Отклонена матка: Загиб матки: мифы и проблемы

Содержание

Обследование по бесплодию, гидросонография

В нашем центре женщины могут пройти полное обследование по бесплодию. Оно включает обследование на инфекции, передающиеся половым путем, половые гормоны, гидросонографию и мониторинг УЗИ за овуляцией.

Гидросонография

Для чего?

Чтобы узнать причину бесплодия. Выявить патологию. Гидросонография — это широко используемый метод проверки проходимости маточных труб, позволяющий оценить состояние полости матки и маточных труб под контролем ультразвукового исследования. Его преимущества — отсутствие рентгеновского излучения. Так как нет опасения, что пациентка может получить чрезмерную лучевую нагрузку, доктор не ограничен во времени исследования, к тому же в режиме реального времени идет наблюдение за продвижением жидкости по маточным трубам, что может дать ценную информацию об их функционировании.

Плюсы ГСГ перед рентгеновским исследованием

Для гидросонографии используется не густое контрастное вещество, а физраствор, и нет необходимости туго заполнять полость матки.

К тому же это позволило использовать тонкие катетеры, что не вызывает у пациенток выраженной болевой реакции. Кроме того, физраствор не вызывает местного раздражения или аллергической реакции, как это бывает с рентгенологическим контрастным веществом. Повысилась точность диагностики перитубарных спаек и спаечного процесса в малом тазу вообще. Это произошло из-за того, что «вода», поступающая в полость малого таза через проходимые маточные трубы, свободно растекается, обтекая спайки, как бы отодвигая внутренние органы друг от друга, формируя «акустическое окно», позволяющее гораздо лучше увидеть и выяснить ситуацию внутри малого таза.

Процедуру проводят на амбулаторной основе, занимает она 10 — 15 минут, и часто для ее проведения не требуется анестезии.

Как выполняется гидросонография

Пациентка лежит на гинекологическом кресле, у которого горизонтально опущена спинка. Гинеколог сначала проводит осмотр, чтобы уточнить, отклонена матка вперед или назад.

После этого во влагалище вводятся зеркала, влагалище и шейка матки тщательно обрабатываются. В полость матки через канал шейки матки вводится тонкий (2-3 мм в диаметре) катетер из мягкого материала, который просто следует ходу канала и не может повредить матку. После введения на конце катетера раздувают баллончик из тонкой резины, чтобы он не мог выпасть из полости матки. Во влагалище вводят УЗИ-датчик. После ультразвукового подтверждения правильного расположения катетера через него вводят теплый стерильный физраствор. Обычно для раздувания полости матки достаточно

3-5 мл, после чего жидкость начинает поступать по фаллопиевым трубам. Количество вводимой жидкости может варьироваться от 20-30 мл до 100-120 мл.

Когда лучше делать?

Оптимальным признан так называемый предовуляторный период, то есть 8-11 дни обычного 28-30 дневного менструального цикла. Это вызвано тем, что, во-первых, менструации уже нет несколько дней, но эндометрий еще тонкий и не мешает оценивать форму полости матки, ее границы, не скрывает возможную патологию. Во-вторых, можно быть уверенным, что еще не было овуляции и, соответственно, нет беременности. А в-третьих, в этот период движение жидкости от матки к яичникам по фаллопиевым трубам физиологично.

Оптимальным способом оценки матки и маточных труб является двухэтапная схема проведения гидросонографии. Сначала вводится стерильный физраствор, что позволяет оценить форму полости матки, отсутствие или наличие внутриполостной патологии, а также проходимость труб и, возможно, наличие спаечного процесса в малом тазу. После этого дополнительно вводят контрастирующую жидкость (разумеется, в ходе этого же исследования) и это позволяет прицельно, с высокой точностью, «рассмотреть» маточные трубы.

При обнаружении на гидросонографии патологии, препятствующей наступлению беременности, пациентке требуется проведение уже не диагностических, а лечебных манипуляций.

Рост живота во время беременности

Темпы роста живота при беременности – дело сугубо индивидуальное. У некоторых женщин характерный беременный живот появляется уже на 10-12 неделе, а другие даже в третьем триместре выглядят так, как будто просто слегка переели.

Когда живот начинает увеличиваться?

Если это ваша первая беременность, скорее всего, живот начнет расти где-то между 12 и 16 неделей, да и то первое время разница будет видна только вам самой. Но это не значит, что ваша фигура никак не изменится до 4 месяца – вы можете набрать пару килограммов уже в первом триместре.

При второй и последующих беременностях «особое положение» становится заметно раньше, уже к 8-10 неделе вам может потребоваться новая одежда из-за стремительно увеличивающегося живота. Не пугайтесь, это абсолютно нормально – просто после предыдущей беременности мышцы живота и матки остались слегка растянутыми и теперь быстрее адаптируются к новому положению вещей.

Из-за чего растет живот?

К 12 неделе беременности малыш совсем еще крохотный, размером не больше сливы, а живот может быть уже достаточно заметен. Как это получается? Очень просто – размер живота увеличивается не только из-за роста ребенка. Вместе с малышом растет матка, плацента и увеличивается объем околоплодных вод.

Почему некоторые женщины начинают выглядеть беременными раньше, чем другие?

Как это обычно бывает, причин сразу несколько:

  • Комплекция мамы – как правило, чем женщина стройнее, тем раньше становится заметна беременность;
  • Упругость мышц брюшной стенки – натренированный пресс хуже растягивается, из-за этого некоторые спортивные мамы начинают выглядеть беременными позже;
  • Загиб матки кзади – это физиологическая особенность, при которой матка расположена слегка иначе, чем у большинства – отклонена назад, к прямой кишке, а не вперед, к брюшной стенке.  Из-за этого ее увеличение становится заметно позже;
  • Двойня – у женщины, вынашивающей двойню живот, разумеется, будет больше, чем у беременной одним малышом, поэтому и визуально увеличиваться он начнет раньше;
Как будет увеличиваться живот со сроком беременности

Если в первом триместре скорость увеличения живота обусловлена только индивидуальными особенностями, то по мере развития беременности отклонение в размере окружности живота от нормы может сигнализировать об осложнениях или неправильно установленном сроке.

Начиная примерно с 12-й недели ваш врач на каждом приеме будет замерять высоту стояния дна матки (расстояние от лонного сочленения до края матки) и окружность живота. Считается, что после 12-й недели живот должен увеличиваться в среднем на 1 см в неделю.  Таким образом, у женщины среднего телосложения к концу беременности окружность живота составит 100-110 см.

Существуют специальные таблицы, по которым акушеры-гинекологи определяют соответствие окружности живота норме, но точной картины они дать не могут, все зависит от вашего изначального обхвата талии и особенностей беременности.  Именно поэтому врачи больше обращают внимание на динамику увеличения живота.

Визит к гинекологу в 9 месяцев

Дарья Урсуляк
Врач акушер-гинеколог, канд. мед. наук, г. Москва
Журнал «9 месяцев»
№01 2006

Теперь, в «интересном положении», вам придется регулярно посещать врача акушера-гинеколога, при этом частота визитов к доктору будет увеличиваться по мере увеличения срока беременности. В конце приема специалист обязательно назначит вам следующую дату посещения и порекомендует не пропускать осмотры, так как от регулярности наблюдения будущей мамы зависит успешное протекание беременности, родов и, несомненно, здоровье ребенка.

Желательно, чтобы для беременной каждый визит к акушеру-гинекологу стал важной частью ее нового распорядка жизни. К посещению доктора стоит предварительно подготовиться. Что имеется в виду?

Собираем «багаж»

Прежде всего, будет удобно, если вы заранее соберете пакет или сумку, в которых будет находиться все необходимое для посещения врача. В ваш «багаж» войдут:

  • Документы: полис обязательного медицинского страхования, паспорт, возможно, результаты анализов, медицинских заключений других специалистов, выписки из истории болезни после госпитализации в стационар (если таковая была) и т.п. (заметим, что это могут быть ксерокопии оригиналов). Когда вам выдадут обменную карту – основной медицинский документ беременной, — то ее тоже надо будет брать с собой.
  • Вещи, необходимые при осмотре: носки (обычно в кабинете гинеколога обувь необходимо снимать), пеленка или полотенце, которые можно постелить на гинекологическое кресло или кушетку на случай, если в кабинете не окажется одноразового белья.
  • Ручка и блокнот для записей.

Такую сумку можно в дальнейшем не разбирать: она всегда будет у вас под рукой, и есть гарантия в спешке не забыть важные вещи. Правда, обменную карту нужно будет носить в другой сумке — той, которой вы пользуетесь ежедневно.

В аптеках можно приобрести одноразовые гинекологические наборы, доступные по цене и состоящие из пластикового зеркала (с его помощью производят осмотр шейки матки), стерильных перчаток, специальных палочек или щеточек (их используют для забора материала из влагалища, шейки матки для анализа) и одноразовой пеленки, которую стелют на гинекологическое кресло. С этим набором можно посещать акушера-гинеколога (конечно, для каждого визита потребуется новый набор). Не исключено, что в кабинете врача есть одноразовые гинекологические наборы, и тогда самостоятельно приобретать их не придется. Кроме того, если беременность будет протекать без осложнений, зеркало для гинекологического осмотра потребуется доктору лишь несколько раз: на первом осмотре, в 26-30 недель и в конце беременности.

Готовимся заранее

Перед консультацией составьте список вопросов, которые вы хотели бы задать врачу, а во время беседы записывайте в блокнот полученные рекомендации. Также вы должны знать дату вашей последней менструации, характер (обильные, необильные выделения) и длительность вашего менструального цикла. Посещения акушера-гинеколога лучше не планировать на те дни, когда при отсутствии беременности должна была начаться менструация. Эти дни специалисты считают критическими для развития плода, а осмотры и обследования в опасный период могут стать причиной прерывания беременности. Поэтому, если отметить на календаре даты предполагаемых менструаций, можно избежать ненужного риска.

Кроме того, немаловажно психологически подготовить себя к визиту. Не стесняйтесь спрашивать врача об интимных особенностях и специфике половой жизни, не скрывайте информацию, касающуюся вашего здоровья. Квалифицированный гинеколог никогда не будет осуждать вас, а напротив, постарается помочь и объяснить ситуацию. Не нужно заранее настраивать себя на возникновение неприятных, болезненных ощущений во время осмотра.

Накануне и в день визита

За сутки до визита к врачу рекомендуется исключить половые контакты, иначе результаты анализа могут быть недостоверны из-за возможного присутствия семенной жидкости.

Перед визитом к врачу опорожните мочевой пузырь и, по возможности, кишечник, чтобы во время осмотра они не мешали оценивать состояние внутренних половых органов. Примите душ, смените белье. При этом нельзя спринцеваться, так как подобная процедура способна изменить микробную флору влагалища, и результаты анализов также будут недостоверны; кроме того, врач не сможет оценить характер влагалищных выделений. Если ожидание очереди к гинекологу затянется, еще раз опорожните мочевой пузырь.

Что вас ждет во время посещения врача — гинеколога?

Во время первого исследования акушер-гинеколог уточняет возраст пациентки, подробно расспрашивает женщину о состоянии ее здоровья, перенесенных заболеваниях, в том числе в детском возрасте, различных оперативных вмешательствах, травмах, о заболеваниях, перенесенных родителями и другими ближайшими членами семьи, а также о состоянии здоровья сексуального партнера, уточняет условия труда и быта. Особое внимание уделяется характеру менструального цикла (уточняется время начала первой менструации, с какого времени установился регулярный цикл, продолжительность менструального цикла, величина кровопотери, возможные изменения в менструальном цикле после начала половой жизни, родов, абортов), половой и детородной функциям (количество беременностей, родов, абортов). Кроме того, для гинеколога чрезвычайно важным является вопрос о методах контрацепции, которые использует пациентка.

Затем будущую маму взвесят (прибавка в весе во время вынашивания малыша является немаловажным фактором течения беременности) и измерят тазомером таз. Сантиметровой лентой измеряется окружность живота, высота дна матки (если срок беременности более 16 недель). Это позволит доктору представить картину развития плода и установить, соответствуют ли его размеры сроку беременности. Проводится измерение артериального давления на обеих руках.

На первом приеме акушер-гинеколог проводит оценку оволосения тела женщины (повышенное оволосение может служить признаком увеличенного количества мужских половых гормонов, что, в свою очередь, является фактором риска угрозы прерывания беременности), осматривает молочные железы (однородны ли они по структуре, нет ли уплотнений, каких-то образований, выделений).

Далее следует осмотр на специальном гинекологическом кресле.

Осмотр на кресле

Перед осмотром необходимо раздеться (одежду можно оставить на стуле рядом с креслом), надеть носки, постелить пеленку, расположиться на кресле, чтобы ягодицы находились как можно ближе к его краю, а ноги — на специальных подставках. Руки положите на грудь, постарайтесь успокоиться и расслабиться, дышите ровно и глубоко.

Любое гинекологическое исследование начинается с того, что врач осматривает наружные половые органы (оценивает состояние кожи и слизистой оболочки промежности, большие и малые половые губы, клитор, наружное отверстие мочеиспускательного канала). Обязательно осматривается область заднего прохода, что позволяет сразу же выявить наличие геморроидальных узлов, трещин.

После того как предварительный осмотр наружных половых органов завершен, гинеколог приступает к осмотру внутренних половых органов, одним из основных методов которого является исследование при помощи зеркал — металлических или пластиковых приспособлений, которые вводят во влагалище, что позволяет удержать его открытым. Данный вид осмотра направлен на выявление заболеваний влагалища или шейки матки. Во время осмотра акушер-гинеколог обращает внимание на состояние стенок влагалища, шейки матки (при беременности она имеет синюшный оттенок), наличие разрывов, эрозии. Врач оценивает состояние наружного зева — отверстия канала шейки матки, влагалищные выделения (их цвет, запах, объем). Выделения с прожилками крови являются признаком возможной угрозы прерывания беременности. Если выделения мутные, имеют необычный запах, можно заподозрить наличие инфекции.

Далее, осматривая беременную, врач возьмет мазок на микробную флору шейки матки, влагалища, мочеиспускательного канала. Специальной ложечкой (Ложка Фолькмана) берется содержимое канала шейки матки, влагалища, потом — мочеиспускательного канала и наносится на стекло. В лаборатории мазок изучают под микроскопом. Мазок на флору повторяют в течение беременности 3-4 раза, даже если не было выявлено патологии.

Еще одним важным и необходимым исследованием является цитологическое исследование, при котором изучают особенности строения клеток поверхности и канала шейки матки (обычно его делают дважды – в начале и в конце беременности). Забор материала проводится щеточкой (Цитощеткой или Цервекс-браш). Этот анализ позволяет выявить онкологические заболевания на ранних стадиях. По необходимости проводят обследование женщины на инфекции, передаваемые половым путем. Для этого содержимое влагалища, цервикального канала помещают в специальную пробирку, которую затем передают в лабораторию.

После того как материалы для анализов взяты, врач вынимает зеркало из влагалища и продолжает гинекологический осмотр – проводит влагалищное исследование. При этом сначала разводят большие половые губы, а затем осторожно вводят во влагалище указательный и средний пальцы. Если манипуляцию проводит квалифицированный специалист с максимальной осторожностью, женщина практически не испытывает каких-либо неприятных ощущений. С помощью этого метода можно определить состояние тазовых мышц, влагалища (его объем, растяжимость, складчатость, наличие рубцов, особенности сводов), состояние части шейки матки (величина, форма, консистенция, подвижность, болезненность). Так, при нормальной беременности шейка матки отклонена назад, длина ее более двух сантиметров, на ощупь она плотная, а канал непроходим для пальца. При угрозе прерывания беременности шейка укорачивается, размягчается, смещается к центру, канал раскрывается.

Далее врач проводит ощупывание матки. Ее величина обычно соответствует сроку беременности, но может быть больше при наличии миомы (доброкачественной опухоли матки) или многоплодной беременности. Не менее важным для врача являются форма, консистенция и подвижность матки. Неровности на матке могут быть признаком аномалий ее развития или наличия миомы. Матка при беременности мягче, чем небеременная, особенно размягчается перешеек матки. На небольшом сроке матка подвижна и занимает среднее положение в малом тазе. Если ее подвижность ограничена или она отклонена в сторону, то чаще это связано со спайками в области малого таза (структурами из соединительной ткани, которые тянутся от органа к органу, нарушая их взаиморасположение и функции) или воспалительным заболеванием придатков матки.

После того как специалист закончит осмотр собственно матки, он приступает к обследованию ее придатков, при котором можно выявить наличие новообразований (например, опухолей яичника) и спаечных процессов. При этом здоровые яичники находятся сбоку от матки, ближе к стенке малого таза, и имеют продолговатую форму. При наличии внематочной беременности (чаще при этом эмбрион прикрепляется в маточной трубе) осмотр причиняет женщине боль.

В конце исследования врач ощупывает внутреннюю поверхность крестца, лонного сочленения и боковых стенок таза. Это позволяет выявить деформацию костей и поставить диагноз анатомического сужения таза.

По окончании осмотра акушер-гинеколог назначит анализы (общий анализ крови, мочи, биохимический анализ крови, исследование уровня специфического гормона беременности в крови, специальное исследование крови на сифилис, ВИЧ-инфекцию, определение группы крови и резус-принадлежности), ультразвуковое исследование органов малого таза, даст направления на консультации других специалистов и назовет дату следующей консультации.

Что означает матка сзади. Что означает матка отклонена кзади. Оптимальные для зачатия позы

Не наступает беременность, хотя явных причин для этого нет и все анализы в норме? Сделали УЗИ и врач определил загиб матки, лечение которого требует сил и времени? О чем говорит загадочный диагноз «ретрофлексия» в гинекологии и его последствия? Каким образом можно избавиться от перегиба и смещения матки кзади, что делать, как забеременеть с загибом и выносить ребенка в этом случае, расскажем в этом материале.

Обращаем ваше внимание, что здесь дана общая информация о проблеме. Какой терапевтический подход выбрать для успешного и быстрого решения проблемы ретрофлексии матки, можно сказать только после установления причины этого состояния. По всем этим вопросам приглашаем женщин обратиться к хорошим гинекологам нашей клиники в Москве — полная диагностика причин появления и эффективное лечение с использованием лучших, проверенных методик!!

Что такое ретрофлексия матки

Загиб матки (отклонение кзади) — это аномалия положения органа, при которой отклонение от нормального положения в малом тазу имеет постоянный характер. Бывает врожденным или приобретенным.

Врожденная форма существенного дискомфорта или проблем во взрослой жизни женщины как правило не вызывает. Чаще заднее расположение матки встречается у женщин астенического телосложения, характеризующимся низким весом, худощавостью и грудной клеткой удлиненной формы. Нередко среди причин ретрофлексии бывает и наследственный фактор.

Вторичный (приобретенный) перегиб матки кзади — это следствие различных патологических процессов, происходящих в организме женщины, которые приводят к утрате эластичности связок или к их ослаблению. Наиболее вероятными причинами образования загиба шейки и матки, по мнению большинства акушеров-гинекологов, являются воспаления внутренних половых органов, инфекции, в том числе некоторые венерические, оперативные вмешательства «по гинекологии» и травматичные роды.

Причины, почему бывает загиб матки

  • слабые мышцы и связки малого таза;
  • последствие воспаления придатков, не вылеченного или недолеченного;
  • чрезмерные физические нагрузки;
  • опухолевые процессы матки и яичников;
  • проблемы желудочно-кишечного тракта;
  • спаечные процессы в области малого таза
  • после операций (аппендицит, аборт, кесарево сечение).

Последствия и осложнения

В том случае, если ретрофлексия матки врожденная, угрозы здоровью обычно нет. Если же загиб образовался по причине перенесенных воспалительных заболеваний или абортов, то возможно развитие спаечного процесса, что может стать причиной бесплодия и многих других женских проблем. В этом случае все зависит от типа и степени смещения матки (кзади, в сторону, вперед), но есть общие симптомы, которые бывают практически у всех женщин. Последствия ретрофлексии обычно таковы:

  • сильные боли в животе во время месячных;
  • перидические колебания менструального цикла;
  • боли при месячных, бывают сгустки крови;
  • болезненные половые акты;
  • бесплодие;
  • проблемы с мочеиспусканием.

Следует учитывать, что все перечисленные симптомы ретрофлексии матки не отменяют необходимости использования средств контрацепции, если в данное время зачатие ребенка не входит в ваши планы.

ЗАГИБ МАТКИ НА ФОТО

Позы при загибе матки

Можно ли забеременеть при загибе матки кзади? Женщины, имеющие загиб матки назад, позы для зачатия лучше всего практиковать следующие:

  1. «Колено-локтевая» — хорошая поза для для зачатия. Ее еще называют «поза собаки» или «догги-стайл» (англ.), или в просторечии более понятным термином «поза раком». Обеспечивает максимально близкий контакт шейки матки с половым членом при фрикциях. После семяизвержения во влагалище женщине рекомендуется 20-30 минут полежать, лучше на животе. Нахождение по время интимной близости в колено-локтевой позиции при загнутой кзади матке позволяет снизить дискомфорт в животе, вызываемый давлением полового члена на шейку, а еще повышает вероятность наступления беременности.
  2. Поза «женщина на животе». Соображения те же самые, что и в случае с колено-локтевым положением. Помимо того, что семенная жидкость скапливается во влагалище непосредственно у шейки матки, данная поза еще и создает условия для максимально возможного сближения матки и полового члена, что также является благоприятным фактором для возникновения беременности. Вытекание же спермы из влагалища, в ряде случаев встречающееся у женщин с загибом матки кзади, вправо, влево, является исключительно проявлением недостаточности (слабости) мышц влагалища и промежности.

ФОТО «ЛУЧШИЕ ПОЗЫ ДЛЯ ЗАЧАТИЯ ПРИ ЗАГИБЕ МАТКИ»

Для скорейшего зачатия при ретрофлексии могут быть полезны и такие позиции. Интимная близость в такой позе может ускорить наступление беременности при смещенном положении матки кзади:

Как лечить загиб матки

Как мы уже выяснили выше, часто причиной загиба становятся спайки в малом тазу, вызванные хроническими воспалительными процессами в области придатков, ИППП или перенесенными гинекологическими операциями. Хирургические аборты тоже входит в число вероятных причин маточной ретрофлексии. Чтобы от них избавиться, в запущенных случаях проводят операцию лапароскопию. При инфекционной природе сначала назначают противовоспалительные препараты, антибиотики и пр.

После основного курса лечения нужны процедуры, которые предотвратят рецидив воспаления и осложнения, в том числе и патологическое смещение матки. Для этого по показаниям гинекологи назначают гормональные препараты или контрацептивы по схеме, физиотерапию и мануальные методики воздействия на женские внутренние половые органы. Среди последних ведущую роль в коррекции ретрофлексии пренадлежит специальным массажным техникам воздействия на органы малого таза в сочетании с некотороыми «народными» способами. В дополнение к этому комплексы лечебной физкультуры, например упражнения Кегеля, считаются лучшими упражнениями для коррекции подвижной тазовой мускулатуры.

Лечение загиба матки народными средствами

Смещение матки назад, вызванное внешними факторами, в гинекологии успешно исправляется различными методиками. Как лечебную терапию, гинекологический массаж назначают в случаях, когда причина загиба — это хроническое воспаление в области придатков, слабость тазовой мускулатуры, разные дисфункции яичников. Хорош этот метод тем, что без хирургического вмешательства и последствий получается восстановить правильное положение матки, улучшить и укрепить интимные мышцы тазового дна и размягчить и уменьшить спайки. Такая процедура корректирует и убирает загиб, массаж малого таза при правильном выполнении снимает боли во время полового акта, увеличивает шансы на зачатие и беременность, улучшает общее самочувствие женщины.

Техника выполнения ручного массажа при лечении загиба матки кзади имеет свои особенности. В данном случае учитывается причинный фактор и пространственное положение смещенного органа в малом тазу. Поэтому, помимо отдельных технических нюансов в выполнении этой процедуры, специалисты гинекологии рекомендуют сочетать ее с такими «народными средствами», как гирудотерпия и грязевые сеансы, а также физиотерапия. Выполняемые в различных комбинациях во время прохождения курса, они значительно повышают шансы на успех. Лечение ретрофлексии с помощью гинекологического массажа также помогает остановить дальнейшее прогрессирование недуга.

Хирургическое вмешательство при данной гинекологической патологии выполняется в запущенных случаях и при наличии особых на то показаний.

Таким образом, при наличии загиба кзади или смещения от оси матки влево или вправо, помимо упомянутого выше массажа, в гинекологической практике показали эффективность физиолечение, грязевые процедуры (ректальное введение), постановка пиявок. Их умелое сочетание позволяет специалистам нашей клиники исправить загиб матки и помочь женщине как можно быстрее забеременеть!

В норме репродуктивные органы располагаются по центру брюшной полости. Но у 5% женского пола во время вынашивания диагностируют патологию, которая характеризуется, как матка кзади при беременности. Аномалия считается врожденной и обуславливается тем, что дно имеет изгиб, то есть повернуто к задней части влагалища.

Что значит загиб матки кзади?

Если матка расположена с некоторыми отклонениями от нормы, ближе к задней стенке по сравнению с поперечной осью, тогда диагностируется матка кзади при беременности. Особенности женского организма обуславливаются креплением связок к стенкам, когда наблюдается отклонение, а дно органа образует тупой угол в районе малого таза.

Такое строение считается врожденным, но не редко встречается и приобретенная патология, причинами которой становятся:

  • воспалительные процессы;
  • ослабленная функциональность яичников;
  • неправильное питание;
  • множественные роды и аборты;
  • образовавшиеся спайки в результате оперативного вмешательства.
Загиб тела представляет собой особенность строения детородных органов женщины. Степень смещения влияет на возможность зачатия и на осложнения в процессе вынашивания. При минимальном смещении дно достигает только мыса крестца, при максимальном отклонении, детородный орган располагается ниже шейки.

В медицине такое смещение называется ретрофлексия, когда шейка маки направлена вперед, а тело стремится назад. При этом симптоматически патология редко себя проявляет, возможен болевой синдром во время менструального цикла. Но чаще, обнаружить аномальное расположение можно только с помощью ультразвука.

Как забеременеть с загибом матки кзади?

Вопрос о том, как забеременеть с загибом матки кзади, волнует многих женщин, ведь ситуация затрудняет проходимость сперматозоидов к яйцеклетке. Чтобы снизить влияние аномального расположения и укрепить связки, которые крепят тело органа, необходимо применять комплекс упражнений из положения лежа:
  1. согнутые ноги поднимать к животу;
  2. поочередные махи ровными ногами вверх и вниз;
  3. «велосипед» и «ножницы» помогают укрепить нижний пресс живота;
  4. хождение по полу на ягодицах с ровными ногами без помощи рук;
  5. стоя на локтях выгибать спину, как «кошка»;
  6. упражнения Кегеля по укреплению мышц влагалища.
Беременность при загибе матки кзади наступает в 70% случаев, если обуславливается врожденным дефектом. При смещении в результате наличия спаечных процессов, предполагается комплексное лечение. Помимо гимнастических упражнений рекомендуется физиотерапия и грязевая терапия. В редких случаях, когда констатируется бесплодие по причине ретрофлексии, может быть назначена операция по исправлению расположения шейки.

Позы для беременности при загибе кзади

Если зачатие не наступает долгое время, а врач диагностировал смещение, то рекомендуются следующие позы для беременности при загибе матки кзади во время полового акта:
  • любые вариации коленно-локтевой позиции;
  • женщина лежит на боку, а мужчина сзади;
  • в классической позе, когда половой партнер сверху, а женщина, лежа на спине, приподнимает бедра.
Сразу после полового акта, необходимо оставаться в горизонтальном положении на протяжении 10-15 минут, тогда сперматозоидам будет легче добраться до яйцеклетки. За несколько дней до овуляции лучше воздержаться от секса, чтобы мужская сперма стала более концентрированной.

Беременность при загибе матки кзади

Когда констатируют успешное зачатие при аномальном расположении маточной полости, то весь 9-ти месячный период вынашивания, чаще всего проходит без осложнений. Если детородный орган подвижен и отсутствуют спайки, то в процессе роста плода маточная полость встанет на место, но могут возникать тянущие ощущения внизу живота.

В случае приобретенной аномалии, когда присутствуют спайки или инфекции, в период вынашивания могут возникнуть осложнения. Патология приводит к нарушениям дефекации, воспалениям мочеиспускательной системы, формируется высокий риск развития истмико-цервикальной недостаточности, возможен выкидыш на ранних сроках. Поэтому приобретенная аномалия требует к себе постоянного внимания со стороны медицинских специалистов и динамического контроля над течением беременности.

Содержимое

Матка — подвижный орган, и свое положение она может менять под воздействием различных факторов. По физиологической норме располагается она между мочевым пузырем и прямой кишкой. Загиб матки кзади — распространенная патология, которая носит название ретрофлексия.

Что такое ретрофлексия

Загиб матки кзади — признак атипичного расположения в брюшной полости. Согласно норме, относительно шейки матки образует угол, открытый кпереди. Благодаря этому орган при необходимости может смещаться, чтобы не давить на полные кишечник или мочевой пузырь.

Если матка отклонена назад — значит, образуется «неправильный» угол, направленный в сторону позвоночника. На протяжении долгого времени нарушение может быть незаметным для самой женщины, но возможно развитие серьезных осложнений. К ним относятся опущение или выпадение матки.

Из-за скрытого течения патологии женщина зачастую узнает о том, что произошло отклонение матки кзади, во время профилактического осмотра или при выяснении причин бесплодия. При сильном отклонении или загибе сперматозоиды не могут проникнуть к нужной части органа для зачатия.

Виды патологии

Загиб кзади может быть подвижным или фиксированным. В первом случае орган может самостоятельно возвращаться в нормальное положение, при фиксированной ретрофлексии матка постоянно отклонена по отношению к шейке. При попытках врача исправить патологию вручную возникает резкий болевой синдром.

Подвижный загиб кзади корректируется посредством массажных техник и определенных физических упражнений. Зачатие при нем возможно: женщине достаточно принять позу, которая «вернет» матку к правильному физиологическому положению – лежа на животе. Фиксированное отклонение требует более серьезных манипуляций, вплоть до хирургического вмешательства.

Если матка имеет врожденный загиб кзади, патология часто сопровождается болезнями, исключающими возможность зачатия.

Возможные причины

Загиб матки кзади может быть первичным (врожденным) и вторичным (приобретенным). Нарушение формируется еще в период внутриутробного развития девочки. Если матка с загибом назад отклонена незначительно, лечение не нужно. Женщина может забеременеть, и процесс вынашивания плода вернет орган на место.

Приобретенный загиб кзади развивается из-за воздействия патологических процессов и нарушений в организме. Так, к подвижному отклонению приводят:

  • растяжение связок;
  • сниженный тонус мышц таза;
  • травмы;
  • резкая потеря веса;
  • недостаточное питание;
  • инфекции после родов или абортов;
  • недостаток физической активности;

Если диагностирован фиксированный загиб матки кзади, это значит, что нарушена подвижность органа по отношению к остальным тазовым органам. Наиболее распространенной причиной считается спаечный процесс в малом тазу.

Также вызвать постоянный загиб могут:

  • осложнения после родов;
  • воспалительные процессы в прямой кишке;
  • регулярные запоры;
  • хронические заболевания инфекционного или воспалительного характера.

При своевременном лечении большинства заболеваний загиба матки кзади можно избежать.

Симптоматика

Большинство женщин, на протяжении длительного времени не ощущают, что матка отклонена кзади. Специфической симптоматики у патологии нет. Фиксированный загиб проявляется:

  • обильными менструациями;
  • запорами;
  • давящей болью внизу живота;
  • дискомфортом во время полового акта;
  • обильными выделениями с неприятным запахом.

Подобные симптомы характерны для ряда других заболеваний мочеполовой системы. Обычно пациентки обращаются к гинекологу с подозрениями на цистит или вагинит, и только во время исследования обнаруживается, что матка отклонена кзади.

Беременность при загибе

Нефиксированный загиб не мешает половой жизни. Но сперматозоидам сложно добраться до нужного места, а значит, вероятность оплодотворения в разы снижается. При переходе к фиксированному типу нарушения возможно необратимое физиологическое бесплодие.

Наиболее благоприятной для зачатия считается коленно-локтевая поза. После завершения процесса желательно несколько минут полежать на животе. Это приводит к постепенному выпрямлению матки, что увеличивает шанс оплодотворения.

При фиксированном загибе шансы на успешное зачатие в разы снижаются. Даже если беременность наступила, она требует особого контроля со стороны врачей: шансы успешно выносить ребенка, очень малы. Гинекологи рекомендуют пройти полное медицинское обследование еще на этапе планирования беременности, чтобы своевременно выявить все нарушения.

Диагностика

При подозрении на то, что матка отклонена кзади, специалист должен провести двуручное обследование. Во время этого во влагалище вводятся пальцы одной руки, пока вторая обследует поверхность низа живота. Между пальцами прощупываются внутренние органы.

Во время такого исследования гинеколог определяет положение матки и наличие новообразований в области малого таза. Если выясняется, что матка отклонена кзади — значит, необходимы другие манипуляции. Врач попытается вернуть ее в правильное положение, при подвижном загибе это произойдет без особых проблем.

При выявлении очевидных патологий расположения органов пациентка получает направления на дополнительные исследования. Сделать необходимо компьютерную томографию и УЗИ органов малого таза. Если обнаружатся спайки, воспаление или опухоли, подбирается необходимая терапия.

Подвижный загиб матки без неприятных симптомов часто не требует лечения.

Лечение

В особом лечении нуждается «запущенный» загиб матки кзади, при котором возможно появление бесплодия, а также осложнений в виде выпадения или опущения органов. Основные терапевтические мероприятия направлены на коррекцию первопричин нарушения.

Показаниями к врачебному вмешательству относятся также:

  • дисменорея;
  • бесплодие;
  • постоянная боль внизу живота;
  • постоянные запоры;
  • воспаления;
  • спайки.

Характер терапии зависит от причин, по которым матка отклонена кзади. При обоих типах отклонения рекомендуются:

Курс упражнений подбирается индивидуально инструктором ЛФК.

Среди основных задач — повысить тонус мышц, ускорить обменный процесс, улучшить кровоснабжение тканей таза.

При загибе, вызванном воспалительными заболеваниями, необходим курс медикаментозной терапии. Используются противовоспалительные и антибактериальные средства, дополнительно идет общеукрепляющее воздействие на организм. Спайки убираются путем хирургического рассечения путем лапароскопии.

Профилактика

Полностью обезопасить себя от загиба матки кзади невозможно. Но существует ряд рекомендаций, которые помогут снизить вероятность развития этой патологии. Рекомендуется:

  1. Отказаться от работы, связанной с постоянным нахождением на ногах и чрезмерными физическими нагрузками.
  2. Не допускать застоя крови в органах малого таза: пассивный образ жизни недопустим, необходима ежедневная физическая активность.
  3. Важно своевременно обращаться к врачам, чтобы не допустить переход болезней из острой фазы в хроническую.
  4. «Ставка» делается на общеукрепляющие физические упражнения, а не на силовые тренировки.
  5. Желательно вести здоровый образ жизни и отказаться от вредных привычек.
  6. Питание должно быть сбалансированным и полноценным.
  7. Жесткие диеты под запретом: резкая потеря веса вредит всему организму.

При легком течении заболевания прогноз благоприятный. Курс специального массажа матки позволяет при загибе первой степени вернуть орган на место и беременность наступает быстро. При наличии спаек в малом тазу и хронических воспалительных процессов нередко наблюдается рецидив.

Каждая женщина имеет уникальное строение внутренних органов.Женщины выполняет одну из самых, пожалуй, важных функций – репродуктивную. Зачастую, наблюдаясь у врача и проводя ультразвуковые исследования, у женщин отмечаются особенности, связанные со строением органов, играющих важную роль для оплодотворения и роста плода.

Как правило, женщины сталкиваются с изменениями строения матки. Это объясняется тем, что при рождении, девочки имеют уникальное строение жизненно важных органов и матки в том числе. Взрослея, форма органа способна изменяться и принимать разные формы, о которых необходимо знать.

Врачами ставятся разные диагнозы при проведении ультразвукового исследования. Нередко бывают особенности, как седловидная матки, а также нередко встречается загиб матки. Любой диагноз имеет особенности, о которых необходимо знать женщине.

Загиб матки кзади – самое, пожалуй, часто встречающее явление. Что представляет собой диагноз и есть ли повод для беспокойства?

Что представляет собой загиб матки кзади?

Загиб матки кзади – это один из видов расположения матки. Скажем так, это не болезнь и уж тем более, не приговор.

Это особенность женского организма. Нормой считается тогда, когда в организме женщины находится в состоянии загиба кпереди (антефлексия).

Ретрофлексия это состояние, называющиеся загибом матки кзади.

С этой особенностью рождаются более 15% девочек, и такая особенность является врожденной, а не приобретенной.

Все разговоры и мнения по поводу того, что при загибе матки кзади, женщина не сможет зачать со своим партнером плод – миф, необходимый развеять. Многие женщины действительно начинают зря переживать.

Причины загиба матки

По какой причине возникают такие особенности? На что оказывает влияние и возможно ли предотвратить такой процесс? В действительности, загиб матки возможен по многим причинам.

Развитию особенности способствуют:


Симптомы

Говоря о симптомах, стоит отметить, что такому диагнозу чае подвергаются девушки с худым строением тела. Обычно у таких женщин и девушек ослаблена мышечная система. Безусловно, достаточно важно то, насколько развита мышечная система. От этого и зависит состояние связок, удерживающих матку в необходимом положении.

Симптомы загиба матки могут быть банальные для женщин:

Для диагностики диагноза, необходимо регулярно наблюдаться у врача – гинеколога.

Расположение матки в малом тазу

Любая женщина знает о том, как важно понимать строение своего организма, а строение органов, отвечающих за репродуктивную функцию – тем более. Матка – один из самых важных органов, роль которого важна, особенно при зачатии плода.

Расположение матки в малом тазу очень важна при диагностике некоторых заболеваний. Как известно, любой орган может менять свое расположение, а также изменять свои формы, объемы и даже структуру. Матка способна принимать несколько расположений.

Каждое из положений, занимаемое маткой, имеет ряд особенностей и серьезных ограничений:

  1. Антифлексио . Расположение матки встречается наиболее чаще. Матка располагается в центральной части малого таза. Часть дна матки обращается к верху и кпереди, а одна из важных составляющих – влагалищная часть шейки – книзу и кзади. Надо отметить, что при таком расположении, между шейкой и телом матки имеется угол тупого вида, открытого кпереди. Подобное расположение матки нередко наблюдается у женщин и является самым распространённым явлением.
  2. Антеверзио. Еще одно расположение матки, встречающее не реже у женщин. В действительности, как таковых отличий от расположении анифлексио нет. Стоит отметить, что имеются отличия по отношению к телу и шейке матки. При антеверзио, как тело матки, так и ее шейка находятся абсолютно на одном уровне.


Другие расположения матки

Значительно реже встречаются расположения, как:

  • Гиперантефлексия;
  • Ретрофлексио;
  • Летерофлексия
Что же представляют собой такие расположения матки?
  1. Гиперантефлексия – это расположение матки, при котором тело матки особенно отклоняется кпереди. Укол кзади открыт.
  2. Ретрофлексио – такое место нахождения и называют загибом матки;
  3. Летерофлексия – состояние, характеризующиеся отклонением относительно оси как влево, так и вправо.

Как видно, любой вид расположения имеет свои особенности. Нельзя не отметить то, что матка способна как перекручиваться, так и совершать повороты вокруг оси продольного типа.

Состояние и местонахождение матки напрямую зависит от связочного аппарата, ослабевание которого происходит как в более молодом возрасте, так и у женщин стершей возрастной категории. Ослабевание связочного аппарата бывает в силу патологий, перенесенных женщиной или же операционных вмешательств. Ослабевание связочного аппарата влечет в первую очередь опущение органа, а также и вовсе выпадение. Это может повлечь ряд негативных последствий и лишить женщины самой важной возможности – стать матерью.

Диагностика

Диагностика – важный этап при любой патологии. Важно своевременно диагностировать патологию для успешного лечения и получения максимального эффекта.

Этапы диагностики:


Загиб матки и зачатие

К сожалению сегодня не все женщины здоровы и не имеют никаких заболеваний. Чаще женщины стали обращаться в соответствующие медицинские учреждения по причине отсутствия возможности зачатия плода. Почему так бывает? Ряд заболеваний, к которым не устойчив организм, а также экология и окружающая среда возможно делают свое дело. Унывать не стоит и необходимо выявить причину и устранить ее.

Женщины с загибом матки – не самая первая группа риска, забеременеть у которых отсутствует возможность. Девушки с такими особенностями могут зачать и родить малыша, но для этого потребуется приложить немало сил.

Необходимо знать ряд тонкостей:

Оптимальные позы для зачатия при загибе матки

Загиб матки – достаточно частое явление, встречающиеся практически у каждой второй женщины.

Надо отметить, что такой диагноз, как загиб матки – вовсе не приговор бесплодия для пары. Это особенность органа, способная к существованию у каждой женщины.

Бытует мнение, что при загибе матки женщины не смогут зачать ребенка и родить его. Это миф, в который верить ни в коем случае нельзя.

При таком диагнозе как загиб матки, парам удается стать счастливыми родителями.

Если попытка зачать ребенка не увенчались успехом, необходимо использовать еще один способ, помогающий зачать малыша. Существуют специальные позы, позволяющие женщине зачать ребенка. В силу того, что матка имеет особенности строения, парам рекомендовано придерживаться определённых правил.

Самое главное правило – добиться того, чтобы продвинулась вперед.

При загибе матки кзади, требуется придерживаться таких поз в сексе:

  • Поза коленно-локтевого типа. Такая поза способствует более глубокому проникновению.
  • Поза сзади. Девушка в период совершения полового акта, может как встать на колени, так и лечь на бок. В такой позе, матка будто накланяется вперед, чего и необходимо достичь женщине для успешного зачатия малыша.
  • Поза классическая. При такой позе, предполагается, что женщина находится снизу, а мужчина сверху. В таком случае матка максимально сближается с половым органом мужчины. Миссионерская поза одна из успешных для зачатия. Женщины также можно положить одеяло или подушку под бедра для достижения наиболее высокого результата. Приподнятая поза бедра позволяет увеличить шансы забеременеть женщине.

При зачатии с диагнозом загиба матки кзади позы должны быть выбраны в большинстве случаев горизонтального типа. Вертикальные или же сидячие позы для женщины могут стать лишь разнообразием для сексуальной жизни пары, но, увы, не для зачатия малыша.

Загиб матки и беременность

Загиб матки и беременность – возможно ли это? Многие женщины, услышав диагноз загиб матки, начинают паниковать раньше времени, а зря.

Беременность и загиб матки это вполне совместимые два понятия, о которых необходимо более конкретно поговорить. Все зависит, прежде всего, от того, насколько сильно выражен загиб матки.

Большее значение имеет как раз такая патология, как загиб. Ведь чем сильнее выражен загиб матки, тем труднее женщины забеременеть.

Однако это не говорит о том, что у женщины нет такой возможности вообще. Как уже было сказано ранее, для успешного оплодотворения, необходимо выбрать соответствующую позу для пары.

Безусловно, такие позы требуется тем женщинам, у которых сильно выражен загиб. При незначительных изменениях, придерживаться определенных поз в период полового акта нет необходимости.

Лечение загиба матки

Лечение – один из самых важных процессов при обнаружении патологии загиба матки. Каким оно бывает и каким лучше всего воспользоваться? Говоря о том, что загиб матки у женщин может быть выражен по-разному, надо отметить, что и лечение необходимо подбирать абсолютно разного вида.

Лечение может быть двух видов:

  • хирургическое;
  • медикаментозное;
  • гимнастические упражнения;
  • физиолечение;
  • гинекологический массаж.

Упражнения

Упражнения направлены, прежде всего, на укрепление мышечно – связочного аппарата тазовой части. Для достижения необходимого результата, необходимо регулярно выполнять упражнения.

Гимнастика может быть следующей:

  • ползки на локтях при спущенном животе вниз с раздвинутыми ногами;
  • встать на четвереньки, выпрямив руки поднимая при этом по очереди каждую ногу;
  • упражнение «кошка» подразумевает прогиб спин вверх и вниз поочерёдно.

Упражнения Кегеля при загибе матки

Упражнение Кегеля самая распространенная методика упражнений при загибе матки. Суть заключается в том, что выполняя упражнения, у женщины укрепляются мышцы таза, что и необходимо добиться при такой патологии, как загиб матки. Выполнять такие упражнения можно дома, не отвлекаясь от домашних дел. Формирование крепкой мускулатуры поспособствует предотвращению спаечного процесса.


Хирургический метод лечения

Из хирургических методов лечения наиболее эффективна и востребована на сегодняшний день .

Если же у пациентки был диагностирован спаечной процесс, который, как известно, достаточно сложный, то в таком случае назначает полостная операция.

К хирургическим методам лечения прибегают тогда, когда избавиться от недуга иными путями не предоставляется возможным и патология становится барьером для зачатия ребенка.


Медикаментозное лечение

Медикаментозное лечение представление собой комплекс мер, направленных на улучшение состояния, а также восстановление иммунной системы. Медикаментозное лечение подразумевает прием витаминов (они необходимо для любой женщины), а также прием препаратов гормонального характера.

Гормон способствует восстановление гормонального баланса, а также обладают терапевтическим характером. Витамины в свою очередь поспособствуют укреплению иммунитета, а также помогут усвоению медикаментов и облегчению для пациента и его здоровья.

Противовоспалительное лечение при наличии воспалительного процесса

Зачастую причиной образования загиба матки являются воспалительные процессы, лечение которых крайне необходимо. В таком случае назначается медикаментозное лечение.

Пациентке назначаются лекарства антибактериального, гормонального, антибиотического характера.

Кроме того, в комплекс лечения входит прием витаминов и препаратов, направленных на улучшение состояния спаечного процесса.

Такие лекарственные препараты способствуют, прежде всего, восстановлению иммунной системы, а также нейтрализации спаечного процесса и укрепении структуры матки, что немаловажно при такой патологии.

Физиолечение

Физиолечение используется в комплексе с приемом лекарственных препаратов. Как правило, такие процедуры показаны не всем и оказывают их исключительно в медицинских учреждениях соответствующего характера. Самостоятельное лечение при помощи физио аппаратов запрещено.

Массаж назначается в случаях, когда наблюдается дряблость и отсутствие тонуса мышц малого таза.

Массаж является лишь разновидностью к пути для достижения упругости и достижения крепкой мускулатуры.

Процедуру проводит исключительно медицинский сотрудник, который и определяет частоту посещений.

Массаж осуществляется в гинекологическом кресле, одной рукой массируя стенки влагалища, а другой определенные зоны живота пациентки.

Забеременеть при загибе матки сегодня вероятно. Данное анатомическое отклонение не лишает радости материнства.

Но стоит помнить, что существует несколько стадий болезни. И чем тяжелее форма, чем сложнее будет добиться беременности при загибе матки.

Если у девушки нет никаких анатомических патологий, то матка размещается посередине малого таза. Она должна быть параллельно влагалищу девушки.

При нормальном расположении она закрепляется связками плотной соединительной ткани. Это позволяет ей находиться в одной плоскости с влагалищем.

Если же детородный орган сдвинут или наблюдается перегиб, то это называется загибом.

Причины загиба матки

Различают несколько разновидностей загиба.

Ретрофлесия –загибание по направлению к прямой кишке, то есть кзади.

При антифлексии появляется прямой угол, происходит выворачивание к мочевому пузырю.

Гиперантефлексия характеризуется резким загибом, при котором матка складывается вдвое.

Одной из редких разновидностей патологии является антеверзия. В этом случае смещаются все органы.

Летерофлексия – самая распространённая форма анатомического отклонения, которая характеризуется загибом в одну из сторон малого таза.

Данная патология бывает врождённой и приобретённой.

Часто причиной появления данной проблемы становятся не вовремя вылеченные инфекции, которые передаются половым путём.

Также образоваться такая патология может из-за:

  1. Ранее перенесённого кесарево сечения.
  2. Воспаления органов детородной системы.
  3. Слабости соединительных тканей матки.
  4. Чрезмерных физических нагрузок.
  5. Наличия злокачественных опухолей.
  6. Болезней, развивающихся в малом тазу.

Симптомы и диагностика неправильного положения матки

Девушке самостоятельно не удастся диагностировать у себя подобного рода патологию.

О её наличии сигнализируют такие симптомы, как:

  • Болевые ощущения во время менструации.
  • Присутствие сгустков в менструальной крови.
  • Ощущение дискомфорта при половом акте.
  • Частые запоры.
  • Учащённое мочеиспускание.
  • Гнойные выделения из влагалища.

Для диагностики данного недуга женщине необходимо посетить гинеколога.

Врач посредством пальпации (прощупывания) обнаруживает неподвижность детородного органа по причине наличия спаек с мускулатурой.

Если гинеколог не может самостоятельно определить или не уверен в своих подозрениях, то пациентка отправляется на прохождение трансвагинального ультразвукового исследования.

Лечение патологии

Для лечения данной патологии применяются антибактериальные и противовоспалительные препараты.

В комплексе с вышеуказанными средствами прописываются гомеопатические и гормональные лекарства.

Также для улучшения состояния назначаются физиотерапевтические процедуры, которые способствуют уменьшению количества спаек, фиксирующие неправильное расположение детородного органа.

Метод оперативного вмешательства актуален только в случаях, когда матка согнута пополам или спайки не убираются всеми доступными способами.

Как забеременеть при загибе матки

Сегодня многие считают, что забеременеть при загибе матки невозможно. Но это не так. Данная патология не преграда к зачатию, хотя и усложняет его процесс.

Если загиб матки, то забеременеть сложнее по причине изменения её шейки. Она служит «коридором» для сперматозоидов. При загибе шейки образуется острый угол.

  • Преодолеть такое положение сперматозоидам очень сложно, многие из них погибают, поэтому в цервикальный канал попадает лишь малое их количество, что снижает шансы на оплодотворение вышедшей из яичника яйцеклетки.

Поэтому для наступления беременности при загибе шейки матки и самого детородного органа нужно в сексе выбирать правильные позы для зачатия и заниматься специальными упражнениями.

Гимнастика

Женщинам нужно сокращать и расслаблять мышцы тазового дна по 10 подходов. Делается до 4 раз в день.

Оптимальные позы для секса

Загиб кзади

Патология снижает вероятность оплодотворения.

Забеременеть при загибе шейки матки кзади можно в таких позах:

  1. Стояние на коленях.
  2. Сзади.
  3. Миссионерская.

Первая поза подразумевает расположение женского тела под углом в 45 градусов.

Девушке нужно стать на четвереньки, затем плавно опустить туловище, таз оставив приподнятым. Коленки должны быть слегка сдвинуты. Партнёр занимает место сзади женщины.

Поза сзади: девушка становится на четвереньки, опираясь коленями и ладошками. Таз слегка приподнимается. Это обеспечивает наклон шейки матки.

Попавшие сперматозоиды быстрее дойдут и смогут оплодотворить яйцеклетку. Для большей эффективности позиции девушке нужно опираться не на руки, а на локти.

Миссионерская поза, она же классическая обеспечивает максимальное сближение женского детородного органа с мужским половым членом. Такая позиция подразумевает положение женщины на спине, ноги расставлены или немного приподняты вверх.

Мужчина сверху. Для большей эффективности рекомендуется под бёдра девушки положить подушку, что обеспечит наклон шейки, а значит сперматозоидам будет легче «добираться» до яйцеклетки.

Беременность при загибе матки кзади может не наступить, если заниматься сексом в позициях, где партнёрша принимает вертикальные позы сверху. В таких позах большая часть семенной жидкости вытекает из влагалища, поэтому шансы на оплодотворение уменьшаются.

Загиб кпереди

Забеременеть при загибе матки кпереди можно в позе раком.

В этом случае максимально опускается верхняя часть туловища. Женщине идеально скрестить руки и опираться головой на них.

Заключение

Независимо от того, какой загиб матки у женщины кпереди или кзади, после полового акта рекомендуется полежать на спине 30 60 минут.

Также желательно отдохнуть с поднятыми вверх ногами.

Такая поза называется «берёзка». Для большего удобства ноги облокачиваются на стену или другую высокую поверхность.

Видео: Загиб матки и беременность

Матка — DM Clinic

Матка, uterus (metra), представляет непарный полый гладкомышечный орган в полости малого таза, женщины, грушевидной формы: широкая часть ее вверх и вперед, узкая — вниз. Длина матки у половозрелой нерожавшей женщины 7–8 см, у рожавшей — 8–9,5 см, ширина на уровне дна 4–5,5 см; масса колеблется от 30 до 100 г, в зависимости от периода жизни и индивидуальных особенностей. В матке различают шейку, тело и дно. Шейка матки у разных индивидуумов может плавно переходить в тело или быть резко обособленной; длина ее достигает 3 см.

Верхняя часть матки называется дном матки, Hindus uteri. Оно имеет выпуклую форму, а по бокам от него входят маточные трубы. Участок тела матки, куда входят трубы, именуется рогами матки. Полость матки, cavum uteri,  имеет длину 6–7 см и треугольное сечение; величина полости различна у нерожавших и рожавших. У нерожавших женщин боковые стенки резче вогнуты внутрь полости.

Передняя стенка тела матки тесно соприкасается с задней стенкой, а потому полостьб на сагиттальном разрезе выгоядит как щель. Внизу она сообщается с каналом шейки матки, canalis cervicis uteri, имеющим форму веретена. Канал выходит во влагалище отверстием матки, ostium uteri.

Стенка матки имеет трехслойную структуру. Она состоит из следующих трех тканей: наружной — серозной оболочки, tunica serosa (perimetrium), подсерозной основы, tela subserosa, средней — мышечной, tunica muscularis (myometrium), и внутренней — слизистой, tunica mucosa (endometrium). 

Нижний отдел матки — шейка — является естественным переходом к влагалищу. Матка в полости малого таза изогнута вперед, anteversio, в результате чего ее тело наклонено над передней поверхностью мочевого пузыря. Кроме того, матка может быть отклонена от срединной линии в одну из сторон, правую или левую, lateropositio dextra или lateropositio sinistra. Этот наклон может меняться в зависимости от наполнения мочевого пузыря или прямой кишки. Матка удерживается в своем положении связками: парной круглой связкой матки, правой и левой широкими связками матки, парными прямокишечно-маточными и крестцово-маточными связками. 

У верхнего края широкой связки расположена маточная труба. Ниже ее ампулы отходит брыжейка яичника, mesowrium, а книзу от ее медиальной части находится собственная связка яичника, lig. ovarii proprium. Участок широкой связки между трубой и брыжейкой яичника называется брыжейкой маточной трубы, mesosalpinx. В ней, в свою очередь, находятся fimbria ovarica, epoophoron и paraoophoron. Верхнебоковой край широкой связки образует еще одну связку, которая подвешивает яичник, lig. suspensorium ovarii.

Загиб матки кзади

Матка — подвижный орган, и свое положение она может менять под воздействием различных факторов. По физиологической норме располагается она между мочевым пузырем и прямой кишкой. Загиб матки кзади — распространенная патология, которая носит название ретрофлексия.

Что такое ретрофлексия

Загиб матки кзади — признак атипичного расположения в брюшной полости. Согласно норме, относительно шейки матки образует угол, открытый кпереди. Благодаря этому орган при необходимости может смещаться, чтобы не давить на полные кишечник или мочевой пузырь.

Если матка отклонена назад — значит, образуется «неправильный» угол, направленный в сторону позвоночника. На протяжении долгого времени нарушение может быть незаметным для самой женщины, но возможно развитие серьезных осложнений. К ним относятся опущение или выпадение матки.

Из-за скрытого течения патологии женщина зачастую узнает о том, что произошло отклонение матки кзади, во время профилактического осмотра или при выяснении причин бесплодия. При сильном отклонении или загибе сперматозоиды не могут проникнуть к нужной части органа для зачатия.

Виды патологии

Загиб кзади может быть подвижным или фиксированным. В первом случае орган может самостоятельно возвращаться в нормальное положение, при фиксированной ретрофлексии матка постоянно отклонена по отношению к шейке. При попытках врача исправить патологию вручную возникает резкий болевой синдром.

Подвижный загиб кзади корректируется посредством массажных техник и определенных физических упражнений. Зачатие при нем возможно: женщине достаточно принять позу, которая «вернет» матку к правильному физиологическому положению – лежа на животе. Фиксированное отклонение требует более серьезных манипуляций, вплоть до хирургического вмешательства.

Если матка имеет врожденный загиб кзади, патология часто сопровождается болезнями, исключающими возможность зачатия.

Возможные причины

Загиб матки кзади может быть первичным (врожденным) и вторичным (приобретенным). Нарушение формируется еще в период внутриутробного развития девочки. Если матка с загибом назад отклонена незначительно, лечение не нужно. Женщина может забеременеть, и процесс вынашивания плода вернет орган на место.

Приобретенный загиб кзади развивается из-за воздействия патологических процессов и нарушений в организме. Так, к подвижному отклонению приводят:

  • растяжение связок;
  • сниженный тонус мышц таза;
  • травмы;
  • резкая потеря веса;
  • недостаточное питание;
  • инфекции после родов или абортов;
  • недостаток физической активности;
  • чрезмерная физическая нагрузка.

Если диагностирован фиксированный загиб матки кзади, это значит, что нарушена подвижность органа по отношению к остальным тазовым органам. Наиболее распространенной причиной считается спаечный процесс в малом тазу.

Также вызвать постоянный загиб могут:

  • осложнения после родов;
  • воспалительные процессы в прямой кишке;
  • регулярные запоры;
  • хронические заболевания инфекционного или воспалительного характера.

При своевременном лечении большинства заболеваний загиба матки кзади можно избежать.

Симптоматика

Большинство женщин, на протяжении длительного времени не ощущают, что матка отклонена кзади. Специфической симптоматики у патологии нет. Фиксированный загиб проявляется:

  • обильными менструациями;
  • запорами;
  • давящей болью внизу живота;
  • дискомфортом во время полового акта;
  • обильными выделениями с неприятным запахом.

Подобные симптомы характерны для ряда других заболеваний мочеполовой системы. Обычно пациентки обращаются к гинекологу с подозрениями на цистит или вагинит, и только во время исследования обнаруживается, что матка отклонена кзади.

Беременность при загибе

Нефиксированный загиб не мешает половой жизни. Но сперматозоидам сложно добраться до нужного места, а значит, вероятность оплодотворения в разы снижается. При переходе к фиксированному типу нарушения возможно необратимое физиологическое бесплодие.

Наиболее благоприятной для зачатия считается коленно-локтевая поза. После завершения процесса желательно несколько минут полежать на животе. Это приводит к постепенному выпрямлению матки, что увеличивает шанс оплодотворения.

При фиксированном загибе шансы на успешное зачатие в разы снижаются. Даже если беременность наступила, она требует особого контроля со стороны врачей: шансы успешно выносить ребенка, очень малы. Гинекологи рекомендуют пройти полное медицинское обследование еще на этапе планирования беременности, чтобы своевременно выявить все нарушения.

Диагностика

При подозрении на то, что матка отклонена кзади, специалист должен провести двуручное обследование. Во время этого во влагалище вводятся пальцы одной руки, пока вторая обследует поверхность низа живота. Между пальцами прощупываются внутренние органы.

Во время такого исследования гинеколог определяет положение матки и наличие новообразований в области малого таза. Если выясняется, что матка отклонена кзади — значит, необходимы другие манипуляции. Врач попытается вернуть ее в правильное положение, при подвижном загибе это произойдет без особых проблем.

При выявлении очевидных патологий расположения органов пациентка получает направления на дополнительные исследования. Сделать необходимо компьютерную томографию и УЗИ органов малого таза. Если обнаружатся спайки, воспаление или опухоли, подбирается необходимая терапия.

Подвижный загиб матки без неприятных симптомов часто не требует лечения.

Лечение

В особом лечении нуждается «запущенный» загиб матки кзади, при котором возможно появление бесплодия, а также осложнений в виде выпадения или опущения органов. Основные терапевтические мероприятия направлены на коррекцию первопричин нарушения.

Показаниями к врачебному вмешательству относятся также:

  • дисменорея;
  • бесплодие;
  • постоянная боль внизу живота;
  • постоянные запоры;
  • воспаления;
  • спайки.

Характер терапии зависит от причин, по которым матка отклонена кзади. При обоих типах отклонения рекомендуются:

  • витаминные комплексы;
  • физические упражнения;
  • массажи.

Курс упражнений подбирается индивидуально инструктором ЛФК.

Среди основных задач — повысить тонус мышц, ускорить обменный процесс, улучшить кровоснабжение тканей таза.

При загибе, вызванном воспалительными заболеваниями, необходим курс медикаментозной терапии. Используются противовоспалительные и антибактериальные средства, дополнительно идет общеукрепляющее воздействие на организм. Спайки убираются путем хирургического рассечения путем лапароскопии.

Профилактика

Полностью обезопасить себя от загиба матки кзади невозможно. Но существует ряд рекомендаций, которые помогут снизить вероятность развития этой патологии. Рекомендуется:

  1. Отказаться от работы, связанной с постоянным нахождением на ногах и чрезмерными физическими нагрузками.
  2. Не допускать застоя крови в органах малого таза: пассивный образ жизни недопустим, необходима ежедневная физическая активность.
  3. Важно своевременно обращаться к врачам, чтобы не допустить переход болезней из острой фазы в хроническую.
  4. «Ставка» делается на общеукрепляющие физические упражнения, а не на силовые тренировки.
  5. Желательно вести здоровый образ жизни и отказаться от вредных привычек.
  6. Питание должно быть сбалансированным и полноценным.
  7. Жесткие диеты под запретом: резкая потеря веса вредит всему организму.

При легком течении заболевания прогноз благоприятный. Курс специального массажа матки позволяет при загибе первой степени вернуть орган на место и беременность наступает быстро. При наличии спаек в малом тазу и хронических воспалительных процессов нередко наблюдается рецидив.

Наблюдения уролога: лечение камни в почках

Мини-перкутанная нефролитотрипсия справа

Пациентка МО., 48 лет.

Диагноз: мочекаменная болезнь, камни почек. Стеноз лоханочно-мочеточникового сегмента слева. Хронический пиелонефрит. Киста правой почки.

Клиническая картина: тупая боль в пояснице у женщины.

Данные анамнеза: считает себя больной с 2007 года, когда впервые на фоне почечной колики слева самостоятельно отошел конкремент коричневого цвета максимальным размером 8 мм. В последующем урологом не наблюдалась. С 22.11.14. отмечает тупую боль в пояснице области слева. При обследовании выявлен камень левой почки, дилатация ЧЛС слева. Консультирована в клинике урологии, госпитализирована для оперативного лечения.

Данные УЗИ: в проекции лоханки и нижней чашечки визуализируются гиперэхогенные включения размерами 16 мм и 11 мм с четкой акустической тенью. Проекции нижней групп чашечек также визуализируются гиперэхогенные включения размером до 3 мм без четкой акустической тени.


Данные МСКТ: с контрастированием в средне сегменте правой почки определяется киста размером 13 мм. В лоханке левой почки визуализируется конкремент треугольной формы размерами 16х13 мм плотностью 1998 ед.Н. В средней чашечке левой почки конкременты размерами 11 мм плотностью 1161 ед.Н. В нижней и средней группах чашечек левой почки, а также в нижней чашечке правой почки визуализируются конкременты размерами от 1 до 4 мм. ЧЛС слева расширена: чашечки до 19 мм, лоханка до 19 мм. Отмечается утолщение стенки лоханки левой почки до 9 мм, лоханочно-мочеточниковый сегмент сужен до нитевидного на протяжении 11 мм. Левый мочеточник заполняется контрастным препаратом в позднюю отсроченную фазу, стенка его утолщена в верхней трети до 5 мм, контур его неровный, тяжистый за счет воспалительного перипроцесса. Матка увеличена в размере, отклонена кзади.




С целью восстановления оттока мочи из левой почки, предотвращения развития острого обструктивного пиелонефрита показано оперативное лечение, направленное на избавление больной от камней левой почки. Учитывая размеры, количество и плотность конкрементов, а также подозрение на стеноз ЛМС слева, показана перкутанная нефролитотрипсия слева. В ходе операции осмотрена зона ЛМС, необходимости в выполнение эндопиелотомия не было.

Камни полностью удалены. Время оперативного пособия составила – 65 минут. Осложнений ни во время операции, ни после не отмечалось. После операции нефростомический дренаж удален на вторые сутки, после выполненного антеградного контрастного рентгенологического исследования. На третьи сутки пациент была выписана домой.

Задать вопрос

паттернов отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей | Репродукция человека

Аннотация

ИСТОРИЯ: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку. Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши.Методы. Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопное положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ . Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2–28-е сутки после операции. РЕЗУЛЬТАТЫ: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление — с 10-го по 15-й день.На 28 день наблюдались некроз и фиброз. Плотность Т-лимфоцитов (CD3 + ) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке был снижен с 15-го дня. Заключение. Была охарактеризована модель на мышах для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки. Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день. Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов на этой модели.

Введение

Трансплантация матки в настоящее время разрабатывается в качестве потенциального метода лечения пациентов с абсолютным бесплодием из-за фактора матки (Altchek 2003; Brännström et al. , 2003a, b). Пациенты, которые могут быть рассмотрены для этой процедуры, — это женщины с сохраненными яичниками, но с отсутствием матки из-за врожденной аномалии Мюллера или перенесенной гистерэктомии. Кроме того, для этой процедуры могут быть рассмотрены пациенты с сохраненной, но нефункционирующей маткой в ​​отношении имплантации эмбриона или сохранения беременности (например, из-за лейомиомы или внутриматочных спаек) (Brannstrom et al., 2003b). Недавно сообщалось о случае трансплантации матки человеку у женщины, которая ранее потеряла матку во время послеродовой гистерэктомии (Fageeh et al. , 2002). Эта трансплантированная матка выжила только 99 дней, несмотря на первоначальную иммуносупрессию циклоспорином А, азатиоприном и преднизолоном, впоследствии усиленную антитимоцитарным глобулином. Таким образом, мы считаем, что эта попытка была преждевременной, поскольку важные вопросы, такие как механизмы отторжения матки, подходящие иммунодепрессанты и переносимость трансплантированной матки в отношении беременности, не были протестированы ни на одной животной модели.

Когда рассматривается новый тип органа для трансплантации, хирургическая техника, процесс отторжения этого конкретного органа и средства подавления отторжения должны быть тщательно исследованы. Механизм отторжения матки особо не исследовался, хотя сообщалось об аллогенной трансплантации у собак (Yonemoto et al. , 1969; Scott et al. , 1970; Wingate et al. , 1970; Paldi и др. , 1975), кролик (Confino и др., 1986) и макаки резус (Scott et al. , 1971) несколько десятилетий назад. В этих отчетах просто делается вывод о том, что произошел отказ, и они не характеризуют процесс в каких-либо подробностях. Недавно были представлены данные о методах трансплантации en bloc матка – яйцевод – яичник у крыс, и было заявлено, что тяжелое отторжение произошло в течение 2 дней (Lee et al. , 1995; Jiga et al. , 2003; Motoc и др. , 2003).

Наша группа решила разработать модель трансплантации матки на мыши (Racho El-Akouri et al., 2002), поскольку этот вид имеет очевидные преимущества перед другими моделями животных в этом исследовании из-за его хорошо охарактеризованной репродуктивной физиологии и иммунологии, а также доступности инбредных линий мышей и линий мышей с удаленным геном. В модели трансплантации матки сингенной мыши наблюдаются нормальные показатели имплантации и беременности (Racho El-Akouri et al. , 2003).

Увеличиваются знания о механизмах специфичности органа в отношении интенсивности и типа отторжения.Матка с ее особой местной иммунологией во время беременности, когда полуаллогенный плод выживает, несмотря на присутствие материнских Т-клеток, специфичных для унаследованных от отца антигенов гистосовместимости, может иметь уникальные особенности. Поскольку матка может обладать особыми иммунологическими свойствами также в отношении местных механизмов отторжения, важно детально изучить процесс отторжения в этом органе, а затем разработать способы контроля отторжения или стимулирования толерантности как у беременной, так и у беременной. небеременное состояние.Иммуноопосредованное отторжение трансплантата будет основной проблемой при трансплантации матки, как и при трансплантации других органов.

В настоящем исследовании паттерн отторжения пересаженной матки на полностью аллогенной модели мышей охарактеризован несколькими методами.

Материалы и методы

Животные

инбредных самок мышей C57BL / 6 и BALB / c (M&B, Ry, Дания) в возрасте 6–8 недель содержали в контролируемых условиях (21–23 ° C, относительная влажность 50–60%, освещение между 07.00 и 19.00 ч) с водой и гранулированным кормом ad libitum . Тридцать две из 63 оперированных мышей-реципиентов были исключены из исследования из-за немедленных послеоперационных осложнений. Эти 32 животных были потеряны либо из-за кровотечения ( n = 11), либо из-за того, что пересаженная матка не показала кровоток через маточную артерию и / или вену ( n = 21) при немедленном осмотре после сосудистого анастомоза. было выполнено. Эксперименты были одобрены местным комитетом по этике животных и проводились в соответствии с принципами и процедурами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Национальные институты здравоохранения, США).

Донорская операция Донорами матки служили

мышей BALB / c. Изоляцию одного рога матки, включая шейку матки и соединительную сосудистую сеть, проводили, как описано ранее (Racho El-Akouri et al. , 2002, 2003). Причина использования одностороннего рога матки, а не всей матки заключалась в том, что односторонняя процедура позволила изолировать тазовую сосудистую сеть на дорсальной стороне матки (Racho El-Akouri et al., 2002). Вкратце, под анестезией изофлураном (2%) правый рог матки и шейка матки вместе с питающими и дренирующими сосудами (правые маточные сосуды, правые гипогастральные сосуды, правые общие подвздошные сосуды, полая вена и аорта) были аккуратно изолированы с помощью микрохирургической диссекции. Другие ветвящиеся сосуды (правые нижние брыжеечные сосуды, правые нижние надчревные сосуды, левые общие подвздошные сосуды, каудальная артерия, правые наружные подвздошные сосуды, правые половые сосуды и поясничные сосуды) прижигали и разрезали для предотвращения утечки из образца.Мочевой пузырь был удален, и шейка матки была рассечена ниже места ее прикрепления к мочевому пузырю. Затем аорту и полую вену отделяли от уровня разветвления почечных сосудов на 3–4 мм каудально. Лигатуру накладывали краниально на верхушку правого рога матки, и матку отделяли от яйцевода и яичника и отделяли от дорсальной брюшины. Аорта и полая вена были привязаны каудально к разветвлению сосудов яичника, и после канюляции аорты (игла 30 G) и разреза в полую вену образец осторожно промыли 0.154 моль / л NaCl (4 ° C) с добавлением 100 МЕ / мл сульфата гепарина (Leo Pharma, Мальме, Швеция) и 0,2 мг / мл ксилокаина (Astra Zeneca, Гетеборг, Швеция) для удаления крови из матки. Затем матку выдерживали в 0,154 моль / л NaCl (4 ° C) в течение 20 минут во время хирургической подготовки животного-реципиента (см. Ниже) и подготовки пробы на заднем столе.

Операция получателя Реципиентами маточного трансплантата служили

мышей C57BL / 6. Хирургическое вмешательство (под анестезией изофлураном) было выполнено через лапаротомный разрез по средней линии после подкожного введения 15 МЕ гепаринсульфата.Были мобилизованы аорта и полая вена, и кровоостанавливающие зажимы были помещены вокруг сосудов en bloc . Анастомозы «конец-в-бок» аорта-аорта и полость-полость выполнялись с использованием техники прерывистого и непрерывного (нейлон 11-0) швов, соответственно. Затем шейку трансплантата выводили наружу через круговой разрез на правой стороне живота и подшивали к коже для создания стомы. Рубец лапаротомии закрыли и 1 мл раствора, содержащего 0,154 моль / л NaCl и глюкозу (50 мг / мл), вводили подкожно для корректировки потери жидкости и для коррекции любой гипогликемии.

Общая морфология и лазерная доплеровская флоуметрия

Мышь анестезировали и выполняли лапаротомию по средней линии. Первоначально матки и стомы реципиентов исследовали с помощью операционного микроскопа на 2, 5, 10, 15 и 28 день после операции во время анестезии. Затем для оценки кровоснабжения тканей использовался метод лазерной доплеровской флоуметрии (Öberg, 1990). Этот метод ранее использовался для исследования кровотока в яичниках крыс (Zackrisson et al., 2000) и матки мыши (Racho El-Akouri et al. , 2002) в определенное время (см. Выше). Лазерный доплеровский мини-зонд (Perimed, Järfälla, Швеция) помещали в просвет как пересаженной, так и родной матки для регистрации кровотока (расходомер Periflux 5000; Perimed) в течение 2–3 минут. Кровоток выражали в произвольных единицах перфузии (ПЕ).

Световая микроскопия и иммуногистохимия

Мышей убивали из-за смещения шейных позвонков во время анестезии в определенное время (см. Выше).Родная матка и матка с пересаженной маткой были рассечены и рассечены пополам. Одну часть разделенной пополам матки фиксировали в растворе, содержащем 4% параформальдегида в концентрации 0,1 моль / л какодилатного натриевого буфера (pH 7,4). Затем ткань обезвоживали, заливали парафином и делали срезы (~ 4 мкм) для световой микроскопии. Было проведено окрашивание гематоксилином и эозином, эластином – ван Гизоном, ван Гизоном и периодной кислотой – Шиффом. Слайды исследовали под световым микроскопом, и цифровые изображения получали с помощью камеры SPOT ™ (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, США).

Другая половина матки была заморожена в OCT (Sakura Finetek Europe, Zoterwoude, Нидерланды). Эту ткань матки (нативную, трансплантат) 2, 5 и 10 дней после операции делали на срезы (~ 4 мкм), фиксировали в ацетоне в течение 5 минут и затем блокировали 1,5% нормальной кроличьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS; NaCl 0,13 моль / моль / л). л, Na 2 HPO 4 0,015 моль / л, KH 2 PO 4 0,004 моль / л) в течение 30 мин. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным моноклональным антителом (молекулярный комплекс крысиных антимышиных CD-3; BD PharMingen, Сан-Диего, Калифорния, США) при разведении 1: 1000 в PBS и 1.5% нормальная кроличья сыворотка. После трех промывок в PBS срезы инкубировали в конъюгированном с пероксидазой, биотинилированном, адсорбированном мышами кроличьем антикрысином IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) в PBS и реагенте Vectastain ABC (Vector Laboratories) в течение 30 мин. с последующей инкубацией с субстратом пероксидазы диаминобензидинтетрагидрохлоридом в течение 5 мин. Срезы контрастировали гематоксилином. Отрицательный контроль выполняли путем замены первичного антитела на PBS.

Число положительных клеток оценивали путем подсчета количества окрашенных клеток в выровненной сетке (10 × 10 квадратов), занимающих площадь на участке 0.125 мм 2 с использованием объектива 20 × и окуляра 10 ×. В каждой матке подсчитывали пять случайно выбранных областей в миометрии и пять областей считали в пределах эндометрия (определяемого как область от поверхности просвета до самого базального железистого эпителия). Среднее значение этих значений было вычислено, и это значение использовалось в качестве точки данных. Подсчитывали одну секцию от аборигенной и одну секцию от пересаженной матки от каждого из пяти животных в каждой группе. Подсчет проводился независимо двумя наблюдателями, оба не знали протокола лечения.Значения, полученные двумя наблюдателями, различались не более чем на 15%.

Статистический анализ

Непараметрические тесты (ранговый тест Краскела – Уоллиса, тест Манна – Уитни U -тест) использовались при анализе данных, поскольку мы не предполагали нормального распределения точек данных. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Общий вид

Общие результаты по внешнему виду представлены в Таблице I.Визуальный и тактильный осмотр пересаженной матки на 2-й день показал общий вид, сходный с таковым у родной матки. Пульсация в аортальном сегменте трансплантата и кровотечение маточной ткани в норме. На 5-й день у большинства пересаженных маток появились признаки отека и изменения цвета на более красноватый (рис. 1а). Пульсация аорты и кровотечение из ткани матки оставались нормальными. Стомы были мягкими и нормального цвета (рис. 1б). На 10-й день все матки были ненормального цвета, с красноватым или черноватым оттенком.Три из пяти маток имели явно более твердую консистенцию, а кровотечение из ткани матки не наблюдалось ни при одном трансплантате. Ни одна из маток не опухла, но две из пяти показали изменение внешнего вида стомы. Полностью ненормальная текстура и опухоль матки были очевидны на 15-й день (рис. 1c). На этом этапе пульсация аорты присутствовала в четырех из пяти трансплантатов, и большинство стом (четыре из пяти) были сморщены, а слизистая оболочка приобрела более темный цвет (рис. 1d). На 28 день размер матки значительно уменьшился, и они, как правило, были беловатого цвета (рис. 1e) и плотной текстуры.Большинство стом показало заметное сжатие (рис. 1f), а пульсация питающей аорты наблюдалась только в одной из пяти пересаженных маток.

Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день ) после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Гистология и плотность Т-лимфоцитов

На 2-й день гистологический вид нативной и пересаженной матки был схожим, с небольшими популяциями воспалительных клеток и минимальным отеком (рис. 2a и b).

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативной (a, e, j) и привитой (b – d, f – i) матки. . В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а). В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка).В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации. Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h).Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативного (a, e, j) и привитого (b – d, f – i) матки. В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а).В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка). В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации.Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h). Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

На 5 день появились признаки увеличения количества воспалительных клеток в мышечном слое пересаженной матки, а также отек (рис. 2c). Кроме того, разбросанные лимфоциты были обнаружены на эпителиальной стороне базальной пластинки как железистого, так и просветного эпителия.Также наблюдался застой крови в мелких сосудах (в основном венулах) (рис. 2с). Однако не было никаких свидетельств эндартериита артерий или эндотелиалита более крупных вен.

На 10-й и 15-й дни у животных двух групп характерные черты частично совпадали. На 10-й день матка была сильно воспалена по всей стенке матки, и в железистом эпителии присутствовало множество лимфоцитов (рис. 2d, g). Также наблюдался очаговый апоптоз, но в этот момент некроз не был очевиден.Кровеносные сосуды были переполнены, и были признаки эндартериита в более крупных артериях с лимфоцитами, проникающими в эндотелиальный слой в интиму (рис. 2h). На 15-й день четыре из пяти трансплантатов матки показали гистологические признаки тяжелого отторжения с артериальными тромбами и некротической паренхимой (рис. 2f). Один трансплантат на 15-й день имел гистологический вид, аналогичный таковому на 10-й день. Нативная матка 15-го дня (рис. 2е) выглядела слегка отечной, но без какого-либо видимого увеличения воспалительных клеток.На 28 день ни в одной из пересаженных маток не было жизнеспособной паренхимы. Был массивный центральный некроз и только периферический край фиброзной ткани.

Плотность Т-клеток в миометрии (Рисунок 3a) и эндометрии (Рисунок 3b) была выше в пересаженной матке (Рисунок 2i) по сравнению с нативной маткой (Рисунок 2j) со 2-го и 5-го дня, соответственно. Не было зависимых от времени изменений плотности Т-клеток в миометрии или эндометрии в естественной матке (рис. 3a, b).Однако плотность Т-клеток как в миометрии, так и в эндометрии в пересаженной матке была значительно выше на 5-й и 10-й день по сравнению со 2-м днем ​​(рис. 3a, b).

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и родной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = значимо ( P <0.05, P <0,01) выше, чем у уроженца того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и нативной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0.01) выше, чем уроженец того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Кровоток

Кровоток был значительно ниже в пересаженной матке по сравнению с естественной маткой во все моменты времени (рис. 4). Не было значительных зависимых от времени изменений кровотока в родной матке. В пересаженной матке наблюдалось значительное изменение кровотока с более низкими уровнями на 15 и 28 дни по сравнению со 2 и 5 днями.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по оценке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2 и 5 дней.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по данным лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2-го и 5-го дней.

Обсуждение

Чтобы создать подходящую модельную систему для фундаментальных исследований по вопросу трансплантации матки, мы разработали модель мыши с использованием микрохирургического сосудистого анастомоза и гетеротопического размещения пересаженной матки параллельно родной контрольной матке (Racho El-Akouri et al., 2002). В последнем исследовании хирургическая техника была разработана и отработана с использованием инбредных мышей (B6 CBAF1) в качестве донора и реципиента, а трансплантированная матка показала способность вынашивать беременность (Racho El-Akouri et al. , 2002) и дают потомство с нормальной траекторией постнатального роста (Racho El-Akouri et al. , 2003). В совокупности эти первоначальные исследования продемонстрировали возможность использования этой модели в исследованиях по развитию трансплантации матки в качестве клинической процедуры лечения маточного бесплодия.В настоящем исследовании мы охарактеризовали механизмы отторжения, сделав наблюдения на нескольких уровнях в полностью аллогенной модели трансплантации матки у мышей.

Использовали полностью аллогенную модель мышей с мышами линии BALB / c в качестве доноров матки и мышами линии C57BL / 6 в качестве реципиентов. Причина использования мышей C57BL / 6 в качестве реципиентов заключалась в том, что этот штамм является фоновым штаммом, используемым для развития большинства нокаутных и трансгенных мышей. Мы ожидаем, что эти нокаутные или трансгенные мыши будут использоваться в будущих исследованиях, направленных на более детальное изучение механизмов отторжения в пересаженной матке или в экспериментах по физиологии беременности.Более того, наши предыдущие эксперименты, включающие сингенную трансплантацию, были выполнены на гибридах F1 линии реципиента настоящего исследования, мышей C57BL / 6 и CBA (Racho El-Akouri et al. , 2003). Штамм мышей-доноров (BALB / c), использованный в настоящем исследовании, представляет собой линию мышей-альбиносов, которая наиболее широко используется в биомедицинских исследованиях (Potter, 1985).

Главный комплекс гистосовместимости (MHC) мыши, H-2, имеет свои генетические локусы на хромосоме 17 и гомологичен HLA у человека.Гаплотипы комплекса H-2 определяются комбинацией аллелей генов класса I, класса II и класса III (Klein et al. , 1983). Гаплотипы H-2 мышей BALB / c и C57BL / 6 обозначены как H-2 d и H-2 b соответственно. Эти два гаплотипа демонстрируют несходство по всем аллелям, кроме одного (локус Q1 класса Ib). Таким образом, почти полностью аллогенная ситуация, выбранная в настоящем исследовании, будет соответствовать клинической ситуации донора и реципиента с несоответствием MHC как по основным, так и по второстепенным локусам MHC.

Модель мыши для трансплантации органов становится все более популярной благодаря достижениям в микрохирургии и молекулярной биологии. Однако знания о паттернах отторжения в этих мышиных моделях ограничены. В экспериментах с трансплантацией сердца, почек, печени и кишечника между разными линиями мышей оценивали мышей C57BL / 6 как доноров и мышей BALB / c как реципиентов (Zhang et al. , 1996). Это противоположная ситуация по сравнению с настоящим исследованием, и оценка BALB / c в качестве донора и C57BL / 6 в качестве реципиента не проводилась.В исследовании Zhang et al., Спонтанное принятие было замечено в 72 и 20% аллотрансплантатов печени и почек соответственно. Однако аллотрансплантаты сердца и кишечника были отвергнуты примерно через 9 дней. Результаты были аналогичными, когда BALB / c использовались в качестве доноров для мышей CBA. В исследовании с использованием ортотопической трансплантации каротидных аллотрансплантатов для проверки эффектов иммунодепрессантов мышей C57BL / 6 и BALB / c тестировали как доноры, так и реципиенты (Matsumoto et al. , 2004). Было показано, что отторжение реципиентов C57BL / 6 не подавлялось иммунодепрессантами в такой степени, как у реципиентов BALB / c.Взятые вместе, эти данные показывают, что такой орган, как сердце, который похож на матку в своем большом содержании мышечной ткани, будет отторгнут в течение более короткого времени, чем 9 дней, когда использовались доноры BALB / c и реципиенты C57BL / 6. . Это время отторжения несколько короче, чем то, что было обнаружено в настоящем исследовании в отношении матки.

В настоящем исследовании довольно большая часть животных была исключена из-за немедленных послеоперационных осложнений. Скорее всего, это следствие технически очень сложной диссекции и микрохирургии, связанной с этой процедурой.Неудачи, скорее всего, не были связаны с так называемым иммунологически опосредованным сверхострым отторжением, поскольку аналогичная часть мышей с неудачными трансплантатами наблюдалась в нашем предыдущем исследовании с использованием сингенной модели (Racho El-Akouri et al. , 2003). В ходе исследования было обнаружено, что манипуляции с трансплантатом и время теплой ишемии необходимо было сократить до минимума, чтобы предотвратить эти осложнения.

Макроскопический вид пересаженной матки в настоящем исследовании регистрировали как в отношении слизистой оболочки шейки матки (конец устьиц), так и в отношении внешнего вида серозной поверхности внутри брюшной полости.Первыми очевидными признаками отторжения были припухлость и изменение цвета, которые можно было увидеть только на 5-й день в брюшной полости. Это время соответствует первым гистологическим признакам воспаления. Эти результаты ранних макроскопических признаков отторжения сравнимы с тем, что сообщалось ранее для сердечных аллотрансплантатов крыс, с отеком, наблюдаемым примерно на 4-й день (Hayashi et al. , 1991). Точно так же аллотрансплантаты матки у собак были опухшими и гиперемическими на 4–5 дни (Wingate et al., 1970).

Макроскопические изменения, которые наблюдались в стоме маточного аллотрансплантата, довольно хорошо коррелировали с макроскопическим внутрибрюшным внешним видом, а также с гистологическими признаками отторжения. Первый макроскопический признак отторжения, наблюдаемый в стоме, был на 10-й день, когда наблюдалось заметное увеличение плотности Т-клеток как в эндометрии, так и в миометрии. Таким образом, экстериоризованный шейный конец матки можно удобно использовать для оценки жизнеспособности органа и различных фаз отторжения трансплантатов.Похожая ситуация присутствует в недавно разработанной мышиной модели трансплантации тонкой кишки (He et al. , 1998; Dindelegan et al. , 2003) с аналогичной кожной стомой. Стома также позволит неинвазивным способом получить биопсию из органа для более детальной оценки отторжения с помощью гистологии или иммуногистохимии.

Отторжение пересаженной матки стало макроскопически более очевидным со временем, когда матка стала более черноватой по цвету с полностью ненормальной текстурой.Стомы стали более темными и уменьшились в размерах. На срезах тканей повышенная инфильтрация воспалительных клеток, эндартериит и артериальные тромбы с некротической паренхимой наблюдались на 10-й и 15-й дни. Эти результаты соответствуют тяжелому острому отторжению и аналогичны результатам сердечных аллотрансплантатов на 8-15-й день (Zhang et al. др. , 1996; Ридерер и др. , 2002). Выживаемость аллотрансплантата и тяжесть отторжения зависят не только от несоответствия MHC, но также от конкретного органа, который пересаживают.Таким образом, у мышей наблюдается спонтанное принятие пересаженных печени и почек (Zhang et al. , 1996). С этой точки зрения кажется, что сердце и матка похожи, без спонтанного принятия и с одинаковым временем фаз отторжения.

Эндометрий является частью общей иммунной системы слизистых оболочек, которая обладает особыми характеристиками, обеспечивающими иммунологическую толерантность к сперме и зачатию, при активной защите матки от патогенных бактерий и вирусов.Гистологическое исследование в настоящем исследовании показало, что отторжение эндометрия происходит быстрее, чем отторжение миометрия. Таким образом, ранняя инфильтрация лимфоцитов наблюдалась в железах эндометрия, тогда как инфильтрация лимфоцитами происходила позже в миометрии. Миометрий оказался наиболее устойчивым к отторжению и дольше всех сохранял свою тканевую структуру. Эти результаты сопоставимы с результатами исследования аллотрансплантированной матки, проведенного на собаке (Scott et al., 1970), в котором пересаженная матка показала тотальный некроз эндометрия, но только мононуклеарную инфильтрацию и выраженный отек миометрия через 2 недели после трансплантации. Механизмом раннего отторжения эндометрия, скорее всего, является ранняя инвазия лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение Т-лимфоцитов в эндометрии уже на 2-й день. сравнение пересаженной матки с родной маткой во всех временных точках.В нашем предыдущем исследовании на модели сингенных мышей (Racho El-Akouri et al. , 2002) мы не смогли продемонстрировать каких-либо различий в кровотоке при оценке через 2 и 4 недели после операции. Вполне возможно, что кровоток в этих сингенных трансплантатах был ниже в течение первых недель после трансплантации, а затем кровоток увеличился до уровней, аналогичных таковому в собственной матке. Объяснение этой нормализации кровотока в сингенном трансплантате может заключаться в том, что резко сниженный кровоток из-за отсутствия кровотока в маточных ветвях яичниковой артерии медленно компенсируется кровотоком из маточной артерии.В аллогенной модели настоящего исследования события раннего отторжения будут препятствовать нормализации кровотока и в конечном итоге привести к уменьшению кровотока. Однако в трансплантатах тонкой кишки на мышиной модели не наблюдалось уменьшения кровотока после сингенной трансплантации при оценке с 1 по 8 день, но снижение наблюдалось в аллогенных трансплантатах с 3 дня (Dindelegan et al. , 2003) .

Гистологическим коррелятом этого снижения кровотока в матке, естественно, являются основные периваскулярные изменения, которые наблюдались примерно с 15 дня.Кроме того, тромбоз был замечен в отторженных трансплантатах после аллотрансплантации матки собаке (Wingate et al. , 1970). В этом исследовании тромбоз в основном наблюдался в крупных и средних артериях и венах с 3 по 28 день после трансплантации.

В заключение, аллотрансплантаты матки показывают ранние признаки отторжения с 5-го дня и тяжелое отторжение с 10-го по 15-й день после трансплантации. Паттерн отторжения этой мышиной модели довольно однороден, в отличие от нескольких комбинаций мышиного штамма трансплантации почек, которые показали как спонтанное принятие, так и отторжение (Zhang et al., 1996). Паттерн отторжения матки на мышиной модели, по-видимому, больше всего похож на паттерн трансплантации сердца.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энн Валлин, кафедру акушерства и гинекологии, Академию Сальгренска при Гетеборгском университете, за техническую помощь. Исследование было поддержано грантами Шведского исследовательского совета (№ 11607), медицинского факультета Академии Сальгренска и Исследовательского фонда Ялмара Свенссона.

Список литературы

(

2003

) Трансплантация матки.

Mt Sinai J Med

70

,

154

–162.

, Эль-Акури, Р.Р. и Враннинг, Калифорния (2003a) Трансплантация матки.

евро J Obstet Gynecol Reprod Biol

109

,

121

–123.

, Wranning CA и Racho El-Akouri R (2003b) Трансплантация матки.

Эндокринол клеток Mol

202

,

177

–184.

, Vermesh M, Thomas W. Jr и Gleicher N (

1986

) Несосудистая трансплантация матки кролика.

Int J Gynaecol Obstet

24

,

321

–325.

, Liden H, Kurlberg G, Oltean M, Nilsson O, Aneman A, Lycke N и Olausson M (

2003

) Лазерно-допплеровская флоуметрия надежна для ранней диагностики острого отторжения тонкой кишки у мышей.

Микрохирургия

23

,

233

–238.

, Раффа Х, Джаббад Х.и Marzouki A (

2002

) Трансплантация матки человека.

Int J Gynaecol Obstet

76

,

245

–251.

, Nozawa M, Otsu I., Deguchi H, Kitaura Y и Kawamura K (

1991

) Клеточно-опосредованная цитотоксичность при остром отторжении сердечного аллотрансплантата крысы: иммунологическое и ультраструктурное исследование.

Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол

418

,

41

–50.

, Hart J, Thistlethwaite JR Jr и Newell KA (

1998

) Модифицированная хирургическая модель паратопической трансплантации тонкой кишки у мышей.

J Surg Res

80

,

188

–193.

, Lupu CM, Zoica BS и Ionac M (

2003

) Экспериментальная модель гетеротопической трансплантации матки у лабораторных крыс.

Микрохирургия

23

,

246

–250.

, Фигероа Ф. и Дэвид К.С. (

1983

) Гаплотипы, гены и антигены H-2: второй список. II. Комплекс Н-2.

Иммуногенетика

17

,

553

–596.

, Мао Л., Ван И, Д’Сильва М., Ю Ч., Вольф П., Чанг В.С., Такахаши Э., Чунг Д.Й. и Гиттес РФ (

1995

) Трансплантация репродуктивных органов.

Микрохирургия

16

,

191

–198.

, Hof A, Baumlin Y, Muller M и Hof RP (

2004

) Дифференциальные эффекты эверолимуса и циклоспорина A на динамику альфа-актин-положительных клеток интимы каротидных аллотрансплантатов у мышей.

Трансплантация

78

,

345

–351.

, Джига Л., Ионак М., Райка М., Моток М. и Чиовски С. (

2003

) Предварительные результаты ортотопической трансплантации матки en bloc и яичников у лабораторных крыс.

Clin Exp Obstet Gynecol

30

,

239

–242.

(

1990

) Лазерно-доплеровская флоуметрия. Crit Rev

Biomed Eng

18

,

125

–163.

, Гал Д., Барзилай А., Хампель Н. и Мальбергер Э. (

1975

) Половые органы. Авто- и гомотрансплантация у сорока собак.

Int J Fertil

20

,

5

–12.

(

1985

) История семейства BALB / c.

Curr Top Microbiol Immunol

122

,

1

–5.

R, Kurlberg G, Dindelegan G, Mölne J, Wallin A и Brännström M (

2002

) Гетеротопическая трансплантация матки с помощью сосудистого анастомоза у мыши.

Дж Эндокринол

174

,

157

–166.

R, Kurlberg G и Brännström M (

2003

) Успешная трансплантация матки мыши: беременность и постнатальное развитие потомства.

Hum Reprod

18

,

2024

–2030.

, Сильва-Барбоса С.Д., Родригес М.Л. и Савино В. (

2002

) Местное лечение антиламининовыми антителами изменяет характер отторжения сердечных аллотрансплантатов мыши: корреляция между клеточной инфильтрацией и внеклеточным матриксом.

Трансплантация

74

,

1515

–1522.

, Андерсон В.Р., Клинг Т.Г. и Янноне М.Э. (

1970

) Трансплантация матки собакам.

Gynecol Invest

1

,

140

–148.

, Питкин Р.М. и Янноне М.Э. (

1971

) Трансплантация матки приматов.

Surg Gynecol Obstet

133

,

414

–418.

, Карасевич Э., Вингейт Л., Лаучиан С. и Рэй М. (

1970

) Экспериментальная гомотрансплантация маточно-кубовариальной оболочки на собаке.

Am J Obstet Gynecol

106

,

1171

–1176.

, Du Sold WD и Deliman RM (

1969

) Гомотрансплантация матки и яичников собакам. Предварительный отчет.

Am J Obstet Gynecol

104

,

1143

–1151.

, Mikuni M, Peterson MC, Nilsson B, Janson PO и Brännström M (

2000

) Доказательства участия механизмов, связанных с кровотоком, в овуляторном процессе у крыс.

Hum Reprod

15

,

264

–272.

, Zhu L, Quan D, Garcia B, Ozcay N, Duff J, Stiller C, Lazarovits A, Grant D и Zhong R (

1996

) Характер отторжения аллотрансплантата печени, почек, сердца и кишечника у разных линий мышей комбинации.

Трансплантация

62

,

1267

–1272.

Заметки автора

1 Кафедра акушерства и гинекологии, 2-я кафедра хирургии и 3-я кафедра патологии, Академия Сальгренска, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция

© Автор 2005.Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

паттернов отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей | Репродукция человека

Аннотация

ИСТОРИЯ: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку.Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши. Методы. Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопное положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ . Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2–28-е сутки после операции.РЕЗУЛЬТАТЫ: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление — с 10-го по 15-й день. На 28-й день наблюдались некроз и фиброз. Плотность Т-лимфоцитов (CD3 + ) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке был снижен с 15-го дня. Заключение. Была охарактеризована модель на мышах для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки.Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день. Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов на этой модели.

Введение

Трансплантация матки в настоящее время разрабатывается в качестве потенциального метода лечения пациентов с абсолютным бесплодием из-за фактора матки (Altchek 2003; Brännström et al. , 2003a, b). Пациенты, которые могут быть рассмотрены для этой процедуры, — это женщины с сохраненными яичниками, но с отсутствием матки из-за врожденной аномалии Мюллера или перенесенной гистерэктомии.Кроме того, для этой процедуры могут быть рассмотрены пациенты с сохраненной, но нефункционирующей маткой в ​​отношении имплантации эмбриона или сохранения беременности (например, из-за лейомиомы или внутриматочных спаек) (Brannstrom et al. , 2003b ). Недавно сообщалось о случае трансплантации матки человеку у женщины, которая ранее потеряла матку во время послеродовой гистерэктомии (Fageeh et al. , 2002). Эта трансплантированная матка выжила только 99 дней, несмотря на первоначальную иммуносупрессию циклоспорином А, азатиоприном и преднизолоном, впоследствии усиленную антитимоцитарным глобулином.Таким образом, мы считаем, что эта попытка была преждевременной, поскольку важные вопросы, такие как механизмы отторжения матки, подходящие иммунодепрессанты и переносимость трансплантированной матки в отношении беременности, не были протестированы ни на одной животной модели.

Когда рассматривается новый тип органа для трансплантации, хирургическая техника, процесс отторжения этого конкретного органа и средства подавления отторжения должны быть тщательно исследованы. Механизм отторжения матки особо не исследовался, хотя сообщалось об аллогенной трансплантации у собак (Yonemoto et al., 1969; Скотт и др. , 1970; Wingate et al. , 1970; Paldi et al. , 1975), кролика (Confino et al. , 1986) и макака-резус (Scott et al. , 1971) несколько десятилетий назад. В этих отчетах просто делается вывод о том, что произошел отказ, и они не характеризуют процесс в каких-либо подробностях. Недавно были представлены данные о методах трансплантации en bloc матка – яйцевод – яичник крысам, и было заявлено, что тяжелое отторжение произошло в течение 2 дней (Lee et al., 1995; Jiga et al. , 2003 г .; Motoc et al. , 2003).

Наша группа решила разработать модель трансплантации матки на мышах (Racho El-Akouri et al. , 2002), поскольку этот вид имеет очевидные преимущества перед другими моделями животных в этом исследовании из-за хорошо охарактеризованной репродуктивной физиологии и иммунологии и доступности инбредных и генетически удаленных линий мышей. В модели трансплантации матки сингенной мыши наблюдаются нормальные показатели имплантации и беременности (Racho El-Akouri et al., 2003).

Увеличиваются знания о механизмах специфичности органа в отношении интенсивности и типа отторжения. Матка с ее особой местной иммунологией во время беременности, когда полуаллогенный плод выживает, несмотря на присутствие материнских Т-клеток, специфичных для унаследованных от отца антигенов гистосовместимости, может иметь уникальные особенности. Поскольку матка может обладать особыми иммунологическими свойствами также в отношении местных механизмов отторжения, важно детально изучить процесс отторжения в этом органе, а затем разработать способы контроля отторжения или стимулирования толерантности как у беременной, так и у беременной. небеременное состояние.Иммуноопосредованное отторжение трансплантата будет основной проблемой при трансплантации матки, как и при трансплантации других органов.

В настоящем исследовании паттерн отторжения пересаженной матки на полностью аллогенной модели мышей охарактеризован несколькими методами.

Материалы и методы

Животные

инбредных самок мышей C57BL / 6 и BALB / c (M&B, Ry, Дания) в возрасте 6–8 недель содержали в контролируемых условиях (21–23 ° C, относительная влажность 50–60%, освещение между 07.00 и 19.00 ч) с водой и гранулированным кормом ad libitum . Тридцать две из 63 оперированных мышей-реципиентов были исключены из исследования из-за немедленных послеоперационных осложнений. Эти 32 животных были потеряны либо из-за кровотечения ( n = 11), либо из-за того, что пересаженная матка не показала кровоток через маточную артерию и / или вену ( n = 21) при немедленном осмотре после сосудистого анастомоза. было выполнено. Эксперименты были одобрены местным комитетом по этике животных и проводились в соответствии с принципами и процедурами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Национальные институты здравоохранения, США).

Донорская операция Донорами матки служили

мышей BALB / c. Изоляцию одного рога матки, включая шейку матки и соединительную сосудистую сеть, проводили, как описано ранее (Racho El-Akouri et al. , 2002, 2003). Причина использования одностороннего рога матки, а не всей матки заключалась в том, что односторонняя процедура позволила изолировать тазовую сосудистую сеть на дорсальной стороне матки (Racho El-Akouri et al., 2002). Вкратце, под анестезией изофлураном (2%) правый рог матки и шейка матки вместе с питающими и дренирующими сосудами (правые маточные сосуды, правые гипогастральные сосуды, правые общие подвздошные сосуды, полая вена и аорта) были аккуратно изолированы с помощью микрохирургической диссекции. Другие ветвящиеся сосуды (правые нижние брыжеечные сосуды, правые нижние надчревные сосуды, левые общие подвздошные сосуды, каудальная артерия, правые наружные подвздошные сосуды, правые половые сосуды и поясничные сосуды) прижигали и разрезали для предотвращения утечки из образца.Мочевой пузырь был удален, и шейка матки была рассечена ниже места ее прикрепления к мочевому пузырю. Затем аорту и полую вену отделяли от уровня разветвления почечных сосудов на 3–4 мм каудально. Лигатуру накладывали краниально на верхушку правого рога матки, и матку отделяли от яйцевода и яичника и отделяли от дорсальной брюшины. Аорта и полая вена были привязаны каудально к разветвлению сосудов яичника, и после канюляции аорты (игла 30 G) и разреза в полую вену образец осторожно промыли 0.154 моль / л NaCl (4 ° C) с добавлением 100 МЕ / мл сульфата гепарина (Leo Pharma, Мальме, Швеция) и 0,2 мг / мл ксилокаина (Astra Zeneca, Гетеборг, Швеция) для удаления крови из матки. Затем матку выдерживали в 0,154 моль / л NaCl (4 ° C) в течение 20 минут во время хирургической подготовки животного-реципиента (см. Ниже) и подготовки пробы на заднем столе.

Операция получателя Реципиентами маточного трансплантата служили

мышей C57BL / 6. Хирургическое вмешательство (под анестезией изофлураном) было выполнено через лапаротомный разрез по средней линии после подкожного введения 15 МЕ гепаринсульфата.Были мобилизованы аорта и полая вена, и кровоостанавливающие зажимы были помещены вокруг сосудов en bloc . Анастомозы «конец-в-бок» аорта-аорта и полость-полость выполнялись с использованием техники прерывистого и непрерывного (нейлон 11-0) швов, соответственно. Затем шейку трансплантата выводили наружу через круговой разрез на правой стороне живота и подшивали к коже для создания стомы. Рубец лапаротомии закрыли и 1 мл раствора, содержащего 0,154 моль / л NaCl и глюкозу (50 мг / мл), вводили подкожно для корректировки потери жидкости и для коррекции любой гипогликемии.

Общая морфология и лазерная доплеровская флоуметрия

Мышь анестезировали и выполняли лапаротомию по средней линии. Первоначально матки и стомы реципиентов исследовали с помощью операционного микроскопа на 2, 5, 10, 15 и 28 день после операции во время анестезии. Затем для оценки кровоснабжения тканей использовался метод лазерной доплеровской флоуметрии (Öberg, 1990). Этот метод ранее использовался для исследования кровотока в яичниках крыс (Zackrisson et al., 2000) и матки мыши (Racho El-Akouri et al. , 2002) в определенное время (см. Выше). Лазерный доплеровский мини-зонд (Perimed, Järfälla, Швеция) помещали в просвет как пересаженной, так и родной матки для регистрации кровотока (расходомер Periflux 5000; Perimed) в течение 2–3 минут. Кровоток выражали в произвольных единицах перфузии (ПЕ).

Световая микроскопия и иммуногистохимия

Мышей убивали из-за смещения шейных позвонков во время анестезии в определенное время (см. Выше).Родная матка и матка с пересаженной маткой были рассечены и рассечены пополам. Одну часть разделенной пополам матки фиксировали в растворе, содержащем 4% параформальдегида в концентрации 0,1 моль / л какодилатного натриевого буфера (pH 7,4). Затем ткань обезвоживали, заливали парафином и делали срезы (~ 4 мкм) для световой микроскопии. Было проведено окрашивание гематоксилином и эозином, эластином – ван Гизоном, ван Гизоном и периодной кислотой – Шиффом. Слайды исследовали под световым микроскопом, и цифровые изображения получали с помощью камеры SPOT ™ (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, США).

Другая половина матки была заморожена в OCT (Sakura Finetek Europe, Zoterwoude, Нидерланды). Эту ткань матки (нативную, трансплантат) 2, 5 и 10 дней после операции делали на срезы (~ 4 мкм), фиксировали в ацетоне в течение 5 минут и затем блокировали 1,5% нормальной кроличьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS; NaCl 0,13 моль / моль / л). л, Na 2 HPO 4 0,015 моль / л, KH 2 PO 4 0,004 моль / л) в течение 30 мин. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным моноклональным антителом (молекулярный комплекс крысиных антимышиных CD-3; BD PharMingen, Сан-Диего, Калифорния, США) при разведении 1: 1000 в PBS и 1.5% нормальная кроличья сыворотка. После трех промывок в PBS срезы инкубировали в конъюгированном с пероксидазой, биотинилированном, адсорбированном мышами кроличьем антикрысином IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) в PBS и реагенте Vectastain ABC (Vector Laboratories) в течение 30 мин. с последующей инкубацией с субстратом пероксидазы диаминобензидинтетрагидрохлоридом в течение 5 мин. Срезы контрастировали гематоксилином. Отрицательный контроль выполняли путем замены первичного антитела на PBS.

Число положительных клеток оценивали путем подсчета количества окрашенных клеток в выровненной сетке (10 × 10 квадратов), занимающих площадь на участке 0.125 мм 2 с использованием объектива 20 × и окуляра 10 ×. В каждой матке подсчитывали пять случайно выбранных областей в миометрии и пять областей считали в пределах эндометрия (определяемого как область от поверхности просвета до самого базального железистого эпителия). Среднее значение этих значений было вычислено, и это значение использовалось в качестве точки данных. Подсчитывали одну секцию от аборигенной и одну секцию от пересаженной матки от каждого из пяти животных в каждой группе. Подсчет проводился независимо двумя наблюдателями, оба не знали протокола лечения.Значения, полученные двумя наблюдателями, различались не более чем на 15%.

Статистический анализ

Непараметрические тесты (ранговый тест Краскела – Уоллиса, тест Манна – Уитни U -тест) использовались при анализе данных, поскольку мы не предполагали нормального распределения точек данных. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Общий вид

Общие результаты по внешнему виду представлены в Таблице I.Визуальный и тактильный осмотр пересаженной матки на 2-й день показал общий вид, сходный с таковым у родной матки. Пульсация в аортальном сегменте трансплантата и кровотечение маточной ткани в норме. На 5-й день у большинства пересаженных маток появились признаки отека и изменения цвета на более красноватый (рис. 1а). Пульсация аорты и кровотечение из ткани матки оставались нормальными. Стомы были мягкими и нормального цвета (рис. 1б). На 10-й день все матки были ненормального цвета, с красноватым или черноватым оттенком.Три из пяти маток имели явно более твердую консистенцию, а кровотечение из ткани матки не наблюдалось ни при одном трансплантате. Ни одна из маток не опухла, но две из пяти показали изменение внешнего вида стомы. Полностью ненормальная текстура и опухоль матки были очевидны на 15-й день (рис. 1c). На этом этапе пульсация аорты присутствовала в четырех из пяти трансплантатов, и большинство стом (четыре из пяти) были сморщены, а слизистая оболочка приобрела более темный цвет (рис. 1d). На 28 день размер матки значительно уменьшился, и они, как правило, были беловатого цвета (рис. 1e) и плотной текстуры.Большинство стом показало заметное сжатие (рис. 1f), а пульсация питающей аорты наблюдалась только в одной из пяти пересаженных маток.

Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день ) после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Гистология и плотность Т-лимфоцитов

На 2-й день гистологический вид нативной и пересаженной матки был схожим, с небольшими популяциями воспалительных клеток и минимальным отеком (рис. 2a и b).

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативной (a, e, j) и привитой (b – d, f – i) матки. . В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а). В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка).В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации. Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h).Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативного (a, e, j) и привитого (b – d, f – i) матки. В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а).В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка). В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации.Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h). Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

На 5 день появились признаки увеличения количества воспалительных клеток в мышечном слое пересаженной матки, а также отек (рис. 2c). Кроме того, разбросанные лимфоциты были обнаружены на эпителиальной стороне базальной пластинки как железистого, так и просветного эпителия.Также наблюдался застой крови в мелких сосудах (в основном венулах) (рис. 2с). Однако не было никаких свидетельств эндартериита артерий или эндотелиалита более крупных вен.

На 10-й и 15-й дни у животных двух групп характерные черты частично совпадали. На 10-й день матка была сильно воспалена по всей стенке матки, и в железистом эпителии присутствовало множество лимфоцитов (рис. 2d, g). Также наблюдался очаговый апоптоз, но в этот момент некроз не был очевиден.Кровеносные сосуды были переполнены, и были признаки эндартериита в более крупных артериях с лимфоцитами, проникающими в эндотелиальный слой в интиму (рис. 2h). На 15-й день четыре из пяти трансплантатов матки показали гистологические признаки тяжелого отторжения с артериальными тромбами и некротической паренхимой (рис. 2f). Один трансплантат на 15-й день имел гистологический вид, аналогичный таковому на 10-й день. Нативная матка 15-го дня (рис. 2е) выглядела слегка отечной, но без какого-либо видимого увеличения воспалительных клеток.На 28 день ни в одной из пересаженных маток не было жизнеспособной паренхимы. Был массивный центральный некроз и только периферический край фиброзной ткани.

Плотность Т-клеток в миометрии (Рисунок 3a) и эндометрии (Рисунок 3b) была выше в пересаженной матке (Рисунок 2i) по сравнению с нативной маткой (Рисунок 2j) со 2-го и 5-го дня, соответственно. Не было зависимых от времени изменений плотности Т-клеток в миометрии или эндометрии в естественной матке (рис. 3a, b).Однако плотность Т-клеток как в миометрии, так и в эндометрии в пересаженной матке была значительно выше на 5-й и 10-й день по сравнению со 2-м днем ​​(рис. 3a, b).

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и родной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = значимо ( P <0.05, P <0,01) выше, чем у уроженца того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и нативной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0.01) выше, чем уроженец того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Кровоток

Кровоток был значительно ниже в пересаженной матке по сравнению с естественной маткой во все моменты времени (рис. 4). Не было значительных зависимых от времени изменений кровотока в родной матке. В пересаженной матке наблюдалось значительное изменение кровотока с более низкими уровнями на 15 и 28 дни по сравнению со 2 и 5 днями.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по оценке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2 и 5 дней.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по данным лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2-го и 5-го дней.

Обсуждение

Чтобы создать подходящую модельную систему для фундаментальных исследований по вопросу трансплантации матки, мы разработали модель мыши с использованием микрохирургического сосудистого анастомоза и гетеротопического размещения пересаженной матки параллельно родной контрольной матке (Racho El-Akouri et al., 2002). В последнем исследовании хирургическая техника была разработана и отработана с использованием инбредных мышей (B6 CBAF1) в качестве донора и реципиента, а трансплантированная матка показала способность вынашивать беременность (Racho El-Akouri et al. , 2002) и дают потомство с нормальной траекторией постнатального роста (Racho El-Akouri et al. , 2003). В совокупности эти первоначальные исследования продемонстрировали возможность использования этой модели в исследованиях по развитию трансплантации матки в качестве клинической процедуры лечения маточного бесплодия.В настоящем исследовании мы охарактеризовали механизмы отторжения, сделав наблюдения на нескольких уровнях в полностью аллогенной модели трансплантации матки у мышей.

Использовали полностью аллогенную модель мышей с мышами линии BALB / c в качестве доноров матки и мышами линии C57BL / 6 в качестве реципиентов. Причина использования мышей C57BL / 6 в качестве реципиентов заключалась в том, что этот штамм является фоновым штаммом, используемым для развития большинства нокаутных и трансгенных мышей. Мы ожидаем, что эти нокаутные или трансгенные мыши будут использоваться в будущих исследованиях, направленных на более детальное изучение механизмов отторжения в пересаженной матке или в экспериментах по физиологии беременности.Более того, наши предыдущие эксперименты, включающие сингенную трансплантацию, были выполнены на гибридах F1 линии реципиента настоящего исследования, мышей C57BL / 6 и CBA (Racho El-Akouri et al. , 2003). Штамм мышей-доноров (BALB / c), использованный в настоящем исследовании, представляет собой линию мышей-альбиносов, которая наиболее широко используется в биомедицинских исследованиях (Potter, 1985).

Главный комплекс гистосовместимости (MHC) мыши, H-2, имеет свои генетические локусы на хромосоме 17 и гомологичен HLA у человека.Гаплотипы комплекса H-2 определяются комбинацией аллелей генов класса I, класса II и класса III (Klein et al. , 1983). Гаплотипы H-2 мышей BALB / c и C57BL / 6 обозначены как H-2 d и H-2 b соответственно. Эти два гаплотипа демонстрируют несходство по всем аллелям, кроме одного (локус Q1 класса Ib). Таким образом, почти полностью аллогенная ситуация, выбранная в настоящем исследовании, будет соответствовать клинической ситуации донора и реципиента с несоответствием MHC как по основным, так и по второстепенным локусам MHC.

Модель мыши для трансплантации органов становится все более популярной благодаря достижениям в микрохирургии и молекулярной биологии. Однако знания о паттернах отторжения в этих мышиных моделях ограничены. В экспериментах с трансплантацией сердца, почек, печени и кишечника между разными линиями мышей оценивали мышей C57BL / 6 как доноров и мышей BALB / c как реципиентов (Zhang et al. , 1996). Это противоположная ситуация по сравнению с настоящим исследованием, и оценка BALB / c в качестве донора и C57BL / 6 в качестве реципиента не проводилась.В исследовании Zhang et al., Спонтанное принятие было замечено в 72 и 20% аллотрансплантатов печени и почек соответственно. Однако аллотрансплантаты сердца и кишечника были отвергнуты примерно через 9 дней. Результаты были аналогичными, когда BALB / c использовались в качестве доноров для мышей CBA. В исследовании с использованием ортотопической трансплантации каротидных аллотрансплантатов для проверки эффектов иммунодепрессантов мышей C57BL / 6 и BALB / c тестировали как доноры, так и реципиенты (Matsumoto et al. , 2004). Было показано, что отторжение реципиентов C57BL / 6 не подавлялось иммунодепрессантами в такой степени, как у реципиентов BALB / c.Взятые вместе, эти данные показывают, что такой орган, как сердце, который похож на матку в своем большом содержании мышечной ткани, будет отторгнут в течение более короткого времени, чем 9 дней, когда использовались доноры BALB / c и реципиенты C57BL / 6. . Это время отторжения несколько короче, чем то, что было обнаружено в настоящем исследовании в отношении матки.

В настоящем исследовании довольно большая часть животных была исключена из-за немедленных послеоперационных осложнений. Скорее всего, это следствие технически очень сложной диссекции и микрохирургии, связанной с этой процедурой.Неудачи, скорее всего, не были связаны с так называемым иммунологически опосредованным сверхострым отторжением, поскольку аналогичная часть мышей с неудачными трансплантатами наблюдалась в нашем предыдущем исследовании с использованием сингенной модели (Racho El-Akouri et al. , 2003). В ходе исследования было обнаружено, что манипуляции с трансплантатом и время теплой ишемии необходимо было сократить до минимума, чтобы предотвратить эти осложнения.

Макроскопический вид пересаженной матки в настоящем исследовании регистрировали как в отношении слизистой оболочки шейки матки (конец устьиц), так и в отношении внешнего вида серозной поверхности внутри брюшной полости.Первыми очевидными признаками отторжения были припухлость и изменение цвета, которые можно было увидеть только на 5-й день в брюшной полости. Это время соответствует первым гистологическим признакам воспаления. Эти результаты ранних макроскопических признаков отторжения сравнимы с тем, что сообщалось ранее для сердечных аллотрансплантатов крыс, с отеком, наблюдаемым примерно на 4-й день (Hayashi et al. , 1991). Точно так же аллотрансплантаты матки у собак были опухшими и гиперемическими на 4–5 дни (Wingate et al., 1970).

Макроскопические изменения, которые наблюдались в стоме маточного аллотрансплантата, довольно хорошо коррелировали с макроскопическим внутрибрюшным внешним видом, а также с гистологическими признаками отторжения. Первый макроскопический признак отторжения, наблюдаемый в стоме, был на 10-й день, когда наблюдалось заметное увеличение плотности Т-клеток как в эндометрии, так и в миометрии. Таким образом, экстериоризованный шейный конец матки можно удобно использовать для оценки жизнеспособности органа и различных фаз отторжения трансплантатов.Похожая ситуация присутствует в недавно разработанной мышиной модели трансплантации тонкой кишки (He et al. , 1998; Dindelegan et al. , 2003) с аналогичной кожной стомой. Стома также позволит неинвазивным способом получить биопсию из органа для более детальной оценки отторжения с помощью гистологии или иммуногистохимии.

Отторжение пересаженной матки стало макроскопически более очевидным со временем, когда матка стала более черноватой по цвету с полностью ненормальной текстурой.Стомы стали более темными и уменьшились в размерах. На срезах тканей повышенная инфильтрация воспалительных клеток, эндартериит и артериальные тромбы с некротической паренхимой наблюдались на 10-й и 15-й дни. Эти результаты соответствуют тяжелому острому отторжению и аналогичны результатам сердечных аллотрансплантатов на 8-15-й день (Zhang et al. др. , 1996; Ридерер и др. , 2002). Выживаемость аллотрансплантата и тяжесть отторжения зависят не только от несоответствия MHC, но также от конкретного органа, который пересаживают.Таким образом, у мышей наблюдается спонтанное принятие пересаженных печени и почек (Zhang et al. , 1996). С этой точки зрения кажется, что сердце и матка похожи, без спонтанного принятия и с одинаковым временем фаз отторжения.

Эндометрий является частью общей иммунной системы слизистых оболочек, которая обладает особыми характеристиками, обеспечивающими иммунологическую толерантность к сперме и зачатию, при активной защите матки от патогенных бактерий и вирусов.Гистологическое исследование в настоящем исследовании показало, что отторжение эндометрия происходит быстрее, чем отторжение миометрия. Таким образом, ранняя инфильтрация лимфоцитов наблюдалась в железах эндометрия, тогда как инфильтрация лимфоцитами происходила позже в миометрии. Миометрий оказался наиболее устойчивым к отторжению и дольше всех сохранял свою тканевую структуру. Эти результаты сопоставимы с результатами исследования аллотрансплантированной матки, проведенного на собаке (Scott et al., 1970), в котором пересаженная матка показала тотальный некроз эндометрия, но только мононуклеарную инфильтрацию и выраженный отек миометрия через 2 недели после трансплантации. Механизмом раннего отторжения эндометрия, скорее всего, является ранняя инвазия лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение Т-лимфоцитов в эндометрии уже на 2-й день. сравнение пересаженной матки с родной маткой во всех временных точках.В нашем предыдущем исследовании на модели сингенных мышей (Racho El-Akouri et al. , 2002) мы не смогли продемонстрировать каких-либо различий в кровотоке при оценке через 2 и 4 недели после операции. Вполне возможно, что кровоток в этих сингенных трансплантатах был ниже в течение первых недель после трансплантации, а затем кровоток увеличился до уровней, аналогичных таковому в собственной матке. Объяснение этой нормализации кровотока в сингенном трансплантате может заключаться в том, что резко сниженный кровоток из-за отсутствия кровотока в маточных ветвях яичниковой артерии медленно компенсируется кровотоком из маточной артерии.В аллогенной модели настоящего исследования события раннего отторжения будут препятствовать нормализации кровотока и в конечном итоге привести к уменьшению кровотока. Однако в трансплантатах тонкой кишки на мышиной модели не наблюдалось уменьшения кровотока после сингенной трансплантации при оценке с 1 по 8 день, но снижение наблюдалось в аллогенных трансплантатах с 3 дня (Dindelegan et al. , 2003) .

Гистологическим коррелятом этого снижения кровотока в матке, естественно, являются основные периваскулярные изменения, которые наблюдались примерно с 15 дня.Кроме того, тромбоз был замечен в отторженных трансплантатах после аллотрансплантации матки собаке (Wingate et al. , 1970). В этом исследовании тромбоз в основном наблюдался в крупных и средних артериях и венах с 3 по 28 день после трансплантации.

В заключение, аллотрансплантаты матки показывают ранние признаки отторжения с 5-го дня и тяжелое отторжение с 10-го по 15-й день после трансплантации. Паттерн отторжения этой мышиной модели довольно однороден, в отличие от нескольких комбинаций мышиного штамма трансплантации почек, которые показали как спонтанное принятие, так и отторжение (Zhang et al., 1996). Паттерн отторжения матки на мышиной модели, по-видимому, больше всего похож на паттерн трансплантации сердца.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энн Валлин, кафедру акушерства и гинекологии, Академию Сальгренска при Гетеборгском университете, за техническую помощь. Исследование было поддержано грантами Шведского исследовательского совета (№ 11607), медицинского факультета Академии Сальгренска и Исследовательского фонда Ялмара Свенссона.

Список литературы

(

2003

) Трансплантация матки.

Mt Sinai J Med

70

,

154

–162.

, Эль-Акури, Р.Р. и Враннинг, Калифорния (2003a) Трансплантация матки.

евро J Obstet Gynecol Reprod Biol

109

,

121

–123.

, Wranning CA и Racho El-Akouri R (2003b) Трансплантация матки.

Эндокринол клеток Mol

202

,

177

–184.

, Vermesh M, Thomas W. Jr и Gleicher N (

1986

) Несосудистая трансплантация матки кролика.

Int J Gynaecol Obstet

24

,

321

–325.

, Liden H, Kurlberg G, Oltean M, Nilsson O, Aneman A, Lycke N и Olausson M (

2003

) Лазерно-допплеровская флоуметрия надежна для ранней диагностики острого отторжения тонкой кишки у мышей.

Микрохирургия

23

,

233

–238.

, Раффа Х, Джаббад Х.и Marzouki A (

2002

) Трансплантация матки человека.

Int J Gynaecol Obstet

76

,

245

–251.

, Nozawa M, Otsu I., Deguchi H, Kitaura Y и Kawamura K (

1991

) Клеточно-опосредованная цитотоксичность при остром отторжении сердечного аллотрансплантата крысы: иммунологическое и ультраструктурное исследование.

Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол

418

,

41

–50.

, Hart J, Thistlethwaite JR Jr и Newell KA (

1998

) Модифицированная хирургическая модель паратопической трансплантации тонкой кишки у мышей.

J Surg Res

80

,

188

–193.

, Lupu CM, Zoica BS и Ionac M (

2003

) Экспериментальная модель гетеротопической трансплантации матки у лабораторных крыс.

Микрохирургия

23

,

246

–250.

, Фигероа Ф. и Дэвид К.С. (

1983

) Гаплотипы, гены и антигены H-2: второй список. II. Комплекс Н-2.

Иммуногенетика

17

,

553

–596.

, Мао Л., Ван И, Д’Сильва М., Ю Ч., Вольф П., Чанг В.С., Такахаши Э., Чунг Д.Й. и Гиттес РФ (

1995

) Трансплантация репродуктивных органов.

Микрохирургия

16

,

191

–198.

, Hof A, Baumlin Y, Muller M и Hof RP (

2004

) Дифференциальные эффекты эверолимуса и циклоспорина A на динамику альфа-актин-положительных клеток интимы каротидных аллотрансплантатов у мышей.

Трансплантация

78

,

345

–351.

, Джига Л., Ионак М., Райка М., Моток М. и Чиовски С. (

2003

) Предварительные результаты ортотопической трансплантации матки en bloc и яичников у лабораторных крыс.

Clin Exp Obstet Gynecol

30

,

239

–242.

(

1990

) Лазерно-доплеровская флоуметрия. Crit Rev

Biomed Eng

18

,

125

–163.

, Гал Д., Барзилай А., Хампель Н. и Мальбергер Э. (

1975

) Половые органы. Авто- и гомотрансплантация у сорока собак.

Int J Fertil

20

,

5

–12.

(

1985

) История семейства BALB / c.

Curr Top Microbiol Immunol

122

,

1

–5.

R, Kurlberg G, Dindelegan G, Mölne J, Wallin A и Brännström M (

2002

) Гетеротопическая трансплантация матки с помощью сосудистого анастомоза у мыши.

Дж Эндокринол

174

,

157

–166.

R, Kurlberg G и Brännström M (

2003

) Успешная трансплантация матки мыши: беременность и постнатальное развитие потомства.

Hum Reprod

18

,

2024

–2030.

, Сильва-Барбоса С.Д., Родригес М.Л. и Савино В. (

2002

) Местное лечение антиламининовыми антителами изменяет характер отторжения сердечных аллотрансплантатов мыши: корреляция между клеточной инфильтрацией и внеклеточным матриксом.

Трансплантация

74

,

1515

–1522.

, Андерсон В.Р., Клинг Т.Г. и Янноне М.Э. (

1970

) Трансплантация матки собакам.

Gynecol Invest

1

,

140

–148.

, Питкин Р.М. и Янноне М.Э. (

1971

) Трансплантация матки приматов.

Surg Gynecol Obstet

133

,

414

–418.

, Карасевич Э., Вингейт Л., Лаучиан С. и Рэй М. (

1970

) Экспериментальная гомотрансплантация маточно-кубовариальной оболочки на собаке.

Am J Obstet Gynecol

106

,

1171

–1176.

, Du Sold WD и Deliman RM (

1969

) Гомотрансплантация матки и яичников собакам. Предварительный отчет.

Am J Obstet Gynecol

104

,

1143

–1151.

, Mikuni M, Peterson MC, Nilsson B, Janson PO и Brännström M (

2000

) Доказательства участия механизмов, связанных с кровотоком, в овуляторном процессе у крыс.

Hum Reprod

15

,

264

–272.

, Zhu L, Quan D, Garcia B, Ozcay N, Duff J, Stiller C, Lazarovits A, Grant D и Zhong R (

1996

) Характер отторжения аллотрансплантата печени, почек, сердца и кишечника у разных линий мышей комбинации.

Трансплантация

62

,

1267

–1272.

Заметки автора

1 Кафедра акушерства и гинекологии, 2-я кафедра хирургии и 3-я кафедра патологии, Академия Сальгренска, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция

© Автор 2005.Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

паттернов отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей | Репродукция человека

Аннотация

ИСТОРИЯ: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку.Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши. Методы. Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопное положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ . Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2–28-е сутки после операции.РЕЗУЛЬТАТЫ: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление — с 10-го по 15-й день. На 28-й день наблюдались некроз и фиброз. Плотность Т-лимфоцитов (CD3 + ) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке был снижен с 15-го дня. Заключение. Была охарактеризована модель на мышах для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки.Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день. Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов на этой модели.

Введение

Трансплантация матки в настоящее время разрабатывается в качестве потенциального метода лечения пациентов с абсолютным бесплодием из-за фактора матки (Altchek 2003; Brännström et al. , 2003a, b). Пациенты, которые могут быть рассмотрены для этой процедуры, — это женщины с сохраненными яичниками, но с отсутствием матки из-за врожденной аномалии Мюллера или перенесенной гистерэктомии.Кроме того, для этой процедуры могут быть рассмотрены пациенты с сохраненной, но нефункционирующей маткой в ​​отношении имплантации эмбриона или сохранения беременности (например, из-за лейомиомы или внутриматочных спаек) (Brannstrom et al. , 2003b ). Недавно сообщалось о случае трансплантации матки человеку у женщины, которая ранее потеряла матку во время послеродовой гистерэктомии (Fageeh et al. , 2002). Эта трансплантированная матка выжила только 99 дней, несмотря на первоначальную иммуносупрессию циклоспорином А, азатиоприном и преднизолоном, впоследствии усиленную антитимоцитарным глобулином.Таким образом, мы считаем, что эта попытка была преждевременной, поскольку важные вопросы, такие как механизмы отторжения матки, подходящие иммунодепрессанты и переносимость трансплантированной матки в отношении беременности, не были протестированы ни на одной животной модели.

Когда рассматривается новый тип органа для трансплантации, хирургическая техника, процесс отторжения этого конкретного органа и средства подавления отторжения должны быть тщательно исследованы. Механизм отторжения матки особо не исследовался, хотя сообщалось об аллогенной трансплантации у собак (Yonemoto et al., 1969; Скотт и др. , 1970; Wingate et al. , 1970; Paldi et al. , 1975), кролика (Confino et al. , 1986) и макака-резус (Scott et al. , 1971) несколько десятилетий назад. В этих отчетах просто делается вывод о том, что произошел отказ, и они не характеризуют процесс в каких-либо подробностях. Недавно были представлены данные о методах трансплантации en bloc матка – яйцевод – яичник крысам, и было заявлено, что тяжелое отторжение произошло в течение 2 дней (Lee et al., 1995; Jiga et al. , 2003 г .; Motoc et al. , 2003).

Наша группа решила разработать модель трансплантации матки на мышах (Racho El-Akouri et al. , 2002), поскольку этот вид имеет очевидные преимущества перед другими моделями животных в этом исследовании из-за хорошо охарактеризованной репродуктивной физиологии и иммунологии и доступности инбредных и генетически удаленных линий мышей. В модели трансплантации матки сингенной мыши наблюдаются нормальные показатели имплантации и беременности (Racho El-Akouri et al., 2003).

Увеличиваются знания о механизмах специфичности органа в отношении интенсивности и типа отторжения. Матка с ее особой местной иммунологией во время беременности, когда полуаллогенный плод выживает, несмотря на присутствие материнских Т-клеток, специфичных для унаследованных от отца антигенов гистосовместимости, может иметь уникальные особенности. Поскольку матка может обладать особыми иммунологическими свойствами также в отношении местных механизмов отторжения, важно детально изучить процесс отторжения в этом органе, а затем разработать способы контроля отторжения или стимулирования толерантности как у беременной, так и у беременной. небеременное состояние.Иммуноопосредованное отторжение трансплантата будет основной проблемой при трансплантации матки, как и при трансплантации других органов.

В настоящем исследовании паттерн отторжения пересаженной матки на полностью аллогенной модели мышей охарактеризован несколькими методами.

Материалы и методы

Животные

инбредных самок мышей C57BL / 6 и BALB / c (M&B, Ry, Дания) в возрасте 6–8 недель содержали в контролируемых условиях (21–23 ° C, относительная влажность 50–60%, освещение между 07.00 и 19.00 ч) с водой и гранулированным кормом ad libitum . Тридцать две из 63 оперированных мышей-реципиентов были исключены из исследования из-за немедленных послеоперационных осложнений. Эти 32 животных были потеряны либо из-за кровотечения ( n = 11), либо из-за того, что пересаженная матка не показала кровоток через маточную артерию и / или вену ( n = 21) при немедленном осмотре после сосудистого анастомоза. было выполнено. Эксперименты были одобрены местным комитетом по этике животных и проводились в соответствии с принципами и процедурами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Национальные институты здравоохранения, США).

Донорская операция Донорами матки служили

мышей BALB / c. Изоляцию одного рога матки, включая шейку матки и соединительную сосудистую сеть, проводили, как описано ранее (Racho El-Akouri et al. , 2002, 2003). Причина использования одностороннего рога матки, а не всей матки заключалась в том, что односторонняя процедура позволила изолировать тазовую сосудистую сеть на дорсальной стороне матки (Racho El-Akouri et al., 2002). Вкратце, под анестезией изофлураном (2%) правый рог матки и шейка матки вместе с питающими и дренирующими сосудами (правые маточные сосуды, правые гипогастральные сосуды, правые общие подвздошные сосуды, полая вена и аорта) были аккуратно изолированы с помощью микрохирургической диссекции. Другие ветвящиеся сосуды (правые нижние брыжеечные сосуды, правые нижние надчревные сосуды, левые общие подвздошные сосуды, каудальная артерия, правые наружные подвздошные сосуды, правые половые сосуды и поясничные сосуды) прижигали и разрезали для предотвращения утечки из образца.Мочевой пузырь был удален, и шейка матки была рассечена ниже места ее прикрепления к мочевому пузырю. Затем аорту и полую вену отделяли от уровня разветвления почечных сосудов на 3–4 мм каудально. Лигатуру накладывали краниально на верхушку правого рога матки, и матку отделяли от яйцевода и яичника и отделяли от дорсальной брюшины. Аорта и полая вена были привязаны каудально к разветвлению сосудов яичника, и после канюляции аорты (игла 30 G) и разреза в полую вену образец осторожно промыли 0.154 моль / л NaCl (4 ° C) с добавлением 100 МЕ / мл сульфата гепарина (Leo Pharma, Мальме, Швеция) и 0,2 мг / мл ксилокаина (Astra Zeneca, Гетеборг, Швеция) для удаления крови из матки. Затем матку выдерживали в 0,154 моль / л NaCl (4 ° C) в течение 20 минут во время хирургической подготовки животного-реципиента (см. Ниже) и подготовки пробы на заднем столе.

Операция получателя Реципиентами маточного трансплантата служили

мышей C57BL / 6. Хирургическое вмешательство (под анестезией изофлураном) было выполнено через лапаротомный разрез по средней линии после подкожного введения 15 МЕ гепаринсульфата.Были мобилизованы аорта и полая вена, и кровоостанавливающие зажимы были помещены вокруг сосудов en bloc . Анастомозы «конец-в-бок» аорта-аорта и полость-полость выполнялись с использованием техники прерывистого и непрерывного (нейлон 11-0) швов, соответственно. Затем шейку трансплантата выводили наружу через круговой разрез на правой стороне живота и подшивали к коже для создания стомы. Рубец лапаротомии закрыли и 1 мл раствора, содержащего 0,154 моль / л NaCl и глюкозу (50 мг / мл), вводили подкожно для корректировки потери жидкости и для коррекции любой гипогликемии.

Общая морфология и лазерная доплеровская флоуметрия

Мышь анестезировали и выполняли лапаротомию по средней линии. Первоначально матки и стомы реципиентов исследовали с помощью операционного микроскопа на 2, 5, 10, 15 и 28 день после операции во время анестезии. Затем для оценки кровоснабжения тканей использовался метод лазерной доплеровской флоуметрии (Öberg, 1990). Этот метод ранее использовался для исследования кровотока в яичниках крыс (Zackrisson et al., 2000) и матки мыши (Racho El-Akouri et al. , 2002) в определенное время (см. Выше). Лазерный доплеровский мини-зонд (Perimed, Järfälla, Швеция) помещали в просвет как пересаженной, так и родной матки для регистрации кровотока (расходомер Periflux 5000; Perimed) в течение 2–3 минут. Кровоток выражали в произвольных единицах перфузии (ПЕ).

Световая микроскопия и иммуногистохимия

Мышей убивали из-за смещения шейных позвонков во время анестезии в определенное время (см. Выше).Родная матка и матка с пересаженной маткой были рассечены и рассечены пополам. Одну часть разделенной пополам матки фиксировали в растворе, содержащем 4% параформальдегида в концентрации 0,1 моль / л какодилатного натриевого буфера (pH 7,4). Затем ткань обезвоживали, заливали парафином и делали срезы (~ 4 мкм) для световой микроскопии. Было проведено окрашивание гематоксилином и эозином, эластином – ван Гизоном, ван Гизоном и периодной кислотой – Шиффом. Слайды исследовали под световым микроскопом, и цифровые изображения получали с помощью камеры SPOT ™ (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, США).

Другая половина матки была заморожена в OCT (Sakura Finetek Europe, Zoterwoude, Нидерланды). Эту ткань матки (нативную, трансплантат) 2, 5 и 10 дней после операции делали на срезы (~ 4 мкм), фиксировали в ацетоне в течение 5 минут и затем блокировали 1,5% нормальной кроличьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS; NaCl 0,13 моль / моль / л). л, Na 2 HPO 4 0,015 моль / л, KH 2 PO 4 0,004 моль / л) в течение 30 мин. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным моноклональным антителом (молекулярный комплекс крысиных антимышиных CD-3; BD PharMingen, Сан-Диего, Калифорния, США) при разведении 1: 1000 в PBS и 1.5% нормальная кроличья сыворотка. После трех промывок в PBS срезы инкубировали в конъюгированном с пероксидазой, биотинилированном, адсорбированном мышами кроличьем антикрысином IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) в PBS и реагенте Vectastain ABC (Vector Laboratories) в течение 30 мин. с последующей инкубацией с субстратом пероксидазы диаминобензидинтетрагидрохлоридом в течение 5 мин. Срезы контрастировали гематоксилином. Отрицательный контроль выполняли путем замены первичного антитела на PBS.

Число положительных клеток оценивали путем подсчета количества окрашенных клеток в выровненной сетке (10 × 10 квадратов), занимающих площадь на участке 0.125 мм 2 с использованием объектива 20 × и окуляра 10 ×. В каждой матке подсчитывали пять случайно выбранных областей в миометрии и пять областей считали в пределах эндометрия (определяемого как область от поверхности просвета до самого базального железистого эпителия). Среднее значение этих значений было вычислено, и это значение использовалось в качестве точки данных. Подсчитывали одну секцию от аборигенной и одну секцию от пересаженной матки от каждого из пяти животных в каждой группе. Подсчет проводился независимо двумя наблюдателями, оба не знали протокола лечения.Значения, полученные двумя наблюдателями, различались не более чем на 15%.

Статистический анализ

Непараметрические тесты (ранговый тест Краскела – Уоллиса, тест Манна – Уитни U -тест) использовались при анализе данных, поскольку мы не предполагали нормального распределения точек данных. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Общий вид

Общие результаты по внешнему виду представлены в Таблице I.Визуальный и тактильный осмотр пересаженной матки на 2-й день показал общий вид, сходный с таковым у родной матки. Пульсация в аортальном сегменте трансплантата и кровотечение маточной ткани в норме. На 5-й день у большинства пересаженных маток появились признаки отека и изменения цвета на более красноватый (рис. 1а). Пульсация аорты и кровотечение из ткани матки оставались нормальными. Стомы были мягкими и нормального цвета (рис. 1б). На 10-й день все матки были ненормального цвета, с красноватым или черноватым оттенком.Три из пяти маток имели явно более твердую консистенцию, а кровотечение из ткани матки не наблюдалось ни при одном трансплантате. Ни одна из маток не опухла, но две из пяти показали изменение внешнего вида стомы. Полностью ненормальная текстура и опухоль матки были очевидны на 15-й день (рис. 1c). На этом этапе пульсация аорты присутствовала в четырех из пяти трансплантатов, и большинство стом (четыре из пяти) были сморщены, а слизистая оболочка приобрела более темный цвет (рис. 1d). На 28 день размер матки значительно уменьшился, и они, как правило, были беловатого цвета (рис. 1e) и плотной текстуры.Большинство стом показало заметное сжатие (рис. 1f), а пульсация питающей аорты наблюдалась только в одной из пяти пересаженных маток.

Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день ) после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Гистология и плотность Т-лимфоцитов

На 2-й день гистологический вид нативной и пересаженной матки был схожим, с небольшими популяциями воспалительных клеток и минимальным отеком (рис. 2a и b).

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативной (a, e, j) и привитой (b – d, f – i) матки. . В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а). В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка).В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации. Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h).Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативного (a, e, j) и привитого (b – d, f – i) матки. В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а).В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка). В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации.Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h). Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

На 5 день появились признаки увеличения количества воспалительных клеток в мышечном слое пересаженной матки, а также отек (рис. 2c). Кроме того, разбросанные лимфоциты были обнаружены на эпителиальной стороне базальной пластинки как железистого, так и просветного эпителия.Также наблюдался застой крови в мелких сосудах (в основном венулах) (рис. 2с). Однако не было никаких свидетельств эндартериита артерий или эндотелиалита более крупных вен.

На 10-й и 15-й дни у животных двух групп характерные черты частично совпадали. На 10-й день матка была сильно воспалена по всей стенке матки, и в железистом эпителии присутствовало множество лимфоцитов (рис. 2d, g). Также наблюдался очаговый апоптоз, но в этот момент некроз не был очевиден.Кровеносные сосуды были переполнены, и были признаки эндартериита в более крупных артериях с лимфоцитами, проникающими в эндотелиальный слой в интиму (рис. 2h). На 15-й день четыре из пяти трансплантатов матки показали гистологические признаки тяжелого отторжения с артериальными тромбами и некротической паренхимой (рис. 2f). Один трансплантат на 15-й день имел гистологический вид, аналогичный таковому на 10-й день. Нативная матка 15-го дня (рис. 2е) выглядела слегка отечной, но без какого-либо видимого увеличения воспалительных клеток.На 28 день ни в одной из пересаженных маток не было жизнеспособной паренхимы. Был массивный центральный некроз и только периферический край фиброзной ткани.

Плотность Т-клеток в миометрии (Рисунок 3a) и эндометрии (Рисунок 3b) была выше в пересаженной матке (Рисунок 2i) по сравнению с нативной маткой (Рисунок 2j) со 2-го и 5-го дня, соответственно. Не было зависимых от времени изменений плотности Т-клеток в миометрии или эндометрии в естественной матке (рис. 3a, b).Однако плотность Т-клеток как в миометрии, так и в эндометрии в пересаженной матке была значительно выше на 5-й и 10-й день по сравнению со 2-м днем ​​(рис. 3a, b).

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и родной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = значимо ( P <0.05, P <0,01) выше, чем у уроженца того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и нативной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0.01) выше, чем уроженец того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Кровоток

Кровоток был значительно ниже в пересаженной матке по сравнению с естественной маткой во все моменты времени (рис. 4). Не было значительных зависимых от времени изменений кровотока в родной матке. В пересаженной матке наблюдалось значительное изменение кровотока с более низкими уровнями на 15 и 28 дни по сравнению со 2 и 5 днями.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по оценке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2 и 5 дней.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по данным лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2-го и 5-го дней.

Обсуждение

Чтобы создать подходящую модельную систему для фундаментальных исследований по вопросу трансплантации матки, мы разработали модель мыши с использованием микрохирургического сосудистого анастомоза и гетеротопического размещения пересаженной матки параллельно родной контрольной матке (Racho El-Akouri et al., 2002). В последнем исследовании хирургическая техника была разработана и отработана с использованием инбредных мышей (B6 CBAF1) в качестве донора и реципиента, а трансплантированная матка показала способность вынашивать беременность (Racho El-Akouri et al. , 2002) и дают потомство с нормальной траекторией постнатального роста (Racho El-Akouri et al. , 2003). В совокупности эти первоначальные исследования продемонстрировали возможность использования этой модели в исследованиях по развитию трансплантации матки в качестве клинической процедуры лечения маточного бесплодия.В настоящем исследовании мы охарактеризовали механизмы отторжения, сделав наблюдения на нескольких уровнях в полностью аллогенной модели трансплантации матки у мышей.

Использовали полностью аллогенную модель мышей с мышами линии BALB / c в качестве доноров матки и мышами линии C57BL / 6 в качестве реципиентов. Причина использования мышей C57BL / 6 в качестве реципиентов заключалась в том, что этот штамм является фоновым штаммом, используемым для развития большинства нокаутных и трансгенных мышей. Мы ожидаем, что эти нокаутные или трансгенные мыши будут использоваться в будущих исследованиях, направленных на более детальное изучение механизмов отторжения в пересаженной матке или в экспериментах по физиологии беременности.Более того, наши предыдущие эксперименты, включающие сингенную трансплантацию, были выполнены на гибридах F1 линии реципиента настоящего исследования, мышей C57BL / 6 и CBA (Racho El-Akouri et al. , 2003). Штамм мышей-доноров (BALB / c), использованный в настоящем исследовании, представляет собой линию мышей-альбиносов, которая наиболее широко используется в биомедицинских исследованиях (Potter, 1985).

Главный комплекс гистосовместимости (MHC) мыши, H-2, имеет свои генетические локусы на хромосоме 17 и гомологичен HLA у человека.Гаплотипы комплекса H-2 определяются комбинацией аллелей генов класса I, класса II и класса III (Klein et al. , 1983). Гаплотипы H-2 мышей BALB / c и C57BL / 6 обозначены как H-2 d и H-2 b соответственно. Эти два гаплотипа демонстрируют несходство по всем аллелям, кроме одного (локус Q1 класса Ib). Таким образом, почти полностью аллогенная ситуация, выбранная в настоящем исследовании, будет соответствовать клинической ситуации донора и реципиента с несоответствием MHC как по основным, так и по второстепенным локусам MHC.

Модель мыши для трансплантации органов становится все более популярной благодаря достижениям в микрохирургии и молекулярной биологии. Однако знания о паттернах отторжения в этих мышиных моделях ограничены. В экспериментах с трансплантацией сердца, почек, печени и кишечника между разными линиями мышей оценивали мышей C57BL / 6 как доноров и мышей BALB / c как реципиентов (Zhang et al. , 1996). Это противоположная ситуация по сравнению с настоящим исследованием, и оценка BALB / c в качестве донора и C57BL / 6 в качестве реципиента не проводилась.В исследовании Zhang et al., Спонтанное принятие было замечено в 72 и 20% аллотрансплантатов печени и почек соответственно. Однако аллотрансплантаты сердца и кишечника были отвергнуты примерно через 9 дней. Результаты были аналогичными, когда BALB / c использовались в качестве доноров для мышей CBA. В исследовании с использованием ортотопической трансплантации каротидных аллотрансплантатов для проверки эффектов иммунодепрессантов мышей C57BL / 6 и BALB / c тестировали как доноры, так и реципиенты (Matsumoto et al. , 2004). Было показано, что отторжение реципиентов C57BL / 6 не подавлялось иммунодепрессантами в такой степени, как у реципиентов BALB / c.Взятые вместе, эти данные показывают, что такой орган, как сердце, который похож на матку в своем большом содержании мышечной ткани, будет отторгнут в течение более короткого времени, чем 9 дней, когда использовались доноры BALB / c и реципиенты C57BL / 6. . Это время отторжения несколько короче, чем то, что было обнаружено в настоящем исследовании в отношении матки.

В настоящем исследовании довольно большая часть животных была исключена из-за немедленных послеоперационных осложнений. Скорее всего, это следствие технически очень сложной диссекции и микрохирургии, связанной с этой процедурой.Неудачи, скорее всего, не были связаны с так называемым иммунологически опосредованным сверхострым отторжением, поскольку аналогичная часть мышей с неудачными трансплантатами наблюдалась в нашем предыдущем исследовании с использованием сингенной модели (Racho El-Akouri et al. , 2003). В ходе исследования было обнаружено, что манипуляции с трансплантатом и время теплой ишемии необходимо было сократить до минимума, чтобы предотвратить эти осложнения.

Макроскопический вид пересаженной матки в настоящем исследовании регистрировали как в отношении слизистой оболочки шейки матки (конец устьиц), так и в отношении внешнего вида серозной поверхности внутри брюшной полости.Первыми очевидными признаками отторжения были припухлость и изменение цвета, которые можно было увидеть только на 5-й день в брюшной полости. Это время соответствует первым гистологическим признакам воспаления. Эти результаты ранних макроскопических признаков отторжения сравнимы с тем, что сообщалось ранее для сердечных аллотрансплантатов крыс, с отеком, наблюдаемым примерно на 4-й день (Hayashi et al. , 1991). Точно так же аллотрансплантаты матки у собак были опухшими и гиперемическими на 4–5 дни (Wingate et al., 1970).

Макроскопические изменения, которые наблюдались в стоме маточного аллотрансплантата, довольно хорошо коррелировали с макроскопическим внутрибрюшным внешним видом, а также с гистологическими признаками отторжения. Первый макроскопический признак отторжения, наблюдаемый в стоме, был на 10-й день, когда наблюдалось заметное увеличение плотности Т-клеток как в эндометрии, так и в миометрии. Таким образом, экстериоризованный шейный конец матки можно удобно использовать для оценки жизнеспособности органа и различных фаз отторжения трансплантатов.Похожая ситуация присутствует в недавно разработанной мышиной модели трансплантации тонкой кишки (He et al. , 1998; Dindelegan et al. , 2003) с аналогичной кожной стомой. Стома также позволит неинвазивным способом получить биопсию из органа для более детальной оценки отторжения с помощью гистологии или иммуногистохимии.

Отторжение пересаженной матки стало макроскопически более очевидным со временем, когда матка стала более черноватой по цвету с полностью ненормальной текстурой.Стомы стали более темными и уменьшились в размерах. На срезах тканей повышенная инфильтрация воспалительных клеток, эндартериит и артериальные тромбы с некротической паренхимой наблюдались на 10-й и 15-й дни. Эти результаты соответствуют тяжелому острому отторжению и аналогичны результатам сердечных аллотрансплантатов на 8-15-й день (Zhang et al. др. , 1996; Ридерер и др. , 2002). Выживаемость аллотрансплантата и тяжесть отторжения зависят не только от несоответствия MHC, но также от конкретного органа, который пересаживают.Таким образом, у мышей наблюдается спонтанное принятие пересаженных печени и почек (Zhang et al. , 1996). С этой точки зрения кажется, что сердце и матка похожи, без спонтанного принятия и с одинаковым временем фаз отторжения.

Эндометрий является частью общей иммунной системы слизистых оболочек, которая обладает особыми характеристиками, обеспечивающими иммунологическую толерантность к сперме и зачатию, при активной защите матки от патогенных бактерий и вирусов.Гистологическое исследование в настоящем исследовании показало, что отторжение эндометрия происходит быстрее, чем отторжение миометрия. Таким образом, ранняя инфильтрация лимфоцитов наблюдалась в железах эндометрия, тогда как инфильтрация лимфоцитами происходила позже в миометрии. Миометрий оказался наиболее устойчивым к отторжению и дольше всех сохранял свою тканевую структуру. Эти результаты сопоставимы с результатами исследования аллотрансплантированной матки, проведенного на собаке (Scott et al., 1970), в котором пересаженная матка показала тотальный некроз эндометрия, но только мононуклеарную инфильтрацию и выраженный отек миометрия через 2 недели после трансплантации. Механизмом раннего отторжения эндометрия, скорее всего, является ранняя инвазия лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение Т-лимфоцитов в эндометрии уже на 2-й день. сравнение пересаженной матки с родной маткой во всех временных точках.В нашем предыдущем исследовании на модели сингенных мышей (Racho El-Akouri et al. , 2002) мы не смогли продемонстрировать каких-либо различий в кровотоке при оценке через 2 и 4 недели после операции. Вполне возможно, что кровоток в этих сингенных трансплантатах был ниже в течение первых недель после трансплантации, а затем кровоток увеличился до уровней, аналогичных таковому в собственной матке. Объяснение этой нормализации кровотока в сингенном трансплантате может заключаться в том, что резко сниженный кровоток из-за отсутствия кровотока в маточных ветвях яичниковой артерии медленно компенсируется кровотоком из маточной артерии.В аллогенной модели настоящего исследования события раннего отторжения будут препятствовать нормализации кровотока и в конечном итоге привести к уменьшению кровотока. Однако в трансплантатах тонкой кишки на мышиной модели не наблюдалось уменьшения кровотока после сингенной трансплантации при оценке с 1 по 8 день, но снижение наблюдалось в аллогенных трансплантатах с 3 дня (Dindelegan et al. , 2003) .

Гистологическим коррелятом этого снижения кровотока в матке, естественно, являются основные периваскулярные изменения, которые наблюдались примерно с 15 дня.Кроме того, тромбоз был замечен в отторженных трансплантатах после аллотрансплантации матки собаке (Wingate et al. , 1970). В этом исследовании тромбоз в основном наблюдался в крупных и средних артериях и венах с 3 по 28 день после трансплантации.

В заключение, аллотрансплантаты матки показывают ранние признаки отторжения с 5-го дня и тяжелое отторжение с 10-го по 15-й день после трансплантации. Паттерн отторжения этой мышиной модели довольно однороден, в отличие от нескольких комбинаций мышиного штамма трансплантации почек, которые показали как спонтанное принятие, так и отторжение (Zhang et al., 1996). Паттерн отторжения матки на мышиной модели, по-видимому, больше всего похож на паттерн трансплантации сердца.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энн Валлин, кафедру акушерства и гинекологии, Академию Сальгренска при Гетеборгском университете, за техническую помощь. Исследование было поддержано грантами Шведского исследовательского совета (№ 11607), медицинского факультета Академии Сальгренска и Исследовательского фонда Ялмара Свенссона.

Список литературы

(

2003

) Трансплантация матки.

Mt Sinai J Med

70

,

154

–162.

, Эль-Акури, Р.Р. и Враннинг, Калифорния (2003a) Трансплантация матки.

евро J Obstet Gynecol Reprod Biol

109

,

121

–123.

, Wranning CA и Racho El-Akouri R (2003b) Трансплантация матки.

Эндокринол клеток Mol

202

,

177

–184.

, Vermesh M, Thomas W. Jr и Gleicher N (

1986

) Несосудистая трансплантация матки кролика.

Int J Gynaecol Obstet

24

,

321

–325.

, Liden H, Kurlberg G, Oltean M, Nilsson O, Aneman A, Lycke N и Olausson M (

2003

) Лазерно-допплеровская флоуметрия надежна для ранней диагностики острого отторжения тонкой кишки у мышей.

Микрохирургия

23

,

233

–238.

, Раффа Х, Джаббад Х.и Marzouki A (

2002

) Трансплантация матки человека.

Int J Gynaecol Obstet

76

,

245

–251.

, Nozawa M, Otsu I., Deguchi H, Kitaura Y и Kawamura K (

1991

) Клеточно-опосредованная цитотоксичность при остром отторжении сердечного аллотрансплантата крысы: иммунологическое и ультраструктурное исследование.

Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол

418

,

41

–50.

, Hart J, Thistlethwaite JR Jr и Newell KA (

1998

) Модифицированная хирургическая модель паратопической трансплантации тонкой кишки у мышей.

J Surg Res

80

,

188

–193.

, Lupu CM, Zoica BS и Ionac M (

2003

) Экспериментальная модель гетеротопической трансплантации матки у лабораторных крыс.

Микрохирургия

23

,

246

–250.

, Фигероа Ф. и Дэвид К.С. (

1983

) Гаплотипы, гены и антигены H-2: второй список. II. Комплекс Н-2.

Иммуногенетика

17

,

553

–596.

, Мао Л., Ван И, Д’Сильва М., Ю Ч., Вольф П., Чанг В.С., Такахаши Э., Чунг Д.Й. и Гиттес РФ (

1995

) Трансплантация репродуктивных органов.

Микрохирургия

16

,

191

–198.

, Hof A, Baumlin Y, Muller M и Hof RP (

2004

) Дифференциальные эффекты эверолимуса и циклоспорина A на динамику альфа-актин-положительных клеток интимы каротидных аллотрансплантатов у мышей.

Трансплантация

78

,

345

–351.

, Джига Л., Ионак М., Райка М., Моток М. и Чиовски С. (

2003

) Предварительные результаты ортотопической трансплантации матки en bloc и яичников у лабораторных крыс.

Clin Exp Obstet Gynecol

30

,

239

–242.

(

1990

) Лазерно-доплеровская флоуметрия. Crit Rev

Biomed Eng

18

,

125

–163.

, Гал Д., Барзилай А., Хампель Н. и Мальбергер Э. (

1975

) Половые органы. Авто- и гомотрансплантация у сорока собак.

Int J Fertil

20

,

5

–12.

(

1985

) История семейства BALB / c.

Curr Top Microbiol Immunol

122

,

1

–5.

R, Kurlberg G, Dindelegan G, Mölne J, Wallin A и Brännström M (

2002

) Гетеротопическая трансплантация матки с помощью сосудистого анастомоза у мыши.

Дж Эндокринол

174

,

157

–166.

R, Kurlberg G и Brännström M (

2003

) Успешная трансплантация матки мыши: беременность и постнатальное развитие потомства.

Hum Reprod

18

,

2024

–2030.

, Сильва-Барбоса С.Д., Родригес М.Л. и Савино В. (

2002

) Местное лечение антиламининовыми антителами изменяет характер отторжения сердечных аллотрансплантатов мыши: корреляция между клеточной инфильтрацией и внеклеточным матриксом.

Трансплантация

74

,

1515

–1522.

, Андерсон В.Р., Клинг Т.Г. и Янноне М.Э. (

1970

) Трансплантация матки собакам.

Gynecol Invest

1

,

140

–148.

, Питкин Р.М. и Янноне М.Э. (

1971

) Трансплантация матки приматов.

Surg Gynecol Obstet

133

,

414

–418.

, Карасевич Э., Вингейт Л., Лаучиан С. и Рэй М. (

1970

) Экспериментальная гомотрансплантация маточно-кубовариальной оболочки на собаке.

Am J Obstet Gynecol

106

,

1171

–1176.

, Du Sold WD и Deliman RM (

1969

) Гомотрансплантация матки и яичников собакам. Предварительный отчет.

Am J Obstet Gynecol

104

,

1143

–1151.

, Mikuni M, Peterson MC, Nilsson B, Janson PO и Brännström M (

2000

) Доказательства участия механизмов, связанных с кровотоком, в овуляторном процессе у крыс.

Hum Reprod

15

,

264

–272.

, Zhu L, Quan D, Garcia B, Ozcay N, Duff J, Stiller C, Lazarovits A, Grant D и Zhong R (

1996

) Характер отторжения аллотрансплантата печени, почек, сердца и кишечника у разных линий мышей комбинации.

Трансплантация

62

,

1267

–1272.

Заметки автора

1 Кафедра акушерства и гинекологии, 2-я кафедра хирургии и 3-я кафедра патологии, Академия Сальгренска, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция

© Автор 2005.Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

паттернов отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей | Репродукция человека

Аннотация

ИСТОРИЯ: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку.Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши. Методы. Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопное положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ . Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2–28-е сутки после операции.РЕЗУЛЬТАТЫ: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление — с 10-го по 15-й день. На 28-й день наблюдались некроз и фиброз. Плотность Т-лимфоцитов (CD3 + ) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке был снижен с 15-го дня. Заключение. Была охарактеризована модель на мышах для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки.Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день. Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов на этой модели.

Введение

Трансплантация матки в настоящее время разрабатывается в качестве потенциального метода лечения пациентов с абсолютным бесплодием из-за фактора матки (Altchek 2003; Brännström et al. , 2003a, b). Пациенты, которые могут быть рассмотрены для этой процедуры, — это женщины с сохраненными яичниками, но с отсутствием матки из-за врожденной аномалии Мюллера или перенесенной гистерэктомии.Кроме того, для этой процедуры могут быть рассмотрены пациенты с сохраненной, но нефункционирующей маткой в ​​отношении имплантации эмбриона или сохранения беременности (например, из-за лейомиомы или внутриматочных спаек) (Brannstrom et al. , 2003b ). Недавно сообщалось о случае трансплантации матки человеку у женщины, которая ранее потеряла матку во время послеродовой гистерэктомии (Fageeh et al. , 2002). Эта трансплантированная матка выжила только 99 дней, несмотря на первоначальную иммуносупрессию циклоспорином А, азатиоприном и преднизолоном, впоследствии усиленную антитимоцитарным глобулином.Таким образом, мы считаем, что эта попытка была преждевременной, поскольку важные вопросы, такие как механизмы отторжения матки, подходящие иммунодепрессанты и переносимость трансплантированной матки в отношении беременности, не были протестированы ни на одной животной модели.

Когда рассматривается новый тип органа для трансплантации, хирургическая техника, процесс отторжения этого конкретного органа и средства подавления отторжения должны быть тщательно исследованы. Механизм отторжения матки особо не исследовался, хотя сообщалось об аллогенной трансплантации у собак (Yonemoto et al., 1969; Скотт и др. , 1970; Wingate et al. , 1970; Paldi et al. , 1975), кролика (Confino et al. , 1986) и макака-резус (Scott et al. , 1971) несколько десятилетий назад. В этих отчетах просто делается вывод о том, что произошел отказ, и они не характеризуют процесс в каких-либо подробностях. Недавно были представлены данные о методах трансплантации en bloc матка – яйцевод – яичник крысам, и было заявлено, что тяжелое отторжение произошло в течение 2 дней (Lee et al., 1995; Jiga et al. , 2003 г .; Motoc et al. , 2003).

Наша группа решила разработать модель трансплантации матки на мышах (Racho El-Akouri et al. , 2002), поскольку этот вид имеет очевидные преимущества перед другими моделями животных в этом исследовании из-за хорошо охарактеризованной репродуктивной физиологии и иммунологии и доступности инбредных и генетически удаленных линий мышей. В модели трансплантации матки сингенной мыши наблюдаются нормальные показатели имплантации и беременности (Racho El-Akouri et al., 2003).

Увеличиваются знания о механизмах специфичности органа в отношении интенсивности и типа отторжения. Матка с ее особой местной иммунологией во время беременности, когда полуаллогенный плод выживает, несмотря на присутствие материнских Т-клеток, специфичных для унаследованных от отца антигенов гистосовместимости, может иметь уникальные особенности. Поскольку матка может обладать особыми иммунологическими свойствами также в отношении местных механизмов отторжения, важно детально изучить процесс отторжения в этом органе, а затем разработать способы контроля отторжения или стимулирования толерантности как у беременной, так и у беременной. небеременное состояние.Иммуноопосредованное отторжение трансплантата будет основной проблемой при трансплантации матки, как и при трансплантации других органов.

В настоящем исследовании паттерн отторжения пересаженной матки на полностью аллогенной модели мышей охарактеризован несколькими методами.

Материалы и методы

Животные

инбредных самок мышей C57BL / 6 и BALB / c (M&B, Ry, Дания) в возрасте 6–8 недель содержали в контролируемых условиях (21–23 ° C, относительная влажность 50–60%, освещение между 07.00 и 19.00 ч) с водой и гранулированным кормом ad libitum . Тридцать две из 63 оперированных мышей-реципиентов были исключены из исследования из-за немедленных послеоперационных осложнений. Эти 32 животных были потеряны либо из-за кровотечения ( n = 11), либо из-за того, что пересаженная матка не показала кровоток через маточную артерию и / или вену ( n = 21) при немедленном осмотре после сосудистого анастомоза. было выполнено. Эксперименты были одобрены местным комитетом по этике животных и проводились в соответствии с принципами и процедурами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Национальные институты здравоохранения, США).

Донорская операция Донорами матки служили

мышей BALB / c. Изоляцию одного рога матки, включая шейку матки и соединительную сосудистую сеть, проводили, как описано ранее (Racho El-Akouri et al. , 2002, 2003). Причина использования одностороннего рога матки, а не всей матки заключалась в том, что односторонняя процедура позволила изолировать тазовую сосудистую сеть на дорсальной стороне матки (Racho El-Akouri et al., 2002). Вкратце, под анестезией изофлураном (2%) правый рог матки и шейка матки вместе с питающими и дренирующими сосудами (правые маточные сосуды, правые гипогастральные сосуды, правые общие подвздошные сосуды, полая вена и аорта) были аккуратно изолированы с помощью микрохирургической диссекции. Другие ветвящиеся сосуды (правые нижние брыжеечные сосуды, правые нижние надчревные сосуды, левые общие подвздошные сосуды, каудальная артерия, правые наружные подвздошные сосуды, правые половые сосуды и поясничные сосуды) прижигали и разрезали для предотвращения утечки из образца.Мочевой пузырь был удален, и шейка матки была рассечена ниже места ее прикрепления к мочевому пузырю. Затем аорту и полую вену отделяли от уровня разветвления почечных сосудов на 3–4 мм каудально. Лигатуру накладывали краниально на верхушку правого рога матки, и матку отделяли от яйцевода и яичника и отделяли от дорсальной брюшины. Аорта и полая вена были привязаны каудально к разветвлению сосудов яичника, и после канюляции аорты (игла 30 G) и разреза в полую вену образец осторожно промыли 0.154 моль / л NaCl (4 ° C) с добавлением 100 МЕ / мл сульфата гепарина (Leo Pharma, Мальме, Швеция) и 0,2 мг / мл ксилокаина (Astra Zeneca, Гетеборг, Швеция) для удаления крови из матки. Затем матку выдерживали в 0,154 моль / л NaCl (4 ° C) в течение 20 минут во время хирургической подготовки животного-реципиента (см. Ниже) и подготовки пробы на заднем столе.

Операция получателя Реципиентами маточного трансплантата служили

мышей C57BL / 6. Хирургическое вмешательство (под анестезией изофлураном) было выполнено через лапаротомный разрез по средней линии после подкожного введения 15 МЕ гепаринсульфата.Были мобилизованы аорта и полая вена, и кровоостанавливающие зажимы были помещены вокруг сосудов en bloc . Анастомозы «конец-в-бок» аорта-аорта и полость-полость выполнялись с использованием техники прерывистого и непрерывного (нейлон 11-0) швов, соответственно. Затем шейку трансплантата выводили наружу через круговой разрез на правой стороне живота и подшивали к коже для создания стомы. Рубец лапаротомии закрыли и 1 мл раствора, содержащего 0,154 моль / л NaCl и глюкозу (50 мг / мл), вводили подкожно для корректировки потери жидкости и для коррекции любой гипогликемии.

Общая морфология и лазерная доплеровская флоуметрия

Мышь анестезировали и выполняли лапаротомию по средней линии. Первоначально матки и стомы реципиентов исследовали с помощью операционного микроскопа на 2, 5, 10, 15 и 28 день после операции во время анестезии. Затем для оценки кровоснабжения тканей использовался метод лазерной доплеровской флоуметрии (Öberg, 1990). Этот метод ранее использовался для исследования кровотока в яичниках крыс (Zackrisson et al., 2000) и матки мыши (Racho El-Akouri et al. , 2002) в определенное время (см. Выше). Лазерный доплеровский мини-зонд (Perimed, Järfälla, Швеция) помещали в просвет как пересаженной, так и родной матки для регистрации кровотока (расходомер Periflux 5000; Perimed) в течение 2–3 минут. Кровоток выражали в произвольных единицах перфузии (ПЕ).

Световая микроскопия и иммуногистохимия

Мышей убивали из-за смещения шейных позвонков во время анестезии в определенное время (см. Выше).Родная матка и матка с пересаженной маткой были рассечены и рассечены пополам. Одну часть разделенной пополам матки фиксировали в растворе, содержащем 4% параформальдегида в концентрации 0,1 моль / л какодилатного натриевого буфера (pH 7,4). Затем ткань обезвоживали, заливали парафином и делали срезы (~ 4 мкм) для световой микроскопии. Было проведено окрашивание гематоксилином и эозином, эластином – ван Гизоном, ван Гизоном и периодной кислотой – Шиффом. Слайды исследовали под световым микроскопом, и цифровые изображения получали с помощью камеры SPOT ™ (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, США).

Другая половина матки была заморожена в OCT (Sakura Finetek Europe, Zoterwoude, Нидерланды). Эту ткань матки (нативную, трансплантат) 2, 5 и 10 дней после операции делали на срезы (~ 4 мкм), фиксировали в ацетоне в течение 5 минут и затем блокировали 1,5% нормальной кроличьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS; NaCl 0,13 моль / моль / л). л, Na 2 HPO 4 0,015 моль / л, KH 2 PO 4 0,004 моль / л) в течение 30 мин. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным моноклональным антителом (молекулярный комплекс крысиных антимышиных CD-3; BD PharMingen, Сан-Диего, Калифорния, США) при разведении 1: 1000 в PBS и 1.5% нормальная кроличья сыворотка. После трех промывок в PBS срезы инкубировали в конъюгированном с пероксидазой, биотинилированном, адсорбированном мышами кроличьем антикрысином IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) в PBS и реагенте Vectastain ABC (Vector Laboratories) в течение 30 мин. с последующей инкубацией с субстратом пероксидазы диаминобензидинтетрагидрохлоридом в течение 5 мин. Срезы контрастировали гематоксилином. Отрицательный контроль выполняли путем замены первичного антитела на PBS.

Число положительных клеток оценивали путем подсчета количества окрашенных клеток в выровненной сетке (10 × 10 квадратов), занимающих площадь на участке 0.125 мм 2 с использованием объектива 20 × и окуляра 10 ×. В каждой матке подсчитывали пять случайно выбранных областей в миометрии и пять областей считали в пределах эндометрия (определяемого как область от поверхности просвета до самого базального железистого эпителия). Среднее значение этих значений было вычислено, и это значение использовалось в качестве точки данных. Подсчитывали одну секцию от аборигенной и одну секцию от пересаженной матки от каждого из пяти животных в каждой группе. Подсчет проводился независимо двумя наблюдателями, оба не знали протокола лечения.Значения, полученные двумя наблюдателями, различались не более чем на 15%.

Статистический анализ

Непараметрические тесты (ранговый тест Краскела – Уоллиса, тест Манна – Уитни U -тест) использовались при анализе данных, поскольку мы не предполагали нормального распределения точек данных. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Общий вид

Общие результаты по внешнему виду представлены в Таблице I.Визуальный и тактильный осмотр пересаженной матки на 2-й день показал общий вид, сходный с таковым у родной матки. Пульсация в аортальном сегменте трансплантата и кровотечение маточной ткани в норме. На 5-й день у большинства пересаженных маток появились признаки отека и изменения цвета на более красноватый (рис. 1а). Пульсация аорты и кровотечение из ткани матки оставались нормальными. Стомы были мягкими и нормального цвета (рис. 1б). На 10-й день все матки были ненормального цвета, с красноватым или черноватым оттенком.Три из пяти маток имели явно более твердую консистенцию, а кровотечение из ткани матки не наблюдалось ни при одном трансплантате. Ни одна из маток не опухла, но две из пяти показали изменение внешнего вида стомы. Полностью ненормальная текстура и опухоль матки были очевидны на 15-й день (рис. 1c). На этом этапе пульсация аорты присутствовала в четырех из пяти трансплантатов, и большинство стом (четыре из пяти) были сморщены, а слизистая оболочка приобрела более темный цвет (рис. 1d). На 28 день размер матки значительно уменьшился, и они, как правило, были беловатого цвета (рис. 1e) и плотной текстуры.Большинство стом показало заметное сжатие (рис. 1f), а пульсация питающей аорты наблюдалась только в одной из пяти пересаженных маток.

Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день ) после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Гистология и плотность Т-лимфоцитов

На 2-й день гистологический вид нативной и пересаженной матки был схожим, с небольшими популяциями воспалительных клеток и минимальным отеком (рис. 2a и b).

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативной (a, e, j) и привитой (b – d, f – i) матки. . В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а). В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка).В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации. Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h).Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативного (a, e, j) и привитого (b – d, f – i) матки. В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а).В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка). В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации.Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h). Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

На 5 день появились признаки увеличения количества воспалительных клеток в мышечном слое пересаженной матки, а также отек (рис. 2c). Кроме того, разбросанные лимфоциты были обнаружены на эпителиальной стороне базальной пластинки как железистого, так и просветного эпителия.Также наблюдался застой крови в мелких сосудах (в основном венулах) (рис. 2с). Однако не было никаких свидетельств эндартериита артерий или эндотелиалита более крупных вен.

На 10-й и 15-й дни у животных двух групп характерные черты частично совпадали. На 10-й день матка была сильно воспалена по всей стенке матки, и в железистом эпителии присутствовало множество лимфоцитов (рис. 2d, g). Также наблюдался очаговый апоптоз, но в этот момент некроз не был очевиден.Кровеносные сосуды были переполнены, и были признаки эндартериита в более крупных артериях с лимфоцитами, проникающими в эндотелиальный слой в интиму (рис. 2h). На 15-й день четыре из пяти трансплантатов матки показали гистологические признаки тяжелого отторжения с артериальными тромбами и некротической паренхимой (рис. 2f). Один трансплантат на 15-й день имел гистологический вид, аналогичный таковому на 10-й день. Нативная матка 15-го дня (рис. 2е) выглядела слегка отечной, но без какого-либо видимого увеличения воспалительных клеток.На 28 день ни в одной из пересаженных маток не было жизнеспособной паренхимы. Был массивный центральный некроз и только периферический край фиброзной ткани.

Плотность Т-клеток в миометрии (Рисунок 3a) и эндометрии (Рисунок 3b) была выше в пересаженной матке (Рисунок 2i) по сравнению с нативной маткой (Рисунок 2j) со 2-го и 5-го дня, соответственно. Не было зависимых от времени изменений плотности Т-клеток в миометрии или эндометрии в естественной матке (рис. 3a, b).Однако плотность Т-клеток как в миометрии, так и в эндометрии в пересаженной матке была значительно выше на 5-й и 10-й день по сравнению со 2-м днем ​​(рис. 3a, b).

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и родной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = значимо ( P <0.05, P <0,01) выше, чем у уроженца того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и нативной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0.01) выше, чем уроженец того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Кровоток

Кровоток был значительно ниже в пересаженной матке по сравнению с естественной маткой во все моменты времени (рис. 4). Не было значительных зависимых от времени изменений кровотока в родной матке. В пересаженной матке наблюдалось значительное изменение кровотока с более низкими уровнями на 15 и 28 дни по сравнению со 2 и 5 днями.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по оценке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2 и 5 дней.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по данным лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2-го и 5-го дней.

Обсуждение

Чтобы создать подходящую модельную систему для фундаментальных исследований по вопросу трансплантации матки, мы разработали модель мыши с использованием микрохирургического сосудистого анастомоза и гетеротопического размещения пересаженной матки параллельно родной контрольной матке (Racho El-Akouri et al., 2002). В последнем исследовании хирургическая техника была разработана и отработана с использованием инбредных мышей (B6 CBAF1) в качестве донора и реципиента, а трансплантированная матка показала способность вынашивать беременность (Racho El-Akouri et al. , 2002) и дают потомство с нормальной траекторией постнатального роста (Racho El-Akouri et al. , 2003). В совокупности эти первоначальные исследования продемонстрировали возможность использования этой модели в исследованиях по развитию трансплантации матки в качестве клинической процедуры лечения маточного бесплодия.В настоящем исследовании мы охарактеризовали механизмы отторжения, сделав наблюдения на нескольких уровнях в полностью аллогенной модели трансплантации матки у мышей.

Использовали полностью аллогенную модель мышей с мышами линии BALB / c в качестве доноров матки и мышами линии C57BL / 6 в качестве реципиентов. Причина использования мышей C57BL / 6 в качестве реципиентов заключалась в том, что этот штамм является фоновым штаммом, используемым для развития большинства нокаутных и трансгенных мышей. Мы ожидаем, что эти нокаутные или трансгенные мыши будут использоваться в будущих исследованиях, направленных на более детальное изучение механизмов отторжения в пересаженной матке или в экспериментах по физиологии беременности.Более того, наши предыдущие эксперименты, включающие сингенную трансплантацию, были выполнены на гибридах F1 линии реципиента настоящего исследования, мышей C57BL / 6 и CBA (Racho El-Akouri et al. , 2003). Штамм мышей-доноров (BALB / c), использованный в настоящем исследовании, представляет собой линию мышей-альбиносов, которая наиболее широко используется в биомедицинских исследованиях (Potter, 1985).

Главный комплекс гистосовместимости (MHC) мыши, H-2, имеет свои генетические локусы на хромосоме 17 и гомологичен HLA у человека.Гаплотипы комплекса H-2 определяются комбинацией аллелей генов класса I, класса II и класса III (Klein et al. , 1983). Гаплотипы H-2 мышей BALB / c и C57BL / 6 обозначены как H-2 d и H-2 b соответственно. Эти два гаплотипа демонстрируют несходство по всем аллелям, кроме одного (локус Q1 класса Ib). Таким образом, почти полностью аллогенная ситуация, выбранная в настоящем исследовании, будет соответствовать клинической ситуации донора и реципиента с несоответствием MHC как по основным, так и по второстепенным локусам MHC.

Модель мыши для трансплантации органов становится все более популярной благодаря достижениям в микрохирургии и молекулярной биологии. Однако знания о паттернах отторжения в этих мышиных моделях ограничены. В экспериментах с трансплантацией сердца, почек, печени и кишечника между разными линиями мышей оценивали мышей C57BL / 6 как доноров и мышей BALB / c как реципиентов (Zhang et al. , 1996). Это противоположная ситуация по сравнению с настоящим исследованием, и оценка BALB / c в качестве донора и C57BL / 6 в качестве реципиента не проводилась.В исследовании Zhang et al., Спонтанное принятие было замечено в 72 и 20% аллотрансплантатов печени и почек соответственно. Однако аллотрансплантаты сердца и кишечника были отвергнуты примерно через 9 дней. Результаты были аналогичными, когда BALB / c использовались в качестве доноров для мышей CBA. В исследовании с использованием ортотопической трансплантации каротидных аллотрансплантатов для проверки эффектов иммунодепрессантов мышей C57BL / 6 и BALB / c тестировали как доноры, так и реципиенты (Matsumoto et al. , 2004). Было показано, что отторжение реципиентов C57BL / 6 не подавлялось иммунодепрессантами в такой степени, как у реципиентов BALB / c.Взятые вместе, эти данные показывают, что такой орган, как сердце, который похож на матку в своем большом содержании мышечной ткани, будет отторгнут в течение более короткого времени, чем 9 дней, когда использовались доноры BALB / c и реципиенты C57BL / 6. . Это время отторжения несколько короче, чем то, что было обнаружено в настоящем исследовании в отношении матки.

В настоящем исследовании довольно большая часть животных была исключена из-за немедленных послеоперационных осложнений. Скорее всего, это следствие технически очень сложной диссекции и микрохирургии, связанной с этой процедурой.Неудачи, скорее всего, не были связаны с так называемым иммунологически опосредованным сверхострым отторжением, поскольку аналогичная часть мышей с неудачными трансплантатами наблюдалась в нашем предыдущем исследовании с использованием сингенной модели (Racho El-Akouri et al. , 2003). В ходе исследования было обнаружено, что манипуляции с трансплантатом и время теплой ишемии необходимо было сократить до минимума, чтобы предотвратить эти осложнения.

Макроскопический вид пересаженной матки в настоящем исследовании регистрировали как в отношении слизистой оболочки шейки матки (конец устьиц), так и в отношении внешнего вида серозной поверхности внутри брюшной полости.Первыми очевидными признаками отторжения были припухлость и изменение цвета, которые можно было увидеть только на 5-й день в брюшной полости. Это время соответствует первым гистологическим признакам воспаления. Эти результаты ранних макроскопических признаков отторжения сравнимы с тем, что сообщалось ранее для сердечных аллотрансплантатов крыс, с отеком, наблюдаемым примерно на 4-й день (Hayashi et al. , 1991). Точно так же аллотрансплантаты матки у собак были опухшими и гиперемическими на 4–5 дни (Wingate et al., 1970).

Макроскопические изменения, которые наблюдались в стоме маточного аллотрансплантата, довольно хорошо коррелировали с макроскопическим внутрибрюшным внешним видом, а также с гистологическими признаками отторжения. Первый макроскопический признак отторжения, наблюдаемый в стоме, был на 10-й день, когда наблюдалось заметное увеличение плотности Т-клеток как в эндометрии, так и в миометрии. Таким образом, экстериоризованный шейный конец матки можно удобно использовать для оценки жизнеспособности органа и различных фаз отторжения трансплантатов.Похожая ситуация присутствует в недавно разработанной мышиной модели трансплантации тонкой кишки (He et al. , 1998; Dindelegan et al. , 2003) с аналогичной кожной стомой. Стома также позволит неинвазивным способом получить биопсию из органа для более детальной оценки отторжения с помощью гистологии или иммуногистохимии.

Отторжение пересаженной матки стало макроскопически более очевидным со временем, когда матка стала более черноватой по цвету с полностью ненормальной текстурой.Стомы стали более темными и уменьшились в размерах. На срезах тканей повышенная инфильтрация воспалительных клеток, эндартериит и артериальные тромбы с некротической паренхимой наблюдались на 10-й и 15-й дни. Эти результаты соответствуют тяжелому острому отторжению и аналогичны результатам сердечных аллотрансплантатов на 8-15-й день (Zhang et al. др. , 1996; Ридерер и др. , 2002). Выживаемость аллотрансплантата и тяжесть отторжения зависят не только от несоответствия MHC, но также от конкретного органа, который пересаживают.Таким образом, у мышей наблюдается спонтанное принятие пересаженных печени и почек (Zhang et al. , 1996). С этой точки зрения кажется, что сердце и матка похожи, без спонтанного принятия и с одинаковым временем фаз отторжения.

Эндометрий является частью общей иммунной системы слизистых оболочек, которая обладает особыми характеристиками, обеспечивающими иммунологическую толерантность к сперме и зачатию, при активной защите матки от патогенных бактерий и вирусов.Гистологическое исследование в настоящем исследовании показало, что отторжение эндометрия происходит быстрее, чем отторжение миометрия. Таким образом, ранняя инфильтрация лимфоцитов наблюдалась в железах эндометрия, тогда как инфильтрация лимфоцитами происходила позже в миометрии. Миометрий оказался наиболее устойчивым к отторжению и дольше всех сохранял свою тканевую структуру. Эти результаты сопоставимы с результатами исследования аллотрансплантированной матки, проведенного на собаке (Scott et al., 1970), в котором пересаженная матка показала тотальный некроз эндометрия, но только мононуклеарную инфильтрацию и выраженный отек миометрия через 2 недели после трансплантации. Механизмом раннего отторжения эндометрия, скорее всего, является ранняя инвазия лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение Т-лимфоцитов в эндометрии уже на 2-й день. сравнение пересаженной матки с родной маткой во всех временных точках.В нашем предыдущем исследовании на модели сингенных мышей (Racho El-Akouri et al. , 2002) мы не смогли продемонстрировать каких-либо различий в кровотоке при оценке через 2 и 4 недели после операции. Вполне возможно, что кровоток в этих сингенных трансплантатах был ниже в течение первых недель после трансплантации, а затем кровоток увеличился до уровней, аналогичных таковому в собственной матке. Объяснение этой нормализации кровотока в сингенном трансплантате может заключаться в том, что резко сниженный кровоток из-за отсутствия кровотока в маточных ветвях яичниковой артерии медленно компенсируется кровотоком из маточной артерии.В аллогенной модели настоящего исследования события раннего отторжения будут препятствовать нормализации кровотока и в конечном итоге привести к уменьшению кровотока. Однако в трансплантатах тонкой кишки на мышиной модели не наблюдалось уменьшения кровотока после сингенной трансплантации при оценке с 1 по 8 день, но снижение наблюдалось в аллогенных трансплантатах с 3 дня (Dindelegan et al. , 2003) .

Гистологическим коррелятом этого снижения кровотока в матке, естественно, являются основные периваскулярные изменения, которые наблюдались примерно с 15 дня.Кроме того, тромбоз был замечен в отторженных трансплантатах после аллотрансплантации матки собаке (Wingate et al. , 1970). В этом исследовании тромбоз в основном наблюдался в крупных и средних артериях и венах с 3 по 28 день после трансплантации.

В заключение, аллотрансплантаты матки показывают ранние признаки отторжения с 5-го дня и тяжелое отторжение с 10-го по 15-й день после трансплантации. Паттерн отторжения этой мышиной модели довольно однороден, в отличие от нескольких комбинаций мышиного штамма трансплантации почек, которые показали как спонтанное принятие, так и отторжение (Zhang et al., 1996). Паттерн отторжения матки на мышиной модели, по-видимому, больше всего похож на паттерн трансплантации сердца.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энн Валлин, кафедру акушерства и гинекологии, Академию Сальгренска при Гетеборгском университете, за техническую помощь. Исследование было поддержано грантами Шведского исследовательского совета (№ 11607), медицинского факультета Академии Сальгренска и Исследовательского фонда Ялмара Свенссона.

Список литературы

(

2003

) Трансплантация матки.

Mt Sinai J Med

70

,

154

–162.

, Эль-Акури, Р.Р. и Враннинг, Калифорния (2003a) Трансплантация матки.

евро J Obstet Gynecol Reprod Biol

109

,

121

–123.

, Wranning CA и Racho El-Akouri R (2003b) Трансплантация матки.

Эндокринол клеток Mol

202

,

177

–184.

, Vermesh M, Thomas W. Jr и Gleicher N (

1986

) Несосудистая трансплантация матки кролика.

Int J Gynaecol Obstet

24

,

321

–325.

, Liden H, Kurlberg G, Oltean M, Nilsson O, Aneman A, Lycke N и Olausson M (

2003

) Лазерно-допплеровская флоуметрия надежна для ранней диагностики острого отторжения тонкой кишки у мышей.

Микрохирургия

23

,

233

–238.

, Раффа Х, Джаббад Х.и Marzouki A (

2002

) Трансплантация матки человека.

Int J Gynaecol Obstet

76

,

245

–251.

, Nozawa M, Otsu I., Deguchi H, Kitaura Y и Kawamura K (

1991

) Клеточно-опосредованная цитотоксичность при остром отторжении сердечного аллотрансплантата крысы: иммунологическое и ультраструктурное исследование.

Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол

418

,

41

–50.

, Hart J, Thistlethwaite JR Jr и Newell KA (

1998

) Модифицированная хирургическая модель паратопической трансплантации тонкой кишки у мышей.

J Surg Res

80

,

188

–193.

, Lupu CM, Zoica BS и Ionac M (

2003

) Экспериментальная модель гетеротопической трансплантации матки у лабораторных крыс.

Микрохирургия

23

,

246

–250.

, Фигероа Ф. и Дэвид К.С. (

1983

) Гаплотипы, гены и антигены H-2: второй список. II. Комплекс Н-2.

Иммуногенетика

17

,

553

–596.

, Мао Л., Ван И, Д’Сильва М., Ю Ч., Вольф П., Чанг В.С., Такахаши Э., Чунг Д.Й. и Гиттес РФ (

1995

) Трансплантация репродуктивных органов.

Микрохирургия

16

,

191

–198.

, Hof A, Baumlin Y, Muller M и Hof RP (

2004

) Дифференциальные эффекты эверолимуса и циклоспорина A на динамику альфа-актин-положительных клеток интимы каротидных аллотрансплантатов у мышей.

Трансплантация

78

,

345

–351.

, Джига Л., Ионак М., Райка М., Моток М. и Чиовски С. (

2003

) Предварительные результаты ортотопической трансплантации матки en bloc и яичников у лабораторных крыс.

Clin Exp Obstet Gynecol

30

,

239

–242.

(

1990

) Лазерно-доплеровская флоуметрия. Crit Rev

Biomed Eng

18

,

125

–163.

, Гал Д., Барзилай А., Хампель Н. и Мальбергер Э. (

1975

) Половые органы. Авто- и гомотрансплантация у сорока собак.

Int J Fertil

20

,

5

–12.

(

1985

) История семейства BALB / c.

Curr Top Microbiol Immunol

122

,

1

–5.

R, Kurlberg G, Dindelegan G, Mölne J, Wallin A и Brännström M (

2002

) Гетеротопическая трансплантация матки с помощью сосудистого анастомоза у мыши.

Дж Эндокринол

174

,

157

–166.

R, Kurlberg G и Brännström M (

2003

) Успешная трансплантация матки мыши: беременность и постнатальное развитие потомства.

Hum Reprod

18

,

2024

–2030.

, Сильва-Барбоса С.Д., Родригес М.Л. и Савино В. (

2002

) Местное лечение антиламининовыми антителами изменяет характер отторжения сердечных аллотрансплантатов мыши: корреляция между клеточной инфильтрацией и внеклеточным матриксом.

Трансплантация

74

,

1515

–1522.

, Андерсон В.Р., Клинг Т.Г. и Янноне М.Э. (

1970

) Трансплантация матки собакам.

Gynecol Invest

1

,

140

–148.

, Питкин Р.М. и Янноне М.Э. (

1971

) Трансплантация матки приматов.

Surg Gynecol Obstet

133

,

414

–418.

, Карасевич Э., Вингейт Л., Лаучиан С. и Рэй М. (

1970

) Экспериментальная гомотрансплантация маточно-кубовариальной оболочки на собаке.

Am J Obstet Gynecol

106

,

1171

–1176.

, Du Sold WD и Deliman RM (

1969

) Гомотрансплантация матки и яичников собакам. Предварительный отчет.

Am J Obstet Gynecol

104

,

1143

–1151.

, Mikuni M, Peterson MC, Nilsson B, Janson PO и Brännström M (

2000

) Доказательства участия механизмов, связанных с кровотоком, в овуляторном процессе у крыс.

Hum Reprod

15

,

264

–272.

, Zhu L, Quan D, Garcia B, Ozcay N, Duff J, Stiller C, Lazarovits A, Grant D и Zhong R (

1996

) Характер отторжения аллотрансплантата печени, почек, сердца и кишечника у разных линий мышей комбинации.

Трансплантация

62

,

1267

–1272.

Заметки автора

1 Кафедра акушерства и гинекологии, 2-я кафедра хирургии и 3-я кафедра патологии, Академия Сальгренска, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция

© Автор 2005.Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

паттернов отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей | Репродукция человека

Аннотация

ИСТОРИЯ: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку.Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши. Методы. Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопное положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ . Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2–28-е сутки после операции.РЕЗУЛЬТАТЫ: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление — с 10-го по 15-й день. На 28-й день наблюдались некроз и фиброз. Плотность Т-лимфоцитов (CD3 + ) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке был снижен с 15-го дня. Заключение. Была охарактеризована модель на мышах для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки.Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день. Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов на этой модели.

Введение

Трансплантация матки в настоящее время разрабатывается в качестве потенциального метода лечения пациентов с абсолютным бесплодием из-за фактора матки (Altchek 2003; Brännström et al. , 2003a, b). Пациенты, которые могут быть рассмотрены для этой процедуры, — это женщины с сохраненными яичниками, но с отсутствием матки из-за врожденной аномалии Мюллера или перенесенной гистерэктомии.Кроме того, для этой процедуры могут быть рассмотрены пациенты с сохраненной, но нефункционирующей маткой в ​​отношении имплантации эмбриона или сохранения беременности (например, из-за лейомиомы или внутриматочных спаек) (Brannstrom et al. , 2003b ). Недавно сообщалось о случае трансплантации матки человеку у женщины, которая ранее потеряла матку во время послеродовой гистерэктомии (Fageeh et al. , 2002). Эта трансплантированная матка выжила только 99 дней, несмотря на первоначальную иммуносупрессию циклоспорином А, азатиоприном и преднизолоном, впоследствии усиленную антитимоцитарным глобулином.Таким образом, мы считаем, что эта попытка была преждевременной, поскольку важные вопросы, такие как механизмы отторжения матки, подходящие иммунодепрессанты и переносимость трансплантированной матки в отношении беременности, не были протестированы ни на одной животной модели.

Когда рассматривается новый тип органа для трансплантации, хирургическая техника, процесс отторжения этого конкретного органа и средства подавления отторжения должны быть тщательно исследованы. Механизм отторжения матки особо не исследовался, хотя сообщалось об аллогенной трансплантации у собак (Yonemoto et al., 1969; Скотт и др. , 1970; Wingate et al. , 1970; Paldi et al. , 1975), кролика (Confino et al. , 1986) и макака-резус (Scott et al. , 1971) несколько десятилетий назад. В этих отчетах просто делается вывод о том, что произошел отказ, и они не характеризуют процесс в каких-либо подробностях. Недавно были представлены данные о методах трансплантации en bloc матка – яйцевод – яичник крысам, и было заявлено, что тяжелое отторжение произошло в течение 2 дней (Lee et al., 1995; Jiga et al. , 2003 г .; Motoc et al. , 2003).

Наша группа решила разработать модель трансплантации матки на мышах (Racho El-Akouri et al. , 2002), поскольку этот вид имеет очевидные преимущества перед другими моделями животных в этом исследовании из-за хорошо охарактеризованной репродуктивной физиологии и иммунологии и доступности инбредных и генетически удаленных линий мышей. В модели трансплантации матки сингенной мыши наблюдаются нормальные показатели имплантации и беременности (Racho El-Akouri et al., 2003).

Увеличиваются знания о механизмах специфичности органа в отношении интенсивности и типа отторжения. Матка с ее особой местной иммунологией во время беременности, когда полуаллогенный плод выживает, несмотря на присутствие материнских Т-клеток, специфичных для унаследованных от отца антигенов гистосовместимости, может иметь уникальные особенности. Поскольку матка может обладать особыми иммунологическими свойствами также в отношении местных механизмов отторжения, важно детально изучить процесс отторжения в этом органе, а затем разработать способы контроля отторжения или стимулирования толерантности как у беременной, так и у беременной. небеременное состояние.Иммуноопосредованное отторжение трансплантата будет основной проблемой при трансплантации матки, как и при трансплантации других органов.

В настоящем исследовании паттерн отторжения пересаженной матки на полностью аллогенной модели мышей охарактеризован несколькими методами.

Материалы и методы

Животные

инбредных самок мышей C57BL / 6 и BALB / c (M&B, Ry, Дания) в возрасте 6–8 недель содержали в контролируемых условиях (21–23 ° C, относительная влажность 50–60%, освещение между 07.00 и 19.00 ч) с водой и гранулированным кормом ad libitum . Тридцать две из 63 оперированных мышей-реципиентов были исключены из исследования из-за немедленных послеоперационных осложнений. Эти 32 животных были потеряны либо из-за кровотечения ( n = 11), либо из-за того, что пересаженная матка не показала кровоток через маточную артерию и / или вену ( n = 21) при немедленном осмотре после сосудистого анастомоза. было выполнено. Эксперименты были одобрены местным комитетом по этике животных и проводились в соответствии с принципами и процедурами, изложенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных (Национальные институты здравоохранения, США).

Донорская операция Донорами матки служили

мышей BALB / c. Изоляцию одного рога матки, включая шейку матки и соединительную сосудистую сеть, проводили, как описано ранее (Racho El-Akouri et al. , 2002, 2003). Причина использования одностороннего рога матки, а не всей матки заключалась в том, что односторонняя процедура позволила изолировать тазовую сосудистую сеть на дорсальной стороне матки (Racho El-Akouri et al., 2002). Вкратце, под анестезией изофлураном (2%) правый рог матки и шейка матки вместе с питающими и дренирующими сосудами (правые маточные сосуды, правые гипогастральные сосуды, правые общие подвздошные сосуды, полая вена и аорта) были аккуратно изолированы с помощью микрохирургической диссекции. Другие ветвящиеся сосуды (правые нижние брыжеечные сосуды, правые нижние надчревные сосуды, левые общие подвздошные сосуды, каудальная артерия, правые наружные подвздошные сосуды, правые половые сосуды и поясничные сосуды) прижигали и разрезали для предотвращения утечки из образца.Мочевой пузырь был удален, и шейка матки была рассечена ниже места ее прикрепления к мочевому пузырю. Затем аорту и полую вену отделяли от уровня разветвления почечных сосудов на 3–4 мм каудально. Лигатуру накладывали краниально на верхушку правого рога матки, и матку отделяли от яйцевода и яичника и отделяли от дорсальной брюшины. Аорта и полая вена были привязаны каудально к разветвлению сосудов яичника, и после канюляции аорты (игла 30 G) и разреза в полую вену образец осторожно промыли 0.154 моль / л NaCl (4 ° C) с добавлением 100 МЕ / мл сульфата гепарина (Leo Pharma, Мальме, Швеция) и 0,2 мг / мл ксилокаина (Astra Zeneca, Гетеборг, Швеция) для удаления крови из матки. Затем матку выдерживали в 0,154 моль / л NaCl (4 ° C) в течение 20 минут во время хирургической подготовки животного-реципиента (см. Ниже) и подготовки пробы на заднем столе.

Операция получателя Реципиентами маточного трансплантата служили

мышей C57BL / 6. Хирургическое вмешательство (под анестезией изофлураном) было выполнено через лапаротомный разрез по средней линии после подкожного введения 15 МЕ гепаринсульфата.Были мобилизованы аорта и полая вена, и кровоостанавливающие зажимы были помещены вокруг сосудов en bloc . Анастомозы «конец-в-бок» аорта-аорта и полость-полость выполнялись с использованием техники прерывистого и непрерывного (нейлон 11-0) швов, соответственно. Затем шейку трансплантата выводили наружу через круговой разрез на правой стороне живота и подшивали к коже для создания стомы. Рубец лапаротомии закрыли и 1 мл раствора, содержащего 0,154 моль / л NaCl и глюкозу (50 мг / мл), вводили подкожно для корректировки потери жидкости и для коррекции любой гипогликемии.

Общая морфология и лазерная доплеровская флоуметрия

Мышь анестезировали и выполняли лапаротомию по средней линии. Первоначально матки и стомы реципиентов исследовали с помощью операционного микроскопа на 2, 5, 10, 15 и 28 день после операции во время анестезии. Затем для оценки кровоснабжения тканей использовался метод лазерной доплеровской флоуметрии (Öberg, 1990). Этот метод ранее использовался для исследования кровотока в яичниках крыс (Zackrisson et al., 2000) и матки мыши (Racho El-Akouri et al. , 2002) в определенное время (см. Выше). Лазерный доплеровский мини-зонд (Perimed, Järfälla, Швеция) помещали в просвет как пересаженной, так и родной матки для регистрации кровотока (расходомер Periflux 5000; Perimed) в течение 2–3 минут. Кровоток выражали в произвольных единицах перфузии (ПЕ).

Световая микроскопия и иммуногистохимия

Мышей убивали из-за смещения шейных позвонков во время анестезии в определенное время (см. Выше).Родная матка и матка с пересаженной маткой были рассечены и рассечены пополам. Одну часть разделенной пополам матки фиксировали в растворе, содержащем 4% параформальдегида в концентрации 0,1 моль / л какодилатного натриевого буфера (pH 7,4). Затем ткань обезвоживали, заливали парафином и делали срезы (~ 4 мкм) для световой микроскопии. Было проведено окрашивание гематоксилином и эозином, эластином – ван Гизоном, ван Гизоном и периодной кислотой – Шиффом. Слайды исследовали под световым микроскопом, и цифровые изображения получали с помощью камеры SPOT ™ (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, США).

Другая половина матки была заморожена в OCT (Sakura Finetek Europe, Zoterwoude, Нидерланды). Эту ткань матки (нативную, трансплантат) 2, 5 и 10 дней после операции делали на срезы (~ 4 мкм), фиксировали в ацетоне в течение 5 минут и затем блокировали 1,5% нормальной кроличьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS; NaCl 0,13 моль / моль / л). л, Na 2 HPO 4 0,015 моль / л, KH 2 PO 4 0,004 моль / л) в течение 30 мин. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч с первичным моноклональным антителом (молекулярный комплекс крысиных антимышиных CD-3; BD PharMingen, Сан-Диего, Калифорния, США) при разведении 1: 1000 в PBS и 1.5% нормальная кроличья сыворотка. После трех промывок в PBS срезы инкубировали в конъюгированном с пероксидазой, биотинилированном, адсорбированном мышами кроличьем антикрысином IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) в PBS и реагенте Vectastain ABC (Vector Laboratories) в течение 30 мин. с последующей инкубацией с субстратом пероксидазы диаминобензидинтетрагидрохлоридом в течение 5 мин. Срезы контрастировали гематоксилином. Отрицательный контроль выполняли путем замены первичного антитела на PBS.

Число положительных клеток оценивали путем подсчета количества окрашенных клеток в выровненной сетке (10 × 10 квадратов), занимающих площадь на участке 0.125 мм 2 с использованием объектива 20 × и окуляра 10 ×. В каждой матке подсчитывали пять случайно выбранных областей в миометрии и пять областей считали в пределах эндометрия (определяемого как область от поверхности просвета до самого базального железистого эпителия). Среднее значение этих значений было вычислено, и это значение использовалось в качестве точки данных. Подсчитывали одну секцию от аборигенной и одну секцию от пересаженной матки от каждого из пяти животных в каждой группе. Подсчет проводился независимо двумя наблюдателями, оба не знали протокола лечения.Значения, полученные двумя наблюдателями, различались не более чем на 15%.

Статистический анализ

Непараметрические тесты (ранговый тест Краскела – Уоллиса, тест Манна – Уитни U -тест) использовались при анализе данных, поскольку мы не предполагали нормального распределения точек данных. Значение P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Общий вид

Общие результаты по внешнему виду представлены в Таблице I.Визуальный и тактильный осмотр пересаженной матки на 2-й день показал общий вид, сходный с таковым у родной матки. Пульсация в аортальном сегменте трансплантата и кровотечение маточной ткани в норме. На 5-й день у большинства пересаженных маток появились признаки отека и изменения цвета на более красноватый (рис. 1а). Пульсация аорты и кровотечение из ткани матки оставались нормальными. Стомы были мягкими и нормального цвета (рис. 1б). На 10-й день все матки были ненормального цвета, с красноватым или черноватым оттенком.Три из пяти маток имели явно более твердую консистенцию, а кровотечение из ткани матки не наблюдалось ни при одном трансплантате. Ни одна из маток не опухла, но две из пяти показали изменение внешнего вида стомы. Полностью ненормальная текстура и опухоль матки были очевидны на 15-й день (рис. 1c). На этом этапе пульсация аорты присутствовала в четырех из пяти трансплантатов, и большинство стом (четыре из пяти) были сморщены, а слизистая оболочка приобрела более темный цвет (рис. 1d). На 28 день размер матки значительно уменьшился, и они, как правило, были беловатого цвета (рис. 1e) и плотной текстуры.Большинство стом показало заметное сжатие (рис. 1f), а пульсация питающей аорты наблюдалась только в одной из пяти пересаженных маток.

Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
Таблица I.

Сводка результатов относительно общего вида пересаженной матки

День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4
День . n . Матка
.
. . . . . . . . . Устьица матки
.
. .
. . Цвет
.
. . . Текстура
.
. Вздутие а
.
. Пульсация
.
. Внешний вид
.
. .
. . Нормальный . красноватый . Черноватый . Беловатый . мягкий . Фирма . Да . Нет . трансплантат . Кровотечение из ткани матки . Мягкий и нормальный цвет . Умеренная усадка и потемнение . Заметная усадка б и побеление .
2 8 8 0 0 0 8 0 0 8 8 8 8 8 8 8 8 8
5 8 6 2 0 0 8 0 1 7 8 8 9027 019 10 5 0 3 2 0 2 3 0 5 5 0 3 2 3 2 5 0 1 4 0 0 5 5 0 4 0 1 4 0
28 5 0 0 0 5 0 5 1 4 1 1 1 1 1 1 4

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Рисунок 1.

Общий вид матки (a, c, e) и стом (b, d, f) на 5 (a, b), 15 (c, d) и 28 (e, f) день ) после трансплантации. А = аорта трансплантата; V = полая вена трансплантата; G = пересаженная матка, N = родная матка; S = стома.

Гистология и плотность Т-лимфоцитов

На 2-й день гистологический вид нативной и пересаженной матки был схожим, с небольшими популяциями воспалительных клеток и минимальным отеком (рис. 2a и b).

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативной (a, e, j) и привитой (b – d, f – i) матки. . В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а). В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка).В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации. Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h).Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

Рис. 2.

Световые микрофотографии (a – f, i, j, × 100; g, h, × 500) нативного (a, e, j) и привитого (b – d, f – i) матки. В родной матке 2-го дня отека нет и мало разрозненных воспалительных клеток (а). В естественной матке 15-го дня (е) наблюдается небольшой отек, но нет определенного увеличения количества воспалительных клеток. В матке с трансплантатом на 2-й день (b) морфология аналогична таковой в родной матке (а).В пересаженной матке на 5 день (c) очевидны отек и воспалительные клетки (стрелка). В эпителии могут быть обнаружены единичные лимфоциты (стрелка). В пересаженной матке на 10 день (d) наблюдается отек сосудов, потеря паренхимы и потеря желез эндометрия. В эпителии обнаружено несколько лимфоцитов (стрелка). В пересаженной матке 15-го дня (е) кровоизлияние и некроз отчетливо видны как явные признаки отторжения. (g, h) Эндометриальная железа (g) и артерия (h) в пересаженной матке через 10 дней после трансплантации.Несколько лимфоцитов (стрелки) видны на эпителиальной стороне базальной пластинки железы эндометрия (g) и прикреплены к эндотелию артерии с эндартериитом (h). Клетки, положительные по CD3 при иммуноокрашивании, показаны в трансплантированной (i) и нативной (j) матке на 5-й день после трансплантации.

На 5 день появились признаки увеличения количества воспалительных клеток в мышечном слое пересаженной матки, а также отек (рис. 2c). Кроме того, разбросанные лимфоциты были обнаружены на эпителиальной стороне базальной пластинки как железистого, так и просветного эпителия.Также наблюдался застой крови в мелких сосудах (в основном венулах) (рис. 2с). Однако не было никаких свидетельств эндартериита артерий или эндотелиалита более крупных вен.

На 10-й и 15-й дни у животных двух групп характерные черты частично совпадали. На 10-й день матка была сильно воспалена по всей стенке матки, и в железистом эпителии присутствовало множество лимфоцитов (рис. 2d, g). Также наблюдался очаговый апоптоз, но в этот момент некроз не был очевиден.Кровеносные сосуды были переполнены, и были признаки эндартериита в более крупных артериях с лимфоцитами, проникающими в эндотелиальный слой в интиму (рис. 2h). На 15-й день четыре из пяти трансплантатов матки показали гистологические признаки тяжелого отторжения с артериальными тромбами и некротической паренхимой (рис. 2f). Один трансплантат на 15-й день имел гистологический вид, аналогичный таковому на 10-й день. Нативная матка 15-го дня (рис. 2е) выглядела слегка отечной, но без какого-либо видимого увеличения воспалительных клеток.На 28 день ни в одной из пересаженных маток не было жизнеспособной паренхимы. Был массивный центральный некроз и только периферический край фиброзной ткани.

Плотность Т-клеток в миометрии (Рисунок 3a) и эндометрии (Рисунок 3b) была выше в пересаженной матке (Рисунок 2i) по сравнению с нативной маткой (Рисунок 2j) со 2-го и 5-го дня, соответственно. Не было зависимых от времени изменений плотности Т-клеток в миометрии или эндометрии в естественной матке (рис. 3a, b).Однако плотность Т-клеток как в миометрии, так и в эндометрии в пересаженной матке была значительно выше на 5-й и 10-й день по сравнению со 2-м днем ​​(рис. 3a, b).

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и родной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = значимо ( P <0.05, P <0,01) выше, чем у уроженца того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Рисунок 3.

Плотность Т-лимфоцитов в миометрии (а) и эндометрии (б) трансплантированной и нативной матки на 2, 5 и 10 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0.01) выше, чем уроженец того же дня. c, d = достоверно ( P <0,05, P <0,01) выше, чем на 2-й день пересаженной матки.

Кровоток

Кровоток был значительно ниже в пересаженной матке по сравнению с естественной маткой во все моменты времени (рис. 4). Не было значительных зависимых от времени изменений кровотока в родной матке. В пересаженной матке наблюдалось значительное изменение кровотока с более низкими уровнями на 15 и 28 дни по сравнению со 2 и 5 днями.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по оценке с помощью лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2 и 5 дней.

Рис. 4.

Кровоток (PU = единицы перфузии) в нативной и пересаженной матке по данным лазерной допплеровской флоуметрии на 2, 5, 10, 15 и 28 дни после трансплантации. Столбцы указывают диапазон 10–90%, прямоугольники указывают диапазон 25–75%, а точки указывают медианы. a, b = достоверно ( P <0,05, P <0,01) ниже, чем у уроженца того же дня. c = значительно ( P <0,01) ниже, чем пересаженная матка 2-го и 5-го дней.

Обсуждение

Чтобы создать подходящую модельную систему для фундаментальных исследований по вопросу трансплантации матки, мы разработали модель мыши с использованием микрохирургического сосудистого анастомоза и гетеротопического размещения пересаженной матки параллельно родной контрольной матке (Racho El-Akouri et al., 2002). В последнем исследовании хирургическая техника была разработана и отработана с использованием инбредных мышей (B6 CBAF1) в качестве донора и реципиента, а трансплантированная матка показала способность вынашивать беременность (Racho El-Akouri et al. , 2002) и дают потомство с нормальной траекторией постнатального роста (Racho El-Akouri et al. , 2003). В совокупности эти первоначальные исследования продемонстрировали возможность использования этой модели в исследованиях по развитию трансплантации матки в качестве клинической процедуры лечения маточного бесплодия.В настоящем исследовании мы охарактеризовали механизмы отторжения, сделав наблюдения на нескольких уровнях в полностью аллогенной модели трансплантации матки у мышей.

Использовали полностью аллогенную модель мышей с мышами линии BALB / c в качестве доноров матки и мышами линии C57BL / 6 в качестве реципиентов. Причина использования мышей C57BL / 6 в качестве реципиентов заключалась в том, что этот штамм является фоновым штаммом, используемым для развития большинства нокаутных и трансгенных мышей. Мы ожидаем, что эти нокаутные или трансгенные мыши будут использоваться в будущих исследованиях, направленных на более детальное изучение механизмов отторжения в пересаженной матке или в экспериментах по физиологии беременности.Более того, наши предыдущие эксперименты, включающие сингенную трансплантацию, были выполнены на гибридах F1 линии реципиента настоящего исследования, мышей C57BL / 6 и CBA (Racho El-Akouri et al. , 2003). Штамм мышей-доноров (BALB / c), использованный в настоящем исследовании, представляет собой линию мышей-альбиносов, которая наиболее широко используется в биомедицинских исследованиях (Potter, 1985).

Главный комплекс гистосовместимости (MHC) мыши, H-2, имеет свои генетические локусы на хромосоме 17 и гомологичен HLA у человека.Гаплотипы комплекса H-2 определяются комбинацией аллелей генов класса I, класса II и класса III (Klein et al. , 1983). Гаплотипы H-2 мышей BALB / c и C57BL / 6 обозначены как H-2 d и H-2 b соответственно. Эти два гаплотипа демонстрируют несходство по всем аллелям, кроме одного (локус Q1 класса Ib). Таким образом, почти полностью аллогенная ситуация, выбранная в настоящем исследовании, будет соответствовать клинической ситуации донора и реципиента с несоответствием MHC как по основным, так и по второстепенным локусам MHC.

Модель мыши для трансплантации органов становится все более популярной благодаря достижениям в микрохирургии и молекулярной биологии. Однако знания о паттернах отторжения в этих мышиных моделях ограничены. В экспериментах с трансплантацией сердца, почек, печени и кишечника между разными линиями мышей оценивали мышей C57BL / 6 как доноров и мышей BALB / c как реципиентов (Zhang et al. , 1996). Это противоположная ситуация по сравнению с настоящим исследованием, и оценка BALB / c в качестве донора и C57BL / 6 в качестве реципиента не проводилась.В исследовании Zhang et al., Спонтанное принятие было замечено в 72 и 20% аллотрансплантатов печени и почек соответственно. Однако аллотрансплантаты сердца и кишечника были отвергнуты примерно через 9 дней. Результаты были аналогичными, когда BALB / c использовались в качестве доноров для мышей CBA. В исследовании с использованием ортотопической трансплантации каротидных аллотрансплантатов для проверки эффектов иммунодепрессантов мышей C57BL / 6 и BALB / c тестировали как доноры, так и реципиенты (Matsumoto et al. , 2004). Было показано, что отторжение реципиентов C57BL / 6 не подавлялось иммунодепрессантами в такой степени, как у реципиентов BALB / c.Взятые вместе, эти данные показывают, что такой орган, как сердце, который похож на матку в своем большом содержании мышечной ткани, будет отторгнут в течение более короткого времени, чем 9 дней, когда использовались доноры BALB / c и реципиенты C57BL / 6. . Это время отторжения несколько короче, чем то, что было обнаружено в настоящем исследовании в отношении матки.

В настоящем исследовании довольно большая часть животных была исключена из-за немедленных послеоперационных осложнений. Скорее всего, это следствие технически очень сложной диссекции и микрохирургии, связанной с этой процедурой.Неудачи, скорее всего, не были связаны с так называемым иммунологически опосредованным сверхострым отторжением, поскольку аналогичная часть мышей с неудачными трансплантатами наблюдалась в нашем предыдущем исследовании с использованием сингенной модели (Racho El-Akouri et al. , 2003). В ходе исследования было обнаружено, что манипуляции с трансплантатом и время теплой ишемии необходимо было сократить до минимума, чтобы предотвратить эти осложнения.

Макроскопический вид пересаженной матки в настоящем исследовании регистрировали как в отношении слизистой оболочки шейки матки (конец устьиц), так и в отношении внешнего вида серозной поверхности внутри брюшной полости.Первыми очевидными признаками отторжения были припухлость и изменение цвета, которые можно было увидеть только на 5-й день в брюшной полости. Это время соответствует первым гистологическим признакам воспаления. Эти результаты ранних макроскопических признаков отторжения сравнимы с тем, что сообщалось ранее для сердечных аллотрансплантатов крыс, с отеком, наблюдаемым примерно на 4-й день (Hayashi et al. , 1991). Точно так же аллотрансплантаты матки у собак были опухшими и гиперемическими на 4–5 дни (Wingate et al., 1970).

Макроскопические изменения, которые наблюдались в стоме маточного аллотрансплантата, довольно хорошо коррелировали с макроскопическим внутрибрюшным внешним видом, а также с гистологическими признаками отторжения. Первый макроскопический признак отторжения, наблюдаемый в стоме, был на 10-й день, когда наблюдалось заметное увеличение плотности Т-клеток как в эндометрии, так и в миометрии. Таким образом, экстериоризованный шейный конец матки можно удобно использовать для оценки жизнеспособности органа и различных фаз отторжения трансплантатов.Похожая ситуация присутствует в недавно разработанной мышиной модели трансплантации тонкой кишки (He et al. , 1998; Dindelegan et al. , 2003) с аналогичной кожной стомой. Стома также позволит неинвазивным способом получить биопсию из органа для более детальной оценки отторжения с помощью гистологии или иммуногистохимии.

Отторжение пересаженной матки стало макроскопически более очевидным со временем, когда матка стала более черноватой по цвету с полностью ненормальной текстурой.Стомы стали более темными и уменьшились в размерах. На срезах тканей повышенная инфильтрация воспалительных клеток, эндартериит и артериальные тромбы с некротической паренхимой наблюдались на 10-й и 15-й дни. Эти результаты соответствуют тяжелому острому отторжению и аналогичны результатам сердечных аллотрансплантатов на 8-15-й день (Zhang et al. др. , 1996; Ридерер и др. , 2002). Выживаемость аллотрансплантата и тяжесть отторжения зависят не только от несоответствия MHC, но также от конкретного органа, который пересаживают.Таким образом, у мышей наблюдается спонтанное принятие пересаженных печени и почек (Zhang et al. , 1996). С этой точки зрения кажется, что сердце и матка похожи, без спонтанного принятия и с одинаковым временем фаз отторжения.

Эндометрий является частью общей иммунной системы слизистых оболочек, которая обладает особыми характеристиками, обеспечивающими иммунологическую толерантность к сперме и зачатию, при активной защите матки от патогенных бактерий и вирусов.Гистологическое исследование в настоящем исследовании показало, что отторжение эндометрия происходит быстрее, чем отторжение миометрия. Таким образом, ранняя инфильтрация лимфоцитов наблюдалась в железах эндометрия, тогда как инфильтрация лимфоцитами происходила позже в миометрии. Миометрий оказался наиболее устойчивым к отторжению и дольше всех сохранял свою тканевую структуру. Эти результаты сопоставимы с результатами исследования аллотрансплантированной матки, проведенного на собаке (Scott et al., 1970), в котором пересаженная матка показала тотальный некроз эндометрия, но только мононуклеарную инфильтрацию и выраженный отек миометрия через 2 недели после трансплантации. Механизмом раннего отторжения эндометрия, скорее всего, является ранняя инвазия лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение Т-лимфоцитов в эндометрии уже на 2-й день. сравнение пересаженной матки с родной маткой во всех временных точках.В нашем предыдущем исследовании на модели сингенных мышей (Racho El-Akouri et al. , 2002) мы не смогли продемонстрировать каких-либо различий в кровотоке при оценке через 2 и 4 недели после операции. Вполне возможно, что кровоток в этих сингенных трансплантатах был ниже в течение первых недель после трансплантации, а затем кровоток увеличился до уровней, аналогичных таковому в собственной матке. Объяснение этой нормализации кровотока в сингенном трансплантате может заключаться в том, что резко сниженный кровоток из-за отсутствия кровотока в маточных ветвях яичниковой артерии медленно компенсируется кровотоком из маточной артерии.В аллогенной модели настоящего исследования события раннего отторжения будут препятствовать нормализации кровотока и в конечном итоге привести к уменьшению кровотока. Однако в трансплантатах тонкой кишки на мышиной модели не наблюдалось уменьшения кровотока после сингенной трансплантации при оценке с 1 по 8 день, но снижение наблюдалось в аллогенных трансплантатах с 3 дня (Dindelegan et al. , 2003) .

Гистологическим коррелятом этого снижения кровотока в матке, естественно, являются основные периваскулярные изменения, которые наблюдались примерно с 15 дня.Кроме того, тромбоз был замечен в отторженных трансплантатах после аллотрансплантации матки собаке (Wingate et al. , 1970). В этом исследовании тромбоз в основном наблюдался в крупных и средних артериях и венах с 3 по 28 день после трансплантации.

В заключение, аллотрансплантаты матки показывают ранние признаки отторжения с 5-го дня и тяжелое отторжение с 10-го по 15-й день после трансплантации. Паттерн отторжения этой мышиной модели довольно однороден, в отличие от нескольких комбинаций мышиного штамма трансплантации почек, которые показали как спонтанное принятие, так и отторжение (Zhang et al., 1996). Паттерн отторжения матки на мышиной модели, по-видимому, больше всего похож на паттерн трансплантации сердца.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энн Валлин, кафедру акушерства и гинекологии, Академию Сальгренска при Гетеборгском университете, за техническую помощь. Исследование было поддержано грантами Шведского исследовательского совета (№ 11607), медицинского факультета Академии Сальгренска и Исследовательского фонда Ялмара Свенссона.

Список литературы

(

2003

) Трансплантация матки.

Mt Sinai J Med

70

,

154

–162.

, Эль-Акури, Р.Р. и Враннинг, Калифорния (2003a) Трансплантация матки.

евро J Obstet Gynecol Reprod Biol

109

,

121

–123.

, Wranning CA и Racho El-Akouri R (2003b) Трансплантация матки.

Эндокринол клеток Mol

202

,

177

–184.

, Vermesh M, Thomas W. Jr и Gleicher N (

1986

) Несосудистая трансплантация матки кролика.

Int J Gynaecol Obstet

24

,

321

–325.

, Liden H, Kurlberg G, Oltean M, Nilsson O, Aneman A, Lycke N и Olausson M (

2003

) Лазерно-допплеровская флоуметрия надежна для ранней диагностики острого отторжения тонкой кишки у мышей.

Микрохирургия

23

,

233

–238.

, Раффа Х, Джаббад Х.и Marzouki A (

2002

) Трансплантация матки человека.

Int J Gynaecol Obstet

76

,

245

–251.

, Nozawa M, Otsu I., Deguchi H, Kitaura Y и Kawamura K (

1991

) Клеточно-опосредованная цитотоксичность при остром отторжении сердечного аллотрансплантата крысы: иммунологическое и ультраструктурное исследование.

Арка Вирхова Патол Анат Гистопатол

418

,

41

–50.

, Hart J, Thistlethwaite JR Jr и Newell KA (

1998

) Модифицированная хирургическая модель паратопической трансплантации тонкой кишки у мышей.

J Surg Res

80

,

188

–193.

, Lupu CM, Zoica BS и Ionac M (

2003

) Экспериментальная модель гетеротопической трансплантации матки у лабораторных крыс.

Микрохирургия

23

,

246

–250.

, Фигероа Ф. и Дэвид К.С. (

1983

) Гаплотипы, гены и антигены H-2: второй список. II. Комплекс Н-2.

Иммуногенетика

17

,

553

–596.

, Мао Л., Ван И, Д’Сильва М., Ю Ч., Вольф П., Чанг В.С., Такахаши Э., Чунг Д.Й. и Гиттес РФ (

1995

) Трансплантация репродуктивных органов.

Микрохирургия

16

,

191

–198.

, Hof A, Baumlin Y, Muller M и Hof RP (

2004

) Дифференциальные эффекты эверолимуса и циклоспорина A на динамику альфа-актин-положительных клеток интимы каротидных аллотрансплантатов у мышей.

Трансплантация

78

,

345

–351.

, Джига Л., Ионак М., Райка М., Моток М. и Чиовски С. (

2003

) Предварительные результаты ортотопической трансплантации матки en bloc и яичников у лабораторных крыс.

Clin Exp Obstet Gynecol

30

,

239

–242.

(

1990

) Лазерно-доплеровская флоуметрия. Crit Rev

Biomed Eng

18

,

125

–163.

, Гал Д., Барзилай А., Хампель Н. и Мальбергер Э. (

1975

) Половые органы. Авто- и гомотрансплантация у сорока собак.

Int J Fertil

20

,

5

–12.

(

1985

) История семейства BALB / c.

Curr Top Microbiol Immunol

122

,

1

–5.

R, Kurlberg G, Dindelegan G, Mölne J, Wallin A и Brännström M (

2002

) Гетеротопическая трансплантация матки с помощью сосудистого анастомоза у мыши.

Дж Эндокринол

174

,

157

–166.

R, Kurlberg G и Brännström M (

2003

) Успешная трансплантация матки мыши: беременность и постнатальное развитие потомства.

Hum Reprod

18

,

2024

–2030.

, Сильва-Барбоса С.Д., Родригес М.Л. и Савино В. (

2002

) Местное лечение антиламининовыми антителами изменяет характер отторжения сердечных аллотрансплантатов мыши: корреляция между клеточной инфильтрацией и внеклеточным матриксом.

Трансплантация

74

,

1515

–1522.

, Андерсон В.Р., Клинг Т.Г. и Янноне М.Э. (

1970

) Трансплантация матки собакам.

Gynecol Invest

1

,

140

–148.

, Питкин Р.М. и Янноне М.Э. (

1971

) Трансплантация матки приматов.

Surg Gynecol Obstet

133

,

414

–418.

, Карасевич Э., Вингейт Л., Лаучиан С. и Рэй М. (

1970

) Экспериментальная гомотрансплантация маточно-кубовариальной оболочки на собаке.

Am J Obstet Gynecol

106

,

1171

–1176.

, Du Sold WD и Deliman RM (

1969

) Гомотрансплантация матки и яичников собакам. Предварительный отчет.

Am J Obstet Gynecol

104

,

1143

–1151.

, Mikuni M, Peterson MC, Nilsson B, Janson PO и Brännström M (

2000

) Доказательства участия механизмов, связанных с кровотоком, в овуляторном процессе у крыс.

Hum Reprod

15

,

264

–272.

, Zhu L, Quan D, Garcia B, Ozcay N, Duff J, Stiller C, Lazarovits A, Grant D и Zhong R (

1996

) Характер отторжения аллотрансплантата печени, почек, сердца и кишечника у разных линий мышей комбинации.

Трансплантация

62

,

1267

–1272.

Заметки автора

1 Кафедра акушерства и гинекологии, 2-я кафедра хирургии и 3-я кафедра патологии, Академия Сальгренска, Гетеборгский университет, Гетеборг, Швеция

© Автор 2005.Опубликовано Oxford University Press от имени Европейского общества репродукции человека и эмбриологии. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

Паттерны отторжения при аллогенной трансплантации матки у мышей

Фон: Трансплантация матки мыши была разработана как модельная система для исследования трансплантации матки человеку.Предыдущие исследования на мышиной модели продемонстрировали, что трансплантат сингенной матки может дать нормальное потомство. Целью этого исследования было охарактеризовать динамику отторжения в полностью аллогенной модели трансплантации матки мыши.

Методы: Матки мышей BALB / c трансплантировали в гетеротопическое положение реципиентам C57BL / 6, у которых нативные матки оставались in situ.Кровоток маток, их общий вид и общую гистологию, а также плотность Т-лимфоцитов исследовали на 2-28 сутки после операции.

Полученные результаты: Макроскопические признаки отторжения были очевидны с 5-го дня. На уровне световой микроскопии минимальные воспалительные изменения наблюдались с 5-го дня, а массивное воспаление наблюдалось с 10-го по 15-й день. На 28-й день наблюдались некроз и фиброз.Плотность Т-лимфоцитов (CD3 (+)) увеличивалась в пересаженной матке со 2-го дня в миометрии и с 5-го дня в эндометрии. Кровоток в пересаженной матке снизился с 15-го дня.

Заключение: Была охарактеризована мышиная модель для изучения отторжения аллогенных трансплантатов матки. Признаки отторжения наблюдались со 2 по 5 день, а тяжелое отторжение — с 10 по 15 день.Эти данные будут полезны в будущих исследованиях иммунодепрессантов в этой модели.

Первые роды от умершей донорской матки в США: от тяжелого отторжения трансплантата до успешного кесарева сечения

Трансплантация матки — единственное известное потенциальное лечение абсолютного бесплодия маточного фактора. Он предлагает уникальные условия для исследования иммунологической адаптации беременности в контексте фармакологической толерантности трансплантатов твердых органов, что дает ценную информацию о раннем взаимодействии матери и плода.До недавнего времени все живорожденные в результате трансплантации матки происходили от живых доноров, и только один ребенок родился до этого от умершего донора. Клинические испытания трансплантации матки в Cleveland Clinic начались в 2015 году. В 2017 году 35-летняя женщина с врожденным отсутствием матки была сопоставлена ​​с 24-летним родившимся умершим донором с мертвым мозгом. Трансплантация матки проводилась с вагинальным анастомозом и сосудистыми анастомозами с двух сторон от внутренних подвздошных сосудов донора до внешних подвздошных сосудов реципиента.Индукционная и поддерживающая иммуносупрессия была достигнута и впоследствии модифицирована в ожидании беременности через 6 месяцев после трансплантации. Перед запланированным переносом эмбриона биопсия эктоцервикала выявила изъязвление и значительный диффузный инфильтрат смешанных воспалительных клеток, богатый плазматическими клетками, при этом гистология интерпретировалась как отторжение 3 степени, подозрительное на опосредованный антителами компонент. Был начат агрессивный иммуносупрессивный режим, направленный как на клеточное, так и на гуморальное отторжение. После 3 месяцев лечения не было гистологических свидетельств отторжения, а через 3 месяца после полного устранения отторжения был проведен перенос эмбрионов без осложнений и была установлена ​​беременность.На 21 неделе диагностировано центральное предлежание плаценты с приращением. Здоровый новорожденный был доставлен путем кесарева сечения гистерэктомии на сроке беременности 34 недели. Таким образом, в этой статье освещаются первые живые роды в Северной Америке в результате трансплантации матки от умершего донора. Это достижение подчеркивает способность пересаженной матки восстанавливаться после тяжелого длительного отторжения и при этом производить жизнеспособного новорожденного. Это первые результаты нашего продолжающегося клинического исследования по трансплантации матки, включая первые зарегистрированные случаи тяжелого смешанного клеточного / гуморального отторжения, а также первое зарегистрированное приращение плаценты.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *