 19 (1): 165–256.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 19.

    Palomino JC. Нетрадиционные и новые методы диагностики туберкулеза: возможность и применимость в данной области.Eur Respir J. 2005; 26 (2): 339–50.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 20.

    Аггарвал М., Аггарвал К.С., Наир Д. Продвинулись ли мы в диагностике нейротуберкулеза? Место проведения ПЦР в реальном времени. J Pediatr Infect Dis. 2012; 07 (04): 139–43.

    Артикул Google Scholar

  • 21.

    Альбукерке Ю.М., Лима А.Л., Линс А.К., Магалхаес М., Магалхаес В. Количественная ПЦР в реальном времени (q-ПЦР) для диагностики туберкулеза легких по мазку мокроты у людей с ВИЧ / СПИДом.Rev Inst Med Trop Сан-Паулу. 2014. 56 (2): 139–42.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 22.

    Chaidir L, Ganiem AR, Vander Zanden A, Muhsinin S, Kusumaningrum T., Kusumadewi I., van der Ven A, Alisjahbana B, Parwati I., van Crevel R. Сравнение IS6110-PCR в реальном времени, микроскопия, и посев для диагностики туберкулезного менингита в когорте взрослых пациентов в Индонезии. PLoS One. 2012; 7 (12): e52001.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 23.

    Дарбан-Сарохалил Д., Имани Фулади А.А., Малекнежад П., Бамери З., Афлаки М., Номанпур Б., Яслианифард С., Модарреси М.Х., Фейзабади М.М. Сравнение микроскопии мазка, посева и ПЦР в реальном времени для количественного выявления микобактерий туберкулеза в клинических респираторных образцах. Scand J Infect Dis. 2013. 45 (4): 250–5.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 24.

    Галло Дж. Ф., Пинхата Дж. М., Чимара Е., Гонсалвес М. Г., Фукасава Л. О., Оливейра Р.С.Проведение собственной полимеразной цепной реакции в реальном времени для идентификации изолятов микобактерий туберкулеза при рутинной лабораторной диагностике в условиях высокой нагрузки. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2016; 111 (9): 545–50.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 25.

    Inoue M, Tang WY, Wee SY, Barkham T. Проверяйте и улучшайте! Оценка анализа ПЦР на основе зонда в реальном времени с внутренним контролем для прямого обнаружения комплекса микобактерий туберкулеза.Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2011; 30 (1): 131–5.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 26.

    Lee HS, Park KU, Park JO, Chang HE, Song J, Choe G. Быстрое, чувствительное и специфическое обнаружение комплекса микобактерий туберкулеза с помощью ПЦР в реальном времени на парафиновых тканях человека. J Mol Diagn. 2011; 13 (4): 390–4.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 27.

    Lira LA, Santos FC, Carvalho MS, Montenegro RA, Lima JF, Schindler HC, Черногория LM. Оценка анализа IS6110-Taqman ПЦР в реальном времени для обнаружения микобактерий туберкулеза в образцах мокроты пациентов с легочным туберкулезом. J Appl Microbiol. 2013. 114 (4): 1103–8.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 28.

    Lyra JM, Maruza M, Verza M, Carneiro MM, Albuquerque Mde F, Rossetti ML, Ximenes R, Braga MC, Lucena-Silva N.Оценка четырех молекулярных методов диагностики туберкулеза в образцах легких и крови пациентов с ослабленным иммунитетом. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2014. 109 (6): 805–13.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 29.

    Миллер М.Б., Попович Э.Б., Баклунд М.Г., Агер Э.П. Проведение анализа Xpert MTB / RIF RUO и ПЦР в реальном времени IS6110 для выявления микобактерий туберкулеза в клинических образцах. J Clin Microbiol.2011. 49 (10): 3458–62.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 30.

    Рао П., Чавла К., Шеной В.П., Мухопадхьяй С. Роль ПЦР в реальном времени для выявления туберкулеза и лекарственной устойчивости непосредственно из клинических образцов. Индийский J Tuberc. 2016; 63 (3): 149–53.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 31.

    Rozales FP, Machado AB, De Paris F, Zavascki AP, Barth AL.ПЦР для выявления микобактерий туберкулеза в образцах дыхательных путей: оценка клинических данных. Epidemiol Infect. 2014. 142 (7): 1517–23.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 32.

    Санджуан-Хименес Р., Торо-Пейнадо И., Бермудес П., Колменеро Дж. Д., Мората П. Сравнительное исследование анализа ПЦР в реальном времени, нацеленного на senX3-regX3, по сравнению с другими молекулярными стратегиями, обычно используемыми в диагностике туберкулеза. PLoS One. 2015; 10 (11): e0143025.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 33.

    Moher D, Liberati A, Tetzlaff J, Altman DG. Предпочтительные элементы отчетности для систематических обзоров и метаанализов: заявление PRISMA. Int J Surg. 2010. 8 (5): 336–41.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 34.

    Whiting PF, Rutjes AW, Westwood ME, Mallett S, Deeks JJ, Reitsma JB, Leeflang MM, Sterne JA, Bossuyt PM.QUADAS-2: обновленный инструмент для оценки качества исследований диагностической точности. Ann Intern Med. 2011. 155 (8): 529–36.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 35.

    Zamora J, Abraira V, Muriel A, Khan K, Coomarasamy A. Meta-DiSc: программное обеспечение для мета-анализа данных о точности испытаний. BMC Med Res Methodol. 2006; 6:31.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 36.

    Литтенберг Б., Моисей Л.Е. Оценка точности диагностики из нескольких противоречивых отчетов: новый метааналитический метод. Принятие решений в медицине. 1993. 13 (4): 313–21.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 37.

    Дикс Дж. Дж. Систематические обзоры в здравоохранении: систематические обзоры оценок диагностических и скрининговых тестов. BMJ. 2001. 323 (7305): 157–62.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 38.

    Ирвиг Л., Макаскилл П., Гласзиу П., Фэйи М. Метааналитические методы для проверки точности диагностических тестов. J Clin Epidemiol. 1995; 48 (1): 119–30 обсуждение 131–112.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 39.

    Lijmer JG, Bossuyt PM, Heisterkamp SH. Изучение источников неоднородности в систематических обзорах диагностических тестов. Stat Med. 2002. 21 (11): 1525–37.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 40.

    Сонг Ф, Хан К.С., Диннес Дж., Саттон А.Дж. Асимметричные графики воронки и систематическая ошибка публикации в метаанализе диагностической точности. Int J Epidemiol. 2002. 31 (1): 88–95.

    PubMed Статья Google Scholar

  • 41.

    Флорес Л.Л., Пай М., Колфорд Дж. М. мл., Райли Л. В.. Внутренние тесты амплификации нуклеиновых кислот для выявления микобактерий туберкулеза в образцах мокроты: метаанализ и мета-регрессия. BMC Microbiol. 2005; 5: 55.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 42.

    Penz E, Boffa J, Roberts DJ, Fisher D, Cooper R, Ronksley PE, James MT. Диагностическая точность теста Xpert (R) MTB / RIF для внелегочного туберкулеза: метаанализ. Int J Tuberc Lung Dis. 2015; 19 (3): 278–84 i-iii.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 43.

    Коджагоз Т., Йилмаз Э., Озкара С., Коджагоз С., Хайран М., Сачедева М., Чемберс Х.Ф.Обнаружение микобактерий туберкулеза в образцах мокроты методом полимеразной цепной реакции с использованием упрощенной процедуры. J Clin Microbiol. 1993. 31 (6): 1435–8.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 44.

    Nolte FS, Metchock B, McGowan JE Jr, Edwards A, Okwumabua O, Thurmond C, Mitchell PS, Plikaytis B, Shinnick T. Прямое обнаружение микобактерий туберкулеза в мокроте с помощью полимеразной цепной реакции и гибридизации ДНК.J Clin Microbiol. 1993. 31 (7): 1777–82.

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 45.

    Noordhoek GT, Kaan JA, Mulder S, Wilke H, Kolk AH. Регулярное применение полимеразной цепной реакции для обнаружения микобактерий туберкулеза в клинических образцах. J Clin Pathol. 1995. 48 (9): 810–4.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 46.

    Knottnerus JA, van Weel C, Muris JW. Оценка диагностических процедур. BMJ. 2002. 324 (7335): 477–80.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 47.

    Negi SS, Anand R, Pasha ST, Gupta S, Basir SF, Khare S, Lal S. Диагностический потенциал полимеразной цепной реакции на основе последовательностей IS6110, 38 кДа, 65 кДа и 85B в диагностике микобактерий туберкулеза в клинические образцы. Индийский J Med Microbiol. 2007; 25 (1): 43.

    CAS PubMed Статья Google Scholar

  • 48.

    van Embden JD, Cave MD, Crawford JT, Dale JW, Eisenach KD, Gicquel B, Hermans P, Martin C, McAdam R, Shinnick TM, et al. Идентификация штаммов микобактерий туберкулеза по отпечаткам ДНК: рекомендации по стандартизированной методологии. J Clin Microbiol. 1993. 31 (2): 406–9.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 49.

    Cockerill FR 3-й. Применение быстрой полимеразной цепной реакции в реальном времени для диагностических исследований в лаборатории клинической микробиологии. Arch Pathol Lab Med. 2003. 127 (9): 1112–20.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 50.

    Линг Д.И., Флорес Л.Л., Райли Л.В., Пай М. Коммерческие тесты амплификации нуклеиновых кислот для диагностики туберкулеза легких в респираторных образцах: метаанализ и мета-регрессия. PLoS One.2008; 3 (2): e1536.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 51.

    Организация ВОЗ. Диагностический тест на туберкулез Xpert MTB / RIF. Женева: ВОЗ; 2014.

  • 52.

    Детжен А.К., ДиНардо А.Р., Лейден Дж., Стейнгарт К.Р., Мензис Д., Шиллер И., Дендукури Н., Мандалакас А.М. Анализ Xpert MTB / RIF для диагностики туберкулеза легких у детей: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Респир Мед.2015; 3 (6): 451–61.

    PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 53.

    Yu L, Xu Y, Wang F, Yang C, Liu G, Song X. Функциональные роли рецепторов распознавания образов, которые распознают вирусные нуклеиновые кислоты в мезенхимальных стволовых клетках человека, полученных из жировой ткани. Biomed Res Int. 2016; 2016: 9872138.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 54.

    Нагаи К., Хорита Н., Ямамото М., Цукахара Т., Нагакура Х., Таширо К., Шибата И., Ватанабе Х., Накашима К., Ушио Р. и др.Точность диагностического теста петлевой изотермической амплификации для микобактерий туберкулеза: систематический обзор и метаанализ. Научный отчет 2016; 6: 39090.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • (PDF) Полимеразная цепная реакция на основе периферической крови в диагностике туберкулеза легких

    J Ayub Med Coll Abbottabad 2006; 18 (2)

    ВЫВОДЫ

    Анализы

    , основанные на стандарте IS6110, не позволяют отличить

    Mycobacterium

    от Mycobacterium tuberculosis.

    bovis.Вероятность переходящего загрязнения составляет минимум

    , потому что мы повторно тестировали положительные образцы, и

    обычно включали положительные и отрицательные контроли.

    Отдельные помещения были выделены для процесса выделения ДНК

    , амплификации и электрофореза, чтобы исключить

    проблемы контаминации.

    Из-за низкой чувствительности; отрицательный результат ПЦР в крови

    не исключает туберкулеза легких. Однако этот тест

    может быть полезен в случаях, когда образцы из очага инфекции

    недоступны.

    ССЫЛКИ

    1. Soini H, Musser JM. Молекулярная диагностика микобактерий.

    Clin Chem 2001; 47: 809-14.

    При одновременном рассмотрении как положительных, так и

    отрицательных случаев мазка по мазку ПЦР правильно идентифицировал

    12 из 60 положительных случаев посева. Он также идентифицировал 2

    случаев с отрицательным посевом как положительный. Сорок восемь пациентов

    с отрицательными результатами ПЦР имели положительные посевы мокроты

    на Mycobaterium tuberculosis, мы посчитали их

    ложноотрицательными.Высокий ложноотрицательный результат может быть

    из-за низкого уровня инфекции или ранних стадий заболевания.

    Также возможно, что некоторые из этих пациентов могут быть

    , инфицированными штаммами Mycobaterium tuberculosis, которые

    не содержат инсерционной последовательности IS6110. Такие штаммы

    необычны, но существуют.

    18

    Кроме того, M.

    tuberculosis находится в макрофагах в крови. Мы

    провели ПЦР с использованием цельной крови.Концентрация

    лейкоцитов с использованием лейкоцитов в качестве образца

    вместо цельной крови увеличивает выход такой

    ПЦР.

    2. Хан М.А. ТБ: необходимо активизировать программу контроля в

    Пакистане. Дж. Колл Врачи Сург Пак 1996; 6: 3.

    3. Mazhar AU, Sarwar MSA, Mateen A. Исследование теста на туберкулин

    после вакцинации БЦЖ у детей. J Coll Physician Surg

    Pak 1995; 5: 64-6.

    4.Всемирная организация здравоохранения, отчет ВОЗ об эпидемии туберкулеза

    , Женева: Всемирная организация здравоохранения, 1997.

    5. Саид В., Ахмед Дж., Насим А. Эндоронхиальный туберкулез: клинические и

    диагностические аспекты. Pak Armed Forces Med J 2002; 52: 154-8.

    6. Батт Т., Карамат К.А., Ахмад Р.Н., Махмуд А. Успехи в диагностике туберкулеза

    . Pak J Pathol 2001; 12 (1): 1-3.

    7. Pfyffer GE. Амплификация нуклеиновых кислот для диагностики микобатериалов

    .J Infect Dis 1999; 39: 21-6.

    8. Grange JM. Микобатериум. В: Greenwood D, Slack RCB,

    Peutherer F, редакторы. Медицинская микробиология. Справочник по

    микробиологическим инфекциям: патогенез, иммунитет, лабораторная диагностика и контроль

    . 16-е изд. Эдинбург: Черчил

    Ливингстон, 2002: 200-13.

    9. Ахмед Н., Моханти А.К., Мухопадхай У., Батиш В.К.,

    Гровер С. Быстрое обнаружение туберкулеза Mycobaterium

    в крови на основе ПЦР у иммунокомпетентных пациентов с

    туберкулезом легких.J Clin Microbiol 1998; 36: 3094-5.

    Положительные и отрицательные прогностические значения

    меняются в зависимости от распространенности заболевания в данном сообществе

    . При очень низкой распространенности туберкулеза

    в популяции тест обеспечит хорошую отрицательную прогностическую ценность

    для исключения болезни

    , в то время как положительный результат будет менее полезным. В контрасте

    , если он используется в условиях высокой распространенности, высокие прогностические значения

    положительных результатов теста могут сделать положительный результат теста

    полезным для усиления клинического подозрения

    , но отрицательный результат будет менее полезен.

    Это верно и для нашего исследования; положительная прогностическая ценность

    85,71% делает этот тест очень полезным

    в условиях высокой распространенности.

    10. Роберт Г.Д., Конеман Е.В., Ким Ю.К. Микобактерии. In:

    Balows A, Hausler Jr. WJ, Herrmann Kl, Isenburg HD,

    Shadomy HJ, редакторы. Руководство по клинической микробиологии. 5-е изд.

    Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии, 1991:

    304-39.

    11. Беннедсен Дж., Томсен В.О., Пфиффер Г.Е., Функе Г., Фельдманн

    К, Бенеке А. и др.Применение ПЦР в диагностике легочного туберкулеза

    . J Clin Microbial 1996; 34: 1407-11.

    12. Siddiqi SH. Система BACTEC TB. Продукт и процедура

    руководство. Редакция B. Becton Dickinson Diagnostic Instruments

    Systems, Тоусон, штат Мэриленд, США. 1989.

    13. Siddiqi SH. Тест BACTEC NAP. В: Изенбург HD, редактор.

    Справочник по клиническим микробиологическим процедурам. Том 1.

    Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологов, 1992:

    3.13.1-3.13.4.

    Значительное число (34/96) подозреваемых

    случаев оказались отрицательными как при посеве, так и при анализе

    ПЦР, несмотря на установленные нами строгие критерии клинического подозрения

    .

    могло быть ответственным за это по двум причинам. Во-первых, большой процент населения (

    ) является туберкулин-положительным из-за

    латентной инфекции ТБ. Другая возможность может заключаться в том, что

    очевидных радиологических находок были прошлыми, излечили

    туберкулеза, а люди на самом деле не были

    больными туберкулезом.Наконец, нельзя было рассматривать возможность применения

    противомикробных препаратов, потому что такие

    пациентов уже были исключены из исследования.

    14. Батт Т., Ахмад Р.Н., Казми С.Ю., Афзал Р.К., Махмуд А. Дата до

    по диагностике туберкулеза. J Coll Physician Surg

    Pak 2003; 13: 728-34.

    15. Беннедсен Дж., Томсен В.О., Пфиффер Г.Е., Функе Г., Фельдманн

    К, Бенеке А. и др. Применение ПЦР в диагностике легочного туберкулеза

    .J Clin Microbial 1996; 34: 1407-11.

    16. Поттумарти С., Уэллс В.К., Моррис А.Дж.. Сравнение семи тестов

    для серологической диагностики туберкулеза. J Clin Microbiol

    2000; 38: 2227-31.

    17. Condos R, mcClune A, Room WN, Schluger NW. Периферический —

    ПЦР-анализ крови для выявления пациентов с активным туберкулезом легких

    . Lancet 1996; 347: 1082-5.

    18. Малик Н., Карамат К.А., Батт Т., Аббаси С., Усман Дж. Распространенность

    и характер лекарственной чувствительности типичных и атипичных микобактерий

    в Равалпинди / Исламабад.Пак Дж. Патол 1998; 9:

    4-8

    _____________________________________________________________________________________________

    Адрес для корреспонденции:

    Д-р Мумтаз Ахмад Хан, Отдел микробиологии, AFIP, Равалпинди, 051-57, факс: 051 9271247

    Электронная почта: mena.na. , [email protected]

    28

    Научные публикации в Интернете

    Фон

    По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более 2 миллиардов человек во всем мире инфицированы Mycobacterium Tuberculosis (MTB) (1).В то время как MTB продолжает оставаться основной причиной заболеваемости и смертности в развивающихся странах, наблюдается возрождение даже в развитых странах, где его успешно сдерживают (2). Ситуация усугубляется появлением МЛУ и ШЛУ-ТБ (3,4). С приходом пандемии ВИЧ / СПИДа и, как следствие, подавления иммунитета, коинфекция ТБ / ВИЧ теперь признана смертельной комбинацией (5). Такая коинфекция встречается по крайней мере у 60-70% ВИЧ-инфицированных людей в течение их жизни, что приводит к быстрому прогрессированию ВИЧ-инфекции и их смерти (1, 5).

    Существующие диагностические тесты на MTB в развивающихся странах, такие как микроскопия с недостаточной чувствительностью, LJ-культура, требующая 6-8 недель для получения результата, или анализ Bactec 460, который занимает 10-14 дней, не очень полезны. Следовательно, авторы считают, что существует необходимость в надежном диагностическом тесте, который можно проводить на легкодоступных образцах, таких как периферическая кровь, для периодического скрининга ВИЧ-инфицированных людей на MTB на ранней стадии инфекции (6, 7). Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — более чувствительный, специфический и быстрый метод обнаружения MTB в клинических образцах (8, 9).Ранняя диагностика сочетанной инфекции ТБ поможет снизить заболеваемость, смертность и дальнейшее иммунологическое повреждение у ВИЧ-инфицированных.

    Пациенты и методы

    ПЦР, направленная на вставку последовательности (IS) 6110, успешно использовалась для обнаружения Mycobacterium tuberculosis (MTB) в спинномозговой жидкости в Индии (10). Авторы разработали исследование для оценки диагностической ценности ПЦР, нацеленной на IS 1081, в периферической крови ВИЧ-инфицированных людей.В более раннем исследовании, проведенном в Индии, сообщалось, что IS 1081 преобладает у> 80% исследуемой группы (7). В исследовании использовалась периферическая кровь из-за простоты получения периодических проб. В период с февраля 2006 г. по январь 2008 г. для этой цели была набрана когорта из 129 человек (Таблица I). В нем содержались взрослые, небеременные ВИЧ-положительные, а также серо-отрицательные ВИЧ-инфицированные, которые не принимали анти-Коховское лечение (AKT) и посещали Медицинский колледж MGM Департамента инфекционных заболеваний (DID), Нави Мумбаи и К.Дж. Сомайя. Медицинский колледж, Мумбаи.Все ВИЧ-положительные пациенты были проверены на количество CD4 с помощью проточного цитометра в момент набора (Guava technologies, США).

    Пять миллилитров периферической крови были собраны у участников исследования в вакуумеры с ЭДТА (Becton Dickinson, США) после получения индивидуального информированного письменного согласия. Скосы среды LJ (лаборатория Hi-Media, Мумбаи) инокулировали 0,2 мл осадка из изолирующих пробирок для лизиса, засевали на скошенные участки LJ (11). Оставшийся образец обрабатывали для ПЦР следующим образом: лейкоциты осаждали после лизиса эритроцитов с использованием охлажденного гипотонического буфера для лизиса эритроцитов.Затем их ресуспендировали в 3 мл буфера для лизиса эритроцитов. После этого проводили лизис 20% SDS и расщепление протеиназой K (20 мг / мл) при 37 ° C в течение ночи. ДНК экстрагировали методом экстракции фенол: хлороформ. ДНК осаждали после добавления 2 объемов охлажденного этанола. Далее ДНК трижды промывали 70% этанолом. Затем ДНК растворяли в 150 мкл буфера Трис-ЭДТА. Концентрацию ДНК измеряли по оптической плотности при 260 нм с использованием спектрофотометра УФ-света (Mitsubishi, Япония).Аликвоту общей ДНК 5 мкл (~ 200 нгм) использовали для коктейля ПЦР на 25 мкл. Праймеры BW-6 [5 ‘CGA CAC CGA GCA GCT TCT GGC TG 3’] и BW-7 [5 ‘GTC GGC ACC ACG CTG GCT AGT G 3’] нацелены на 306-п.н. 1081 были использованы для амплификации ДНК микобактерий.

    Для амплификации реакцию проводили в объеме 25 мкл смеси, которая содержала 50 пмоль каждого праймера, 200 мкМ каждого dNTP, 3 единицы ДНК-полимеразы Taq

    (Bangalore Genei, Bangalore) и 5 ​​мкл экстрагированной ДНК, содержащей ~ 200 нг. ДНК.

    Параметры амплификации включали начальную стадию денатурации при 94 ° C в течение 5 минут с последующими 35 циклами денатурации при 94 ° C в течение 1 минуты, отжиг при 68 ° C в течение 1,5 минут (12), удлинение при 72 ° C в течение 2 минуты. После окончательного удлинения при 72 ° C в течение 10 минут образцы переводили на 4 ° C для хранения. Продукты ПЦР детектировали электрофорезом в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием серебром (13). В каждом опыте геномная ДНК MTB использовалась в качестве положительного контроля, а известная отрицательная ДНК использовалась в качестве отрицательного контроля.Также был включен контроль реагента без ДНК. Включены маркеры с известными полосами от 80 до 400 пар оснований (Sigma, США). Зоны для подготовки матрицы, настройки ПЦР и обнаружения продуктов ПЦР были разделены, чтобы предотвратить любое переносимое загрязнение. Только результаты набора реакций, где положительный результат показал хороший продукт амплификации, с хорошей плотностью полос и оба отрицательных контроля показали чистые отрицательные результаты, считались действительными.

    По возможности, у 15 пациентов были взяты дополнительные образцы мокроты, спинномозговой жидкости и плевральной жидкости, и был проведен анализ ПЦР.У 2 пациентов с ригидностью шеи были выполнены искусственные спинномозговые пункции.

    Была предпринята попытка определить точность ПЦР в образцах, которые представляли собой ТБ-ПЦР + LJ- в группах 1 и 2. Всем пациентам с ТБ-ПЦР + была назначена предполагаемая анти-Коховая терапия, состоящая из рифампицина, изониазида, пиразинамида и этамбутола (AKT) в соответствии с национальным рекомендациям по терапии RNTCP / DOTS (14).

    Последовательные тесты ПЦР выполнялись на периферической крови с двухнедельными интервалами среди ПЦР + LJ — до точки преобразования ПЦР.

    Результаты

    Когорта из 129 пациентов была разделена на 5 групп в зависимости от их клинического статуса по туберкулезу и ВИЧ (таблица 1). Средний возраст пациентов с ТБ + ВИЧ + (группа 1,2,3) колебался от 32 до 37 лет, пациентов с ТБ + ВИЧ (группа 4) составлял 48 лет, а у здоровых добровольцев с диагнозом ТБ-ВИЧ (группа 5). было 30 лет. У ВИЧ-инфицированных лиц (группы 1,2,3) среднее количество CD4 варьировалось от 381 до 525 клеток / см, что свидетельствует о раннем или умеренном подавлении иммунитета (только 10/113 имели количество CD4 10% в течение 1 месяца, 58/113 ( 51.3%) имели рецидивирующую лихорадку> 1 месяца, 40/113 (35,4%) имели рецидивирующий кашель> 1 месяца, 5/113 (4,4%) имели уплотнение в животе и 1/113 (0,89%) имели жесткость шеи, указывающую на менингит.

    В таблице 2 представлены чувствительность и специфичность анализа TB ПЦР по сравнению с «золотым» стандартом, а именно с культивированием в среде LJ в каждой из 5 групп. В целом чувствительность составила 83,3%, а специфичность — 97,1%.

    В таблицах 3 и 4 представлены результаты последовательной ПЦР на ТБ пациентов с дискордантностью i.е. ПЦР + LJ- для определения точности и достоверности ПЦР как лучшего диагностического теста. Все последовательные анализы ПЦР на TB в группах 1 и 2 были воспроизведены дважды. Пациенты с ТБ-ПЦР + переведены на ТБ-ПЦР- через 6-8 недель после начала AKT (DOTS).

    Рисунок 1

    Таблица 1: Демографические и клинические особенности когорты.

    Рисунок 2

    Таблица 2. Сравнение анализа TB ПЦР с культурой LJ: чувствительность и специфичность

    Рисунок 3

    Таблица 3.Последовательная ТБ-ПЦР пациентов 1-й группы, которым была проведена ПЦР + LJ-

    Рисунок 4

    Таблица 4. Последовательная ТБ-ПЦР пациентов 2-й группы, которым была проведена ПЦР + ЖЖ —

    Обсуждение

    В настоящее время достаточно точно установлено, что у 60-70% ВИЧ-инфицированных в течение жизни развивается активный клинический туберкулез (1,5). При активации туберкулеза прогрессирование ВИЧ-инфекции

    ускоряется; следовательно, ТБ-ВИЧ считается смертельной комбинацией (5).В исследовании подчеркивается важность быстрой диагностики туберкулеза с использованием ПЦР-анализа с праймерами, такими как праймеры с IS1081, которые распространены в Индии (7). Исследование установило ценность ранней диагностики туберкулеза периферической крови на ранней стадии активации, когда большинство пациентов не производили другие традиционные образцы, такие как мокрота и / или плевральная жидкость. Фактически, только 15 из 113 (13,3%) пациентов с ТБ + ВИЧ + имели легкодоступные образцы, такие как мокрота и / или плевральная жидкость. Другими словами, более 85% случаев раннего заражения ТБ у ВИЧ-инфицированных было бы пропущено, если бы периферическая кровь не тестировалась с помощью ПЦР.Фактически, недавние исследования в других частях мира также показали, что с усиленными стратегиями скрининга заболеваемость туберкулезом была в два раза ниже в первые четыре месяца антиретровирусной терапии (АРТ) в когортном исследовании в Южной Африке ( 15). Таким образом, важность ранней диагностики туберкулеза с помощью ПЦР невозможно переоценить.

    Опубликованные данные свидетельствуют о том, что эффективность и полезность ПЦР-анализов с использованием ряда последовательностей в ДНК-мишени MTB из различных жидкостей организма зависит от последовательности, предназначенной для амплификации, поскольку эта последовательность должна присутствовать в штамме MTB. в инфекции (16-22).Более того, распространенность конкретных штаммов различается от региона к региону. Например, о высокой распространенности IS1081 сообщалось также из Ирана (23) и Польши (24). Сообщалось, что инсерционная последовательность IS 6110, которая, как было обнаружено, была полезна во многих анализах ПЦР в других местах, оказалась менее распространенной в штаммах MTB в Индии [8]. Однако само исследование показало, что причина низкой чувствительности и специфичности использования культуры LJ в качестве золотого стандарта заключалась в том, что IS6110 был менее распространен в Индии и использовались обычные биологические образцы, такие как мокрота.Как выбор, так и дизайн пары праймеров являются критическими детерминантами эффективности ПЦР-анализа.

    Для сравнения, в нашем исследовании с использованием праймера IS1081 была установлена ​​чувствительность и специфичность 83% и 97% соответственно. Однако в реальном выражении чувствительность была бы выше, если учесть, что пациенты с дискордантной ПЦР + LJ- показали конверсию ПЦР после начала AKT. Все 9 пациентов с противоречивыми результатами при приеме на работу хорошо ответили на AKT, состоящую из рифампицина, изониазида, пиразинамида и этамбутола (таблицы 3 и 4).Пациенты показали клиническое улучшение, такое как прибавка в весе, исчезновение кашля и лихорадка

    в течение нескольких недель после начала AKT, и летальных исходов не было. Среднее время превращения ПЦР в отрицательный составило 6-8 недель. Таким образом, даже в случаях легкой инфекции, ПЦР является более чувствительным анализом по сравнению с культивированием на среде LJ, который, вероятно, потерпит неудачу или потребует больше времени для получения положительного результата в отношении этого медленнорастущего организма. Различные факторы, такие как иммунная компетентность, время, необходимое для выведения бацилл из крови и другие факторы, могут отличаться от человека к человеку; следовательно, существует разница во времени, необходимом для преобразования ПЦР.Наши данные показывают, что как живые, так и мертвые бациллы были выведены из крови примерно через 6-8 недель AKT. Это важный вывод, который врачи могут использовать для определения терапевтического ответа или возникновения резистентности (МЛУ / ШЛУ ТБ) во время лечения.

    ПЦР-анализ на ТБ стоит в Индии от 15 до 20 долларов. Его можно быстро развернуть в крупных городах с высоким бременем туберкулеза из-за доступности (стоимости) для местного населения, крупных больниц, имеющих инфраструктуру ПЦР, и обученного персонала, способного проводить качественное тестирование ПЦР.Риск гипердиагностики туберкулеза с использованием периферической крови можно снизить за счет внедрения программы обеспечения хорошего качества и связи диагностических лабораторий ПЦР с научно-исследовательскими институтами.

    Вклад авторов

    Раджив С. Хира внес свой вклад, обдумывая тему, проводя тщательное базовое исследование, управляя и анализируя данные, получая справочные статьи и написав рукопись

    Вишвас С. Сарангдхар участвовал в разработке исследования, проводил и контролировал ПЦР и другие лабораторные испытания и участвовал в написании рукописи.

    Субхаш К. Хира внес свой вклад в дизайн исследования, набор пациентов в исследование и участвовал в анализе данных и подготовке рукописи.

    Герберт Л. Дюпон участвовал в разработке исследования и подготовке рукописи.

    Список литературы
    1. Всемирная организация здравоохранения. Содействие осуществлению совместных мероприятий по борьбе с ТБ / ВИЧ через сочетание государственного и частного секторов и партнерства. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 2008 г .; 8-12.
    2. Всемирная организация здравоохранения. Глобальный контроль туберкулеза: краткое обновление отчета за 2009 год. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 2009 г.
    3. Всемирная организация здравоохранения. Устойчивость к противотуберкулезным препаратам в мире, Отчет №4. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 2008 г.
    4. Всемирная организация здравоохранения. Руководство по надзору за лекарственной устойчивостью туберкулеза. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 2009 г.
    5. Ханна Л.Э, Наяк К., Субраманьям С., Венкатесан П., Нараянан П.Р., Сваминатан С. Неполное иммунологическое восстановление после противотуберкулезного лечения у ВИЧ-инфицированных лиц с активным туберкулезом.Indian J Med Res .; 129 (5): 548-54.
    6. Сентилкумар К., Дхашинамурти С., Нагалингесваран К. и др. Прямая диагностика Mycobacterium tuberculosis в образцах крови ВИЧ-инфицированных пациентов с помощью полимеразной цепной реакции. Индийский журнал клинической биохимии; 15: 76-82.
    7. Нияз Ахмед, Ашок Кумар Моханти, Утпал Мухопадхьяй и др. Быстрое обнаружение Mycobacterium tuberculosis в крови иммунокомпетентных пациентов с туберкулезом легких на основе ПЦР. Журнал клинической микробиологии; 36: 3094-3095.
    8. Халдар С., Чакраворти С., Бхалла М., Де Маджумдар С., Тьяги Дж. С.. Упрощенное обнаружение Mycobacterium tuberculosis в мокроте с помощью микроскопии мазка и ПЦР с молекулярными маяками. Журнал медицинской микробиологии; 56: 1356-1362.
    9. Шах А., Ясмин Р. Новые методы лабораторной диагностики туберкулеза. Практикующий врач JK; 814: 266-269.
    10. Халдар С., Шарма Н., Гупта В. и Тьяги Дж. Эффективная диагностика туберкулезного менингита путем обнаружения ДНК Mycobacterium tuberculosis в фильтратах спинномозговой жидкости с помощью ПЦР.Журнал медицинской микробиологии; 58: 616-624.
    11. Ханна Б.А., Уолтерс С.Б., Бонк С.Дж. и Тик Л.Дж. Извлечение микобактерий из крови в пробирке с индикатором роста микобактерий и скошенной кривой Левенштейна-Йенсена после лизиса-концентрирования. Журнал клинической микробиологии; 33: 3315-3316.
    12. Dziadek J, Sajduda A., Boruń TM. Специфичность ПЦР-анализов на основе инсерционной последовательности для комплекса микобактерий туберкулеза. Int. Jour Tuberculosis Lung Dis. 5: 569-74.
    13. Набор для окрашивания ДНК серебром Amersham BioSciences.Руководство по протоколу «Автоматическое деформирование полиакриламидных гелей серебра и кумасси», код № 80-6343-34.
    14. Министерство здравоохранения Нью-Дели. Пересмотренное руководство по лечению Национальной программы борьбы с туберкулезом (RNTCP).
    15. Лоун Д. С., Кранцер К., Эдвардс Д., МакНалли М., Беккер Л., Вуд Р. Туберкулез в течение первого года антиретровирусной терапии в южноафриканской когорте с использованием стратегии интенсивного скрининга перед лечением. СПИД; 24: 1323-1328.
    16. Эйзенах К. Д., Сиффорд М. Д., Кейв М. Д., Бейтс Дж. Х., Кроуфорд Дж. Т.Обнаружение Mycobacterium tuberculosis в образцах мокроты с помощью полимеразной цепной реакции. Am Rev Respir Dis; 144: 1160-1163.
    17. Кларридж Дж. Э., Шавар Р. М., Шинник Т. М., Пликайтис Б. П. Широкомасштабное использование полимеразной цепной реакции для обнаружения Mycobacterium tuberculosis в обычной микобактериологической лаборатории. J Clin Microbiol; 31: 2049-2056
    18. Хандекар П.А., Амин А., Редди П., Банваликар Дж., Шиваннуре С., Каточ В. Оценка теста на микобактерии туберкулеза на основе ПЦР в закодированных образцах мокроты.Ind. J. Med. Res .; 100: 167 -171.
    19. Баран Дж., Рейдерер К. М., Хатиб Р. Пределы обнаружения Mycobacterium tuberculosis в спинномозговой жидкости с использованием полимеразной цепной реакции при туберкулезном менингите. Eur J Clin. Microbiol. Заразить. Дис. ; 19: 47-50.
    20. Тан М.Ф. Ng WC. Чан Ш. Загар WC. Сравнительная полезность ПЦР при обнаружении Mycobacterium tuberculosis в различных клинических образцах. J. Med. Microbiol. ; 46: 164-9.
    21. Кафвабулула М., Ахмед К., Нагатаке Т., Гото Дж., Митараи С., Оидзуми К., Зумла А.Оценка основанных на ПЦР методов диагностики туберкулеза путем выявления микобактериальной ДНК в образцах мочи. Int. J. Tuber. Dis .; 6: 732-737.
    22. Хира С.К., Дюпон Х.Л., Ланджевар Д.Н., Дхолакия Ю.Н. Сильная потеря веса: преобладающая клиническая картина туберкулеза у пациентов с ВИЧ-инфекцией в Мумбаи. Nat Med J India; 11: 256-8.
    23. Аббас Б., Хормоздяр Э., Бахрам К., Рогае Г., Фарох Н. и Захра Н. Оценка эффективности IS1081-ПЦР для прямого обнаружения туберкулезного плеврального выпота: по сравнению с rpoB-PCR.Журнал сельскохозяйственных и биологических наук 1 (2): 142-145, 2005
    24. Dziadek J, Sajduda A, Boruń TM. Специфичность ПЦР-анализов на основе инсерционной последовательности для комплекса микобактерий туберкулеза. Int J Tuberc Lung Dis. 5 (6): 569-74.

    ПРОЦЕДУРЫ ОТБОРА ОБРАЗЦОВ НА ТБ — Служба здравоохранения и социального обеспечения штата Делавэр


    Mycobacterium tuberculosis , организм, ответственный за туберкулез (ТБ), является основной проблемой общественного здравоохранения в Соединенных Штатах.Однако с увеличением числа бездомных, употребления инъекционных наркотиков и появлением ВИЧ-инфицированных пациентов во многих районах страны произошло значительное увеличение как туберкулезных, так и нетуберкулезных микобактериальных заболеваний (НТМ).

    DE Public Health Lab обслуживает штат Делавэр в качестве справочного центра для выявления и / или тестирования чувствительности M. tuberculosis и другие изоляты микобактерий.Быстрые методы, рекомендованные CDC для сокращения времени обработки диагнозов ТБ, а также специальные методы идентификации, необходимые для нетуберкулезных видов Mycobacterium, могут оказаться невозможными в местных лабораториях.


    ПРЕДЛАГАЕМЫЕ ИСПЫТАНИЯ

    • Мазок на кислотоустойчивые бактерии (AFB)
    • Культура для AFB
    • Идентификация AFB
    • Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам
    • Особые запросы и обработка справок

    СБОР, ОБРАЩЕНИЕ И ОТПРАВКА ОБРАЗЦОВ

    1. Приобретите расходные материалы, заказав отдельные компоненты со склада этой лаборатории.Расходные материалы можно получить, связавшись с заказы в лабораторию, по факсу или по электронной почте [email protected]
    2. Заполните форму заявки на тестирование, включая информацию о пациенте или запрос онлайн через нашу Систему управления лабораторной информацией (LIMS). Образцы и формы должны быть размещены в специально отведенном месте на каждом участке. для лабораторного курьера, чтобы забрать.
    3. Возьмите образец в соответствии с указаниями, перечисленными ниже.
    4. Пометьте каждый контейнер уникальным идентификатором пациента, именем и датой получения в соответствии с формой заявки. Убедитесь, что крышка плотно закрыта контейнером и упакована отдельно.
    5. Поместите образец и форму заявки, если необходимо, в пакет для биологически опасных материалов для транспортировки в лабораторию.Убедитесь, что образец запломбирован. внутри двойного мешка, а форма вставляется во внешний карман, отделенный от самого образца. Доставка в лабораторию курьерской службой. ДЕЛАТЬ НЕ по почте.

    МАТЧА (ОТХРАНАЯ)

    Необходимо предоставить три образца, полученные ранним утром в разные дни.Достаточно объема от 5 до 10 мл, и нет преимущество в сборе большего объема. Образец должен содержать недавно выделившийся материал из бронхиального дерева с минимальными затратами. содержание слюны.

    МАТЧА (ВЫВЕДЕННАЯ)

    Если у пациента возникают трудности с получением образца мокроты, следует рассмотреть возможность индукции.Производство мокроты может быть вызвано вдыхание теплого аэрозоля стерильного 5-10% хлорида натрия в воде, производимого небулайзером.

    Образец должен иметь четкую пометку «INDUCED» на бланке запроса, так как распыленная мокрота имеет водянистую консистенцию и может быть ошибочно принимают за слюну.

    ПРОМЫВАНИЕ ЖЕЛУДКА

    Эту процедуру можно использовать, когда не удается получить мокроту.Эта техника требует профессионального внимания и должна покушение в больнице. Промывание желудка проводят рано утром перед едой и не менее чем через 8 часов после того, как пациент ел или принимал пероральные препараты. Требуется образец объемом 5-10 мл, который необходимо нейтрализовать 100 мг карбоната натрия.

    МОЧА

    Образец из середины ручья следует собирать рано утром.Отправьте образец целиком. Для получить положительный образец. Из-за загрязнения и порчи образцы мочи за 24 часа НЕ принимаются. Хранить образец в холодильнике до транспортировки.

    КРОВЬ

    Образцы следует собирать в изоляторные пробирки, которые можно получить по запросу в комнате с наборами этой лаборатории.Проверьте срок годности до кровь. Храните пробирки при комнатной температуре. Транспортировать в тот же день сбора.

    ЖИДКОСТИ

    Биологические жидкости (спинномозговые, плевральные, перикардиальные, синовиальные, асцитические, кровь, гной и костный мозг) должны собираться в асептических условиях и отправляться в стерильные контейнеры. Хранить в холодильнике до транспортировки.

    ТКАНЬ

    Любую ткань для культивирования необходимо собрать в стерильных условиях в стерильный контейнер без фиксаторов и консервантов. Если образец может высушите, добавьте стерильный физиологический раствор, чтобы он оставался влажным. Не помещайте образец ткани для посева в формалин. Хранить в холодильнике до транспортировки.

    ИЗОЛЯЦИИ ИЛИ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И / ИЛИ УСТОЙЧИВОСТИ

    Изоляты должны быть представлены в виде чистых свежих субкультур на средах Миддлбрука 7h20 или Левенштейна-Йенсена, когда это возможно, но приемлемы жидкие патентованные бульоны 7H9 (т.е. MGIT или флакон BacT / Alert MP). Включите предварительную идентификацию в форму заявки на тестирование. Если направление в CDC является вероятным или специально запрошенным, образец должен сопровождаться заполненной черточкой CDC.


    ИСПЫТАНИЯ

    Эта лаборатория использует систему Bactec MGIT 960 TB для обнаружения AFB в образцах и проведения тестов на чувствительность.

    Прямая идентификация из прямых образцов (т. Е. Из легких), а также из выращенных культур (бульон или выращенные изоляты) выполняется с помощью лабораторно разработанного теста (LDT) с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени (qPCR).

    Обычная восприимчивость применима только к M. tuberculosis complex (Mtbc).

    Первичное тестирование лекарственной чувствительности (ТЛЧ): изониазид, рифампицин, этамбутол, пиразинамид проводится в DPHL (при необходимости).Панели вторичных препаратов или быстрое первичное ТЛЧ направляются в лабораторию по изучению микробных заболеваний CA (MDL) или CDC, когда это необходимо или требуется.

    Тесты, требующие дополнительных специализированных методов, могут быть отнесены к CDC или CA MDL.


    ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

    В соответствии с рекомендациями CDC по уменьшению распространения M.tuberculosis, эта лаборатория предоставляет следующие результаты AFB:

    1. Флуоресцентное кислотостойкое окрашивание исходного образца: 24–72 часа с момента поступления в лабораторию.
    2. Идентификация M. tuberculosis в культуре: как можно скорее, но в течение 14–21 дней с момента получения образца.
    3. Результаты восприимчивости для M.tuberculosis : как можно скорее, но в течение 15–30 дней с момента получения образца.

    ПРИМЕЧАНИЕ. Все положительные результаты будут считаться в тот же день обнаружения.


    ОТКАЗ

    Образцы будут отклонены, если они:

    • Без надписи — все образцы ДОЛЖНЫ иметь уникальный идентификатор пациента.
    • Дата получения не указана
    • Недостаточно количества — Образец не получен, образец в контейнере или образец недостаточен для проведения испытания.
      • Мокроты, содержащие
      • Моча с
    • Damaged — Образец протек или сломался во время транспортировки.
    • Too Old — Образцы старше 3 дней являются ненадежными образцами для тестирования.
    • Contaminated — Изоляты или субкультуры будут отклонены, если невозможно выделить тестовый организм.

    Вернуться на страницу «Выполненные тесты».
    Вернуться на страницу Лаборатории общественного здравоохранения Делавэра

    Обратите внимание: некоторые файлы, доступные на этой странице, находятся в формате Adobe PDF, для которого требуется Adobe Acrobat Reader.Бесплатную копию Adobe Acrobat Reader можно загрузить прямо с Adobe. Если вы используете вспомогательную технологию и не можете читать Adobe PDF, просмотрите соответствующую текстовую версию (если она доступна) или посетите страницу Adobe Accessibility Tools.

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *